3.1 Биохимические методы получения накопительных культур

Органические кислоты как субстрат для бактерий рода Pseudomonas

Некоторые виды рода Pseudomonas, относящиеся к аэробам, можно получить в виде накопительных и чистых культур, используя их способность расти на среде с нитратом как источником азота, а также с солями различных органических кислот в качестве источников углерода и энергии.

Триптофан как субстрат для псевдомонад

Для получения накопительной культуры псевдомонад, способных использовать триптофан как единственный источник углерода и азота, в колбу Эрленмейера на 250 мл с 40 мл триптофановой среды вносят 0.1 г почвы. Состав среды с триптофаном (г/л):

MgSO4  7H2O	- 0.2,	CaCl2	- 0.02;
K2HPO4	- 1.0,	NaMoO4  2H2O	- 0.001;
MnCl2  4H2O	- 0.002,	триптофан	- 1.0;
FeSO4  7H2O	- 0.05,	дистиллированная вода

Смесь инкубируют на качалке в течение 5-7 дней при 25 С. 0.1 мл культуры переносят в другую колбу со средой и инкубируют 2-3 дня. После следующего серийного пересева полученную чистую культуру рассевают штрихом на триптофановую среду с агаром (15 г/л). После трех дней инкубации делают посев из отдельных колоний на агаровые косяки.

Разбавленная среда для получения культур каулобактеров

Каулобактеры представляют собой стебельковые бактерии, способные расти на средах с малым содержанием питательных веществ, которые не обеспечивают рост большинства других микроорганизмов.

Пробы воды из прудов, озер или даже водопроводной с добавлением пептона используют в качестве элективных сред. Для получения накопительной культуры в колбы внести воду из аквариума и добавить 0.01% пептона. Колбы закрыть неплотно бумагой или алюминиевой фольгой и инкубировать при 20-25 С. После появления стебельковых бактерий (обычно на 4-й день) – 1 клетка на 10-20 других – сделать посев из поверхностной пленки в чашки с агаровой средой, приготовленной на водопроводной воде с 0.05 % пептона, и затем инкубировать их при 30 С. В условиях низкого содержания пептона обеспечивается рост мелких колоний каулобактера, но ингибируется рост других бактерий. Примерно через 4 дня (или более) исследованные с помощью препаровальной лупы кусочки среды с микроколониями каулобактера перенести в чашки со средой, содержащей

0.2% - пептона, 0.1% - дрожжевого экстракта,

0.02% - MgSO₄  7H₂O, 1.0% - агара.

Через 2 дня приготовить витальные препараты и отдельные колонии пересеять с агара в чашки со свежей средой.

Приготовление дрожжевого экстракта. Водную взвесь (10%-ю) из сухих дрожжей или 30%-ю - из прессованных хлебных кипятить 1 ч, оставить в течение суток на холоде, жидкий слой декантировать, профильтровать через бумагу и прогреть при 120 С 30 мин, после чего неоднократно профильтровать до получения совершенно прозрачного фильтрата, который простерилизовать при 0.5 атм. 30 мин.

Получение накопительной культуры галофильных

микроорганизмов

В пробирку с мясо-пептонным бульоном, содержащим 10%-й NaCl, вносят бактериологической петлей кусочек соленой сельди размером со спичечную головку. Пробирку закрывают ватной пробкой и помещают в термостат при 25-30 С. Через 7 дней делают пересев 0.1 мл культуры в мясо-пептонный бульон с 10%-ым NaCl и культивируют 3-5 дней. Чистую культуру получают рассевом накопительной культуры на агаризованный МПБ с 10%-м NaCl.