Шпора по вирусам

1.Отличия вир от др инфекц агентов и черты их сходства.

Отличия:1)Ген.мат мб как ДНК,так и РНК (грипп,бешенство).Они мб как 1- так и 2-х спиральные,м иметь ДНК в виде кольца. РНК мб фрагментирована. 2)Отсутствие собственной белоксинтезир. сист. и отсутствуют энерг-ие сист.(митохондрии).

3)Иной у-нь паразитизма,чем у бакт-й. Он на ген.ур-не: вир-й геном подавляет действие генома к-ки.(сем-воРетровирусов интегрирует(встраивается) геном кл-ки-он наз-ся провирусом,но может вырезаться из генома и сущ-ть отдельно от кл-ки под д-ем УФ,рентген-х лучей).4)Вир размн-ся только в живых кл-х5)Способ размнож.-разобщенный(дизъюнктивный): 1-в ядре, др-в цитоплазме; разобщено в простр-ве и во времени(сначала белок,потом еще что-то),а затем идет сборка. Сходство:1)Способны к размножению2)Вир облад. наследств. 3)Облад. изменчив. 4)Хар-ся как и др орг-мы приспос-тью к усл. внешней среды(через орг-м хозяина)5)Вир эволюционируют,и движ-й силой эволюции явл ест-й отбор(коллективный специф-й иммунитет) 6)Моделиров-ем ест-го отбора явл-ся искусств-й отбор.

2.Вирионы вир, их стр-ра и хим состав.

Вирион-зрелая вирусная частица (покою-щееся сост).Молекулярная масса вирионов выр-ся в Дальтонах (Д) или кД Размер вирусов (нм = мкм)-самые крупные вирионы оспы(340-360нм), самые мелкие- ящура(25-30нм) Внутри - нах-ся ДНК или РНК, закл-ая в белковую оболочку-капсид(сост из капсомеров). Капсомер предст-ет 1 или неск-ко белков, закад-х в геноме вируса. В сост вириона вход.жиры, белки,углевоы. Они мб в комплексе- гликолипиды, липо-протеиды, гликопрот и фосфопрот.Эти компоненты вход.в сост суперкапс-й оболочки(клет-го происх-ия). Вирусы быв простые(нукл к-та+белок-капсид) и сложные(нукл к-та+капсид+ суперкапс об-ка ).

Вирионы бывают 3-х типов симметрии: 1)Кубический(форма икосаэдра-20ти гранник:23 плоскости,12 вершин,30 ребер; предст-аденовир)

2)Трубчатый-нукл к-та нах-ся на равном раст от краев(вир табачной мазаики) 3)Сложный-у вируса с большим геномом (вир оспы)-форма параллелепипеда(до 200 белков), герпесвир,аденовир,поксвир4)Бактериофаги (пораж бакт)- Т-клеточные фаги(ДНК сод вирусы).Сост из головки (предст икосаэдром) и отростка(в виде винта)=>кубич и трубч тип симметрии. Своими фибриллами присоед-ся к бакт. Его ДНК рап в головке.Он ее впрыскивает и бакт кл-ка погибает.

3.Нукл кислоты вир и к-к, их сходства, различия и ф-ции.

Нукл к-ты-линейные полимеры,сост из отдельных стр-р,кот носят назв нуклеотиды(до неск-х тысяч в 1 мол-ле)

Нуклеотид сост из:1)остатка фосфорной к-ты;2)сахара(рибоза-РНК, дезоксирибоза-ДНК)-пятиуглеродный;3)азотистое основание.

Азотист основ ДНК:Тимин(Т),Аденин(А), Цитазин(Ц),Гуанин(Г)

Азотист основ РНК:Урацил(У),А,Ц,Г

ДНК от РНК отл-ся 1 азот осн-м и сахаром

2х спиральн ДНК:в 1953г амер биохимик Чаргафф заметил,что в 2х спир-й ДНК м/ду азот-ми основ-ми образ-ся пары: Т-А, Г-Ц,и кол-во Т=А,а Г=Ц-принцип компле-ментарности.

Все жив орг-мы сод-т 2х спир-ые ДНК и 1-спир РНК.Но вир м сод-ть как 2х,так и 1-спир ДНК(как линейные,так и кольцевые). РНК-1- и 2х спир-ые(линейные и кольцевые).Мб РНК фрагментировано(вир гриппа-8 фрагментов).

Ф-ции:хронитель наследственной информации.

25.Для чего нужны парные сыв-ки?

Парные сыв-ки исп-ся для док-ва этиологич-й роли выд-го вируса и ретроспективной диагностики с исп-ем серологич-х р-ий(РН,РСК,РТГАд,ИФА, РИФн).Сыв-ки Бер-ся 1-в первые дни заболевания,а 2-на конечном этапе.

Док-во этиол-й роли:

Аг выд вир+Sx₁

Аг выд вир+Sx₂

TSx₂>=TSx₁(в 4 и более раз)

Ретроспект диагн-ка:

AS(д.н.)+ Sx₁

AS(д.н.)+ Sx₂

TSx₂>=TSx₁(в 4 и более раз)

15.Интерферон,его образ-ие,роль и противовир д-ие.

При первичных вирусных инфекциях основную роль при выздоровлении играют кл. факторы иммунитета, одним из которых явл. интерферон. По своим хим. св-вам интерферон явл. белком, который сост. из группы низкомоле-кулярных белков. Интерферон подавляет размножение самых различных вирусов, не имеет видовую специфичность. Он не токсичен для клеток организма, не имеет сенселебирующего действия, что позволяет его многократно вводить в организм, для профилактики или терапии. Продуцировать интерферон в ответ на внедрения вируса обладают все кл. организма, но наиболее активно продуцируют лимфоциты и кл. селезенки. Интерферон не оказывает посредственное воздействие на вирус. Антивир д-ие ИФН не связано с синтезом какого-то нового белка,а проявл-ся в увел-ии акт-ти ряда ключевых ферментов клет-го обмена в-в(протеинкеназы и синтетазы)=>блок-ся стадии инициации и трансляции=>разр-ие вир-ой иРНК

17.Противовир Ат,их образ-ие,роль в орг-ме и осн св-ва.

Осн исполнители:макрофаги,Т- и В-лимф-ты.

Возникнув из общей исходной стволовой кл-ки проходят дифференцировку: Т-лимф в тимусе;В-лимф.Затем циркул-ют в крови до появл чужеродного агента. Зрелые В-лимф заселяют селезенку,лимф узлы.

После встречи с чужер-м агентом нач-ют реализов-ть защ ф-ции =>усиленно размнож-ся Т-килеры.В-лимфоциты превр-ся в плазмо-тические,кот синтез-т Ат(IgM,G,A).Др В- и Т-лимфоциты превр-ся в кл-ки памяти,кот н спос-ны к выр-ке Ат,но они быстро распознают Аг при повторном его поступлении в орг-зм.Они нач-ют делиться и секретируют Ат.

Разл-ют 2 вар-та гумор-го им-та: по первичому и вторичному им-му ответу

Перв-й им-й ответ:

1)Биосинтез Ат происх-т после латентного пер-да,прод-ся 3-5 дней

2)Скор-ть синтеза т повышена

3)Титр Ат не дост-ет макс-го значения

4)Первыми синтез-ся IgM,а затем G и A.

Вторичный им-й ответ(раб-т Кл-ки памяти):

1)Латентн период в теч неск-х часов

2)Скор-ть синтеза Ат имеет лагорифм-й хар-р

3)Титр имеет макс знач

4)Сразу синтез-ся IgG

Все иммунокомпет-ые кл-ки несут на своей пов-ти уникальные рец-ры,с пом кот они распознают и восприн сигналы от др иммунных кл-к(медиаторы-интерлейкины).

7.Методы культивир-ия вир в лаб-ях и на биофабриках.

Лаб жив:бел мыши и крысы,кролики, хомячки,мор свинки.

Требования:1)получ из питомников, благопр по инф заб-м;2)соотв-ть по виду и возр-ту опред-мы вир;3)их сод-т в спец помещ-вивариях;4)при зараж жив-х метят

КЭ:нельзя пол-ть специф картину забол-я.

Получ-т из благопол-х птицеф-к от здорового пог-я.Скорлупа дБ чистая,ср размеров,однозарод,бел цвета.

КК-кл-ки многокл орг-в,жив-ие и размн-ся вне орг-ма.

3 вида:

1)Первично трипсинизированные культ-ы- полученные непоср-но из орг-ма.(почка, печень,легкие)-монослой(растет в 1слой), те Кл-ки др на др не наползают

2)Диплоидные к-ры-получ из первичных. М пройти 50+-10 пассажей;диплоидный набор хромосом.

3)Перевиваемые к-ры-были пол-ны из первичных.Их можно перевив из флакона во флакон;неогран-ое кол-во пассажей.Имеет гетероплоидный набор хромосом.Некот м обладать онкогенной активностью-опухоли.

СОЦ-сердце обезьяны цикомольгус

Vero-почка зел мартышки

ПЭК-почка эмбр коровы

ЛЭК-легкие эмбр коровы

Таурус1-почка быка.

18.Инактивир противовир вакц,их получение ,св-ва,примен и отличие от живых.

-наработка вирус содержащего материала с использованием з-лых полевых шт-в.

-инактивация вируса-разр-ют геном,но не белки,те Аг-свойства (формалин, бета-пропиолактон, препараты азадинового ряда, температура, УФ, гамма-лучи, сульфат меди).

-Добавление адьюванта в инактивтро-ванную вакцину для увелич активности. Адьювант адсорбирует на своей поверх-ности частицы разрушенного вируса (сорбент-адьюванты: гидрат окиси Al,соламин,линолин или масляные).

-Добавление сапонинов для супер-раздражающего действия при в/м и п/к инъекциях. Применяют в очень малых концентрациях для образования воспале-ния в месте введения.

Недостатки(преим-ва-безвредны д жив-х)

-кратковрем созд им-та(до 6мес)

-необх повторить(через 2-3нед)в значитV

-малая транспортабельность

-исп-ть «на игле»-индивид применение

-более сложные по составу

9.Осн требов к раб с вируссод-ми мат-ми,чем они обусловл и как их вып-ть.

1.Не допускать рассеивания вируса в окружающую среду(не сливать в канализ-ию).

2.Не допускать контаменации (загряз-нения) вирус содержащего материала бактериями и грибами(раб-ть над пламенем горелки стерильн инстр и стерильной посудой).

3. Личная безопасность.

Для выполнения этих треб. необходимо собл. след. правила работы:

1)Наглухо застегнутый халат.

2)В лаб-ии не принимать пищу и воду. 3)Чистота и порядок на раб. месте, не должно при работе быть лишних предметов.

4)Работать сидя, не отвлекаясь. 5)Переливать жидкий вирус только над дизенфецир. жидкостью.

6)не брать пипеток в рот, пользоваться грушей.

7)Использ. предметы собирать в стерилизатор.

8)Запр. выносить ПМ за пределы ауд. 9)При разлитии исл. материала сообщить преподавателю для проведения дезинфекции.

10)После работы привести в порядок раб. место.

13.Мет обнар вир в пат мат.

Индикация вируса в патологическом материале.

1. Обнаружение – световая микроскопия крупных вирусов (Poxviridae), электронная микроскопия.

2. Обнаружение телец-включений. (тельца Бабеше-Негри при бешенстве)

3. Обнаружение вирусных антигенов: серологические реакции.

4. Обнаружение вирусных НК (ДНК-зонды и ПЦР – полимеразно-цепная реакция).

5. Обнаружение активной формы вируса путем биопробы (лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток).

6. Обнаружение гемаглютининов у гемаглютинирующих вирусов (в настоящее время практически не используется по причине наличия более точных методов).

11.Мет-ды освоб-ия от вир предм и мат-в.

IВоздействие физических факторов:

1)Д-ие температуры: Т=100С-гибнет за неск-ко секунд(кипячение)-кипятят мет-ие инстр-ты;в стерилиз-ах 15-20 мин

Фламбирование-прожигание над пламенем горелки

Сухой жар: сухожарный шкаф Т=160-180С(прокаливают посуду)

Автоклавирование:для стерилиз посуды, халатов,растворов Т=200С(текучий пар,давл 2атм)

УФ лампы(БУВ-15;30)-1час в боксе

УЗ-неск-ко секунд

II Воздействие хим-х факторов:

1)Исп-ие разл-х щелочей в качестве дез р-ра: NaOH, KOH (3-5%) для пипеток после вируса-неск-ко часов.

2)Карболовая к-та,лизол,молочная к-та, перекись водорода(Н₂О₂)

12.Мет консерв вирусов и их практич значение.

IВоздействие физических факторов:

1)Д-ие температуры-хронить в холод-ке:

Т=4С до 1 месяца

Т=-10С до 1 года

Т=-25С до 2х лет

Т=-70 до 6 лет

Т=-196С(жидкий азот) до 10-12 лет

2)Лиофильная сушка- высушивание вир из замороженного сост под вакуумом. Одновременно расфасовывают в ампулы(для вакцин).Ампулы хранят в холодильнике Т=+4С до 10-12 лет

II Воздействие хим-х факторов:

50% глицерин, его готовят на физ р-ре. В нем пересылают пат мат из хоз-ва в лаб-ию. Вир хранится в теч 2х недель

14.Факторы противовир им-та,их хар-ка и роль.

3 котегории защ-х мех-в:

1)Естественная видовая резистентность- невосприимчивость,кот обусловлена врожденными биол-ми особ-ми, присущи-ми данному виду жив-го.Защ-ые мех-мы(первая линия обороны).Этот вид перед-ся по наследству(чел не воспр к чуме крс).Ест воспр-ть обусл-на отсутст-м условий для размнож вир:не происх адсорбции,проникнов и депротеиниз вир.

2)Неспециф факторы резистентности,вкл клет-ые и физиол-ие реакции(интерфероны,ингибиторы,фагоцитоз, темпер-й фактор)

3)Специфич-ие факторы иммунитета,проявл-ся при иммунизации или после переболевания

16.Клет-ый противовир им-т и его знач-ие.

Фагоцитоз-уничтожение инфицир-х вирусом кл-к.

Макрофаги-кл-ки,кот обл-ют высокой фагоцитарной активностью Все макрофаги объед-ны в сист мононуклеар-ных фагоцитов(СМФ):кл-ки предшест-венники и промоноциты (костный мозг); моноциты(переферич кровь);макрофаги (соед тк-гистиоциты,печень-купфровы кл-ки,легкие-альвеол макрофаги,лимф узлы, селезенка, серозные полости,костн тк,нервная тк).Фагоцитоз не просто уничтожает чужеродный агент,но и представляет его для цепи иммунной реакции

19.Живые вир вакц,их св-ва,примен и отлич от инактивир.

Живые противовир.вакцины предст. собой лиофилизированные взвеси вакцин. штаммов вирусов, выращ. в разл. биосистемах (КЭ, КК, в лаб жив.)-получают ослабл-й штамм). Осн. Св-вом явл. стойкая утрата способ. вызывать в орг-ме привитого жив. типичное инф. Заболеева-ние, также обл. способностью «приживляться» в орг. жив., т.е размножатся. Пребывание и размножение вакцинного штамма продолжается обычно 5-10дн. до неск. недель и не сопр. клин. проявлениями, хар. для данной б., приводят к форм. иммунитета против инф. забл. Преимущества: 1)высокая напряженность и длительность создаваемого ими иммунитета, приближ. к постинфекц(1 год и более). 2)возможность для большинства однократного введения в малых дозах.3)Введение не только п/к, но и перорально и интерназально. Недостатки:1)чуств к неблагоприятным факторам. 2)Строгие рамки хранения и транспортировки – темпер – 4-8С. 3)Недопустимо наруш. вакуума в апулах с вакцинами. 4)нужно долгое время для их получения5)м возвращаться в патогенное состояние 6)Строгие соблюдения правил асептики(чтоб не занести кондаменанты, др вирусы).

26.ПЦР,ее принцип,практ исп-ие,дост и недост.

Не серолог. р-ция,напр-на на обнар-ие вир-й нукл-й к-ты(генома). Принцип:у выд-й из пат мат вир-й нукл к-ты многократно воспроизводят(копируют) опред-й наиболее консервативный уч-к «in vitro», а затем его идентифицируют.У больш-ва вир-в нукл к-ты расшифрованы (послед-ть нуклеотидов)-около 500 пар нуклеотидов-участки, специф-ие для опред. типа вируса.Эти уч-ки наз-ся ампликоны. Их надо многократно воспроизвести.

3 этапа 1 цикла ПЦР(надо 25-40)- амплификация;

1)Денатурация: нагревают до 90-92С в теч 1мин (чтобы разорвать водород.цепь) 2)Отжиг (гибридизация): смесь охлаждают до 58-62С в теч 1мин(чтобы специф-ие праймеры присоед. к противоп-м концам ампликона по принципу комплементарности).Праймеры комплем-ны концам амп-а 3)Элонгация:нагрев до 68-72С 1мин-в присутствии фермента ДНК-полимеразы нуклеотиды синтез-т дочернюю цепь, комплементарную матрице начиная с праймеров от 3^/ к 5^/ (достраив-ся за 3 мин).

Методика ПЦР: 1ст:Пробоподготовка-выделение из пат мат суммарной ДНК 2ст:Амплификация

реакционная смесь(минер масло+ионы магния+суммарная ДНК+фермент+ нуклеотиды+2вида праймеров) =>помещают в амплификатор(амплификация)-прох-т циклы ПЦР.

3ст:выдел.ампликонов методом электрофареза в агарозе:м/ду пластм-ми зал-т агарозу,и пока она не заст вставл гребенку =>образ-ся корманы.Затем добавл флуоресц-ое в-во и помещ в УФ(трансиллюминатор)-свечение.

21.ДНК-вакцины,их получ,св-ва,примен и отлич от цельновир-х.

Осн ДНК вакцины-бактериальные плазмиды,сповобные эффективно размн-ся в кл-ах E.Coli.Плазмиду получ генноинжен-м методом. Затем рекомбинантную плазмиду вводят E.Coli и выращ-ют на питат средах. Очищают, выделяют рекомбинантные плазмиды и вакцинируют жив-х.Плазмида проникает в кл-ку и в ядро=>транскрипция=>иРНК=> на рибосомы=>иммуногенные белки,кот разрезаются на отдельные пептиды. Пептиды+ГКГС=>транспорт на пов-ть кл-ки. Подходят Т-киллеры=>их активация=> могут убивать кл-ки,инфец этим вирусом.

Если захв-ся макрофагами=>то подходят Т-хелперы=>стимул-т Т-киллеры и В-лимфоциты

Преим-ва:

-действ 3-6 мес

-доза введ минимальная

22.Неспециф ингибиторы вирусов,их с-ва,биол роль и знач для серологич р-й.

-нейтрализуют инфекц и гемаглютинир-ую активность вирусов.

Делятся на:

1)ТЛ(бета-ингибиторы)

2)ТС(альфа-,гамма-ингибиторы)

Перед постановкой реакции мх удаляют из исследуемой сыворотки.

20.Субъед вакцины,их получ,св-ва, примен и отличие от цельновирионных вакцин.

Преим-ва:

-безопасны,тк не сод-т вируса

-свободны от вредных примесей

-стабильны инее требуют хранения в рефрижератарах

3 метода получения:

1)получают большое кол-во вируса, очищают и выделяют иммуногенные субъединицы(«Сплит-вакцины»)-очень дорого.

2)Получение синтетич вакцин-синтез иммуногенных Аг: 4 белка вир ящура VP-1-4.Иммуногенный белок VP-1.К нему «пришивают» синтетич полимеры=> увелич-ся иммуногенность. Напр против ящура,гепатитаВ, инцефал-го клеща.

3)С использ-ем методов генной инженерии: сшивание нукл к-ты и бактериофага(микроба), и заставить его синтезировать белки(субъед или молекул-ую вакцину)

24.Методика опред титра Ат в сыв-ах крови и его практич использ-ие.

Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала. Из локальных повреж-дений, вызываемые вирусами, наиболее известны бляшки и оспины на ХАО КЭ. Если имеются данные обр,то инф актив-ность вируса может быть измерена в бляшкообр ед (БОЕ) или оспообр ед(ООЕ) 1БОЕ = дозе вируса, способной вызвать обр одной бляшки, а одна ООЕ – одной оспины.

Методы: заражают несколько КК или КЭ на ХАО. Высчитывают среднеарифме-тическое кол-во оспин или бляшек. Оно = БОЕ или ООЕ вируса. Рассчитывают сколько БОЕ или ООЕ приход на ед. объема вируссодерж. материала. Это и есть титр. Т=n/Va, где n-сред ариф бляшек или оспин, а–разведение материала, V– введенная доза.

28.Что такое титр вир и принцип его опред-ия по инфекц-му д-ию вир.

Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала.Вир м титровать по инфекц-му д-ию.

Титр по эф-ти их д-ия,те какой эф-т вир оказ-ет на ту или иную жив сист..Эф-ть д-ия вир выр-ся в эффект-х дозах(ЭД). За 1ЭД₅₀ прин-ем такую дозу вир,кот при введ гр живых сист.выз-ет эф-т в 50% случаев(не мене 4 жив систем). Инфекц Титр вируса-кол-во эффект-х доз его в ед V(чаще в 1мл) 1ЭД м обозн-ся по-разному,в зав-ти от эффекта и от той живой сист,на кот мы титруем вирус: 1)Гибель: ЛД₅₀ (летальная доза)-лаб жив, ЭЛД₅₀(эмбр лет доза)-кур эмбр, кк-нет гиб 2)Видимые изменения(клиника,пат изм):

ИД₅₀(инфекц доза)-лаб жив,ЭИД₅₀ (эмбр инф доза) и ООЕ(оспообр-ие вир ед-вир оспы голубей)-кур эмбрионы,ЦПД₅₀ (цитопат доза) и БОЕ(бляшкообраз-ие ед- под ТВ питат средой)-кк.

Берем неск-ко пробирок(напр 5),размор-ем вирус.В кажд проб-ку по 9мл физ р-ра. Затем в 1 проб из бутыли с вир переносим 1мл вир(пипетку в физ р-р),размешать. Затем из сод-го 1й во 2 1мл смеси,из 2й в 3ю и тд…из последний не выливаем.

Каждым развед-ем мы зар-ем четное число биол систем(не менее 4х)-4 кур эмбриона.Ставим в термостат,затем учитываем.

Положит-й эф-т(+)-гибель

1(1:10)++++

2(1:100)++++

3(1:1000)++--

4(1:10000)----

5(1:100000)----

В развед 1:1000-50% эф-т =>в этом развед сод-ся 1ЭД₅₀ =1 ЭЛД₅₀

Титр вир=числу(во сколько раз надо развести исх-й вир,чтобы пол-сь 1ЭД₅₀)

Тв=1000 ЭЛД_50/0,2=5*10³ ЭЛД_50/мл

0,2-кол-во мл,каким зар эмбрион.

Если эф-т не виден,то подсчёт инфекц титра проводят по методу Кербера или методу Рида и Менча.

Формула Кербера: lgЛД50=lgD+lgd/2-lg∑r/n

D-наибольшее развед вир,кот дает еще 100% эф-т d-коэф-т разведения(=10);r-кол-во (+)-павших;n-кол-во живых систем,зар-х каждым разведением(со 2-го развед,тк в 1-м они и так погибнут).

23.Принцип серологич диагностики вир бол-й жив-х.

В основе лежит спос-ть Ат взаимодейство-вать со специфическими гомологичными Аг в прбирке(in vitro)с образованием комплекса Аг-Ат. Обычно источником Ат служит сыв-ка крови жив-го=>эти р-ции наз-ся серологическими.

Фазы:

1ф-специфическа фаза: невидимая,характеризуется адсорбцией Ат на пов-ти Аг.

2ф-неспецифическая: видимая,кот хар-ся феноменом приципитации,лизисом,нейтрал-ей инфекц-ти вируса и тд.

Взаимод-ие Аг и Ат зав от многих факт-в: Т(от 4 до 37С),рН среды, наличия электр-в и др.

Взаимодействие Аг и Ат возможно в разл-х соотнош-х,в любых проп-ях.Однако при оптим-х концентр-ях Аг и Ат (когда все их валентности поглащены) р-ция выражена более четко.

Компоненты:

1)Специфические Аг(тк от больных и эксперементально зар-х жив-х,эмбрион ж-ть от зар-х кур эмбр-в,инфиц-ые куль кл-к)

2)Специф-ие Ат(исслед сыв-ка крови)

Серолог р-ции прим-ся для:

1)Диагностики вир-х болезней:

-по известному Аг(диагностикуму) опред-ют в исслед сыв-ке наличие и кол-во специф-х к данному Аг Ат

-с пом известного Ат опред-т наличие в исслед мат-ле специф Аг и осущест его идентификацию

2)Серологич оценки поствакцинального им-та. По ур-ню Ат в сыв-ке опред-т напряж-ть гумор-го им-та.

3)Изучение иммунол-го фона среди поголовья жив-х.Наличие Ат в сыв позволяет устан-ть комбинацию возб-ей,циркул-х в стаде и напр-ть им-та к ним.

4)Изучение Аг-стр-ры вир с пом-ю моновал-х сыв-к к отдельным его комп-м.

5)Устан-ие степени Аг-го родства вир.

6)Оценки акт-ти диагностич преп-в и вакц

7)Изуч патогенеза вир болезней.

Р-ции:

РН,РТГА,РНГА,РТГАд,РСК,РДП,РИФ,ИФА

27.Что такое титр вир и принцип его опред по гемаглютинир-му д-ию.(Тга)

Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала.Вир имеют белок- гемагглютинин.Они склеивают эр. Титр опред-ют по эф-ту гемагглютинации.Выр-ся ГАЕ(гемагл ед). 1ГАЕ-наибольшее развед вир,кот еще выз-ет агглют-ию эр на «++»

РГА Мб качественной(для индикации (обнаруж)вируса-капельная РГА) и колич-й(Тга).

Р-ция пров-ся в плестеглазовых (пласти-ковых) планшетах.Не треб-ся стирильн условий

1)Готовят последов-ое 2х кратное развед вир(1:2,1:4,1:8…)

2)В каждое развед доб-ют равный V 1% взвеси эритр-в опред-го вида и оставл-ют на контакт

3)Уч-т рез-т РГА в крестах:

ГА(100-75%эр)-«+++» - полный зонтик

ГА(50%эр)-«++» - неполн зонтик (пол эр обр-ют взвсь,а др пол осела на дно)

ГА(25%)-«+»- маленький зонтик

ГА-«-»-пуговка(все эр оседают)

4)Опред-ют гемаглют-й титр(Тга):снач узнают в каком развед нах-ся 1ГАЕ.

Тга-то число,во сколько раз был разведен вирус,чтоб в получ-м развед сод-сь 1ГАЕ

Берем 6 пробирок,6-контроль(эр+физ р-р): 1)(1:2)0,2мл физ р-ра(разбавитель)+0,2мл вир БН+0,2мл 1%взвеси эр-в петуха;2)(1:4)0,2мл из пред-й проб-ки+0,2физ р-ра+0,2 1%взвеси и тд до 5-й.Оставляем на контакт на 30 мин при комн-й темпер-ре.

От чего зав-т р-ия ГА:

1)от наличия вир гемагглютинирующего

2)исп-ся эр опред-го вида хозяина(ВБН-эр кур и петухов);

3)опред усл для постан р-ции:буф-й р-р (физ р-р,карбонатный,фосфатный буфер); рН(нейтр),комн темп,время конт(30мин)

Учет нач-ем с того мом-та как сраб контроль:

6)контроль-все эр осели «-»

5)пуговка «-»

4)неполный зонтик «++»(1ГАЕ) =>эф 50%

3,1 и 2)полн зонтик «+++»=>2,4 и 8 ГАЕ

=> Тга=16ГАЕ-во сколько раз разведение(в 16 раз в 4 лунке)

6.Репродукция вирионов вир.

Этапы взаимодействия вируса с клеткой.

Репродукция-воспроизведение вирусом себе подобных частиц.

I фаза

1. Адсорбция вириона на поверхности клетки(прикрепление).

• это происходит спонтанно и не специфически за счет электро-статического притяжения аминных групп вируса (+) и кислофосфатных групп клетки (-).

• Специфический механизм, за счет комплементарных связей клеточных и вирусных рецепторов (липопро-теиновых и мукопротеиновых).

2. Проникновение вируса в клетку – виропексис. Происходит пиноцитоз, т.е. вирус адсорбируется на клеточ-ной стенке, образуется впячивание, и вирус проникает в клетку в виде пиноцитозного пузырька. Так же проникновение происходит путем сплавления, когда вирус проникает из одной клетки в другую не выходя в межклеточное пространство. Этот путь характерен для герпетических инфекций.

3. Депротеинизация вируса(раздев-е) – высвобождение вирусного генома. Удаляется вир-ая защ-ая оболочка. Вирусная частица частично разбирается на отдельные капсоме-ры.Освоб-ся нукл к-та.

II фаза

1. Транскрипция: перепис-ся инф с вир нукл к-ты на иРНК по законам генетич-го кода(принцип комплем-ти),а с иРНК на белок..

2. Трансляция иРНК: процесс перевода ген-й инф,сод. В иРНК на специф послед-ть аминок-ты.Синтез вир белков в кл-ке(на рибосомах)

1ф-инициация: рибосома узнает иРНК, связ-ся с особым уч-м и достигает инициат-го кодона,с кот нач-ся трансляция(АУГ)

2ф-элонгация: удлинение(наращ-ие) полипепт цепи(присоед-ся новые аминок-ты с пом пептидных связей)

3ф-терминация: 1)иРНК в гигантские полипепт-предшеств,кот нарезаются на зрелые белки;2)иРНК транслир с образ зрелых белков

3.Репликация вирусной нукл к-ты,гомолог геному. Одновр на обоих цепях=>образ из 1 родит и 1новой цепи

4.Синтез вирусных структурных «поздних» белков.

5.Сборка вируса – ассамблирование

• образование нуклеокапсидов

• организация вирусной мембраны.

6. Выход зрелых вирусных частиц за пределы клетки:1)путем взрыва-у вир,не имеющего суперкапс об-ки;2) почкование(вир с суперкапс об кл-ки способен сохр св жизнеспос-тьпока не исп-ет свои ресурсы)

4.Белки вир и к-к, их сходства, различия и ф-ции.

Сост из аминокислот: NH₂-CHR-COOH

Аминок-ты разл-ся по радикалу. Белки в составе м сод-ть от 5 до 2000 аминок-х остатков.

Протеины(простые белки)-сост только из аминок-т. А если входят еще др компоненты-протеиды(металопротеиды, гликопротеиды,липопротеиды,фосфопротеиды) Входят в суперкапс об-ку.Послед-ть черед аминок-т в белке образует первичн стр-ру;

Вториная: b-складчатая(зигзагом), a-спир-ная (спиралью); трет-ая и четвертичная стр-ры.

Белки делят на:

1)Структурные белки(все белки,входящие в состав зрелых внеклет вирионов)

2)Неструктурные белки(не входят в вирион вируса,но закодированы в геноме вируса)

Ф-ции срукт белков:

1)Защитная:капсид защищает нукл к-ту от внешнего возд-ия

2)Взаимод с мембр чувствит кл-ки в ходе зараж кл-к:с пом белковых рец-в адсорбир-ия (прикрепл) на пов-ть кл-ки.

3)Взаимод-ие с нукл к-й в ходе упаковыв ёё в капсид

4)Взаимод белков др с др в процессе самосборки капсида

5)Организация и проникновение вир в чувствит кл-ку

6)Проникновение в кл-ку способом слияния мембран(уч-ет белок F) и веропепсисом (вдавливание в чувствит клетку)

7)Ответственны за выход вириона из кл-ки

8)Обладают РНК-зависимой и РНК-полиме-разной активностью

9) Обладают РНК-зависимой и ДНК-полиме-разной активностью

Стр-ые белки быват:1)капсидные;2)суперкапсидной оболочки;3)матриксные белки(м/ду капсидом и суперкапсидом);4)внутренние белки(белки сердцевины)-внутри капсида,связ с нукл к-й.

Ф-ции нестр-х белков:

Они делятся на 5 гр:

1)Регуляторы экспрессии вирусного генома (влияют на вир нукл к-ту,припятствуя синтезу др белков или,наоборот,запуская их синтез)

2)Предшественники вир-х белков(предш-ки вир белков,кот обр-ся из них в рез-те сложных биохим-х проц)-процессинг

3)Нефункциональные пептиды

4)Ингибиторы клет-го биосинтеза(разруш клет ДНК и РНК,модифиц-ют клет ферменты, придавая им вирусспециф акт-ть)

5)Вир-ые ферменты(кодируемые вир-м геномом, но не входящие в сост вириона)

5.Принцип систематики вир,осн систематич-ие группы и их номенклатура.

Вир классиф-ся по:

1)Тип нукл к-ты (ДНК или РНК) и ее стр-ра(кол-во и форма цепей)

2)Стратегия вир-го генома

3)Размер и морфология вириона(тип симметрии, число капсомеров)

4)Ф-х св-ва(уст-ть к темпер-ам,рН, жиро-раств и тд)

5)Наличие липопрот обол-ки

6)Антигенные св-ва

7)Патогенность,в тч цитопатич-ие измен-ия в кл-ах и внутриклет вкл-ия

8)Круг воспр-х хозяев

9)Способ передачи

10)Географич-ое распростр-ие

Таксоны вирусов

Отряд(3)

Семейство(56)

Подсем-во(9)

Род(233)

Вид(1550)(Мб уровни: серотип, вириант,штамм,изолят)

Семействава

1)ДНК-двухспир-ая линейная

-Poxviridae

-Iridoviridae

- Herpesviridae

-Adenoviridae

2)ДНК-двухспиральн циркулярная

-Asfaviridae

-Polyamaviridae

-Papillomaviridae

-Hepadnoviridae

3)ДНК-односпир циркул-ая

-Parvoviridae

-Circoviridae

4)РНК- одоспир линейная +нитевая

-Picornaviridae

-Caliciviridae

-Astroviridae

-Coronoviridae

-Arteriviridae

-Flaviviridae

-Togaviridae

-Retroviridae

5) РНК- одоспир линейная –нитевая

-Bornaviridae

-Eiboviridae

-Paramixoviridae

-Rhabdoviridae

6)РНК-односпир сегментр-ая –нитевая

-Ortomyxoviridae

-Bunyaviridae

-Arenaviridae

7) РНК-односпир сегментр-ая +нитевая

-Nodaviridae

8)РНК-односпир циркул-ая +нитевая

-род Detavirus

9)РНК-двухцепоч-ая сегментир

-Reoviridae

-Birnaviridae