5. Особенности диагностики инфекций, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и шигеллами.

Эшерихии.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследо­вания служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь (при сепсисе).

Микроскопический этап. Для ускоренной идентификации патогенных типов кишечных палочек применяется метод иммуно-флуоресценции с использованием группоспецифических меченых сывороток.

Бактериологический этап. Исследуемый материал засевают на чашки со средой Эндо и Плоскирева, кровь сеют для обога­щения в бульон, а затем высевают на чашки с МПА. Через 24 часа инкубации при 37° С выбирают колонии малинового цвета с фиолетовым оттенком. Принадлежность к ЭПКП устанав­ливают с помощью РА на стекле со смесью сывороток ОВ-коли. Исследуют не менее 10 колоний с каждой чашки. При положи­тельном результате РА оставшуюся часть колоний пересевают на скошенный агар и короткий пестрый ряд или на среду Рессела. Полученную культуру идентифицируют на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств.

Биологический этап. Не применяется.

Серологический этап. Заключается в выявлении антител к эн-теропатогенным кишечным палочкам (РНГА). Наличие О-антител позволяет отличить острый инфекционный процесс от бактерио­носительства.

Аллергологический этап. Не применяется.

Сальмонеллы.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследо­вания служат кровь, желчь, моча, испражнения, отделяемое розеол, в отдельных случаях — пунктат костного мозга, спинно­мозговая жидкость, гной из септических очагов, некротизирован-ные ткани.

Микроскопический этап. Применяется прямая и непрямая РИФ для| обнаружения салмонелл в инфекционном материале.

Бактериологический этап. Выделение тифозных и паратифоз­ных бактерий проводят по одной и той же схеме, какой бы исходный материал ни исследовался. Различия заключаются в пер­вичном его посеве.

Исследование крови (1—2-я недели заболевания, выделение гемокультуры). Кровь в количестве 5—10 мл берут стерильно из локтевой вены больного и засевают в 50—100 мл питательной желчной среды Рапопорт. Из сред накопления материал засевают на скошенный агар или в среду Олькеницкого, а также в чашки со средой Эндо и Плоскирева. Через 18—24 часа изучают посевы, определяют чистоту культуры и идентифицируют ее.

Исследование испражнений (выделение копрокультуры, начи­ная со 2—3-й недели заболевания). Посев испражнений произво­дят параллельно двумя способами — прямым и на среды обо­гащения.

Прямой метод — одну каплю приготовленного материала засевают на чашки со средами Плоскирева, Левина, висмут-суль­фит агар.

Посев на среды обогащения — при посеве кусочек испраж­нений эмульгируют в 10 мл среды Мюллера, Кауфмана или; селенитового бульона. Из этих сред делают высев на чашки со средой Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар через 5—6 часов.

Исследование мочи (выделение уринокультуры с конца 2-й недели заболевания). В моче бактерии находятся практически и чистой культуре и в большом количестве. Посев мочи произво­дят на среды, применяемые для выделения их из испражнений.

Исследование желчи (дуоденальное содержимое, в течение всего срока заболевания). Каждую порцию желчи сеют отдельно, материал в количестве 0,5 мл наносят на среды Плоскирева, Левина, висмут-сульфит — агар в чашки Петри и растирают шпателем.

Обнаружение микробов в крови всегда является показателем острого заболевания, признаком, абсолютно подтверждающим диагноз брюшного тифа. Наличие возбудителя в фекалиях может быть результатом заболевания или бактерионосительства.

Для выделения чистой культуры отмечают типичные или по­дозрительные колонии, пересевают их на комбинированные среды (среда Олькеницкого, Рессела, в случае их отсутствия — на ко­роткий, пестрый ряд: в пробирки со скошенным агаром и средами Гисса с лактозой и глюкозой). Посевы инкубируют 24 часа при 37° С. На среде Олькеницкого салмонеллы брюшного тифа фер­ментируют глюкозу с образованием кислоты (пожелтение столбика агара), не расщепляют лактозу (окраска скошенной части не из­меняется) и продуцируют сероводород (почернение среды на границе столбика агара и скошенной поверхности).

Салмонеллы паратифов ферментируют глюкозу с образова­нием кислоты и газа (пожелтение и разрыв столбика агара). Полученную чистую культуру идентифицируют по морфологиче­ским, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антиген­ным свойствам и в реакции фаголизиса.

Со скошенного агара делают мазок, окрашивают по Граму, определяют подвижность культуры.

Выделенную культуру сеют в ММТ (мультимикротест-система), которая содержит блок готовых диагностических сред для полного изучения биохимической активности микробов.

Определение антигенной структуры проводят при помощи монорецепторных сывороток: по антигенной формуле устанавли­вают принадлежность выделенной культуры к определенному сероварианту. Анализ антигенной структуры начинают с выявления О-антигена с помощью монорецепторных О-сывороток (1), 2, 4, О, 9 групп А, В, С, Д (по Кауфману). Если в одной из капель реакция агглютинации положительна, дальнейшее определение вида ведется с монорецепторными Н-сыворотками специфической фазы в пределах установленной группы.

Если культура типична по биологической характеристике и обладает антигенным составом, соответствующим определенной

серологической группе и серовару, то можно считать идентифи­кацию законченной.

Определение фаговара имеет большое значение при эпиде­миологических обследованиях и помогает выявить источник ин­фекций.

Брюшнотифозные палочки, содержащие Vi-антиген, лизиру-ются Vi-бактериофагом. Vi-фаг 1-го варианта является общим для всех тифозных бактерий, обладающих Vi-антигеном. Vi-фаги 2-го варианта являются различными, и при их помощи можно опре­делить фаговар брюшнотифозной палочки. Применяют набор Vi-фагов 2-го варианта — А, В, С, D, E, F и т. д.

Для определения фаговара тифозные палочки должны быть в V-форме, т. е. содержать Vi-антиген и агглютинироваться Vi-сы-вороткой; они не должны агглютинироваться О-сывороткой. Для опыта применяют молодые 3—4-часовые бульонные культуры, которые высевают на чашки с агаром. Употребляют 1,3% про­зрачный агар рН 7,2—7,4. Чашки с агаром хорошо подсушивают и на поверхность их наносят полоску шириной 5—6 мм из испы­туемой культуры фага, после чего чашку снова ставят в термостат на 20—30 мин для подсушивания. Засеянные чашки помещают в термостат на 2—3 часа, а затем на ночь в холодильник при 2—6° С. На следующий день чашки помещают вновь на 5—6 ча­сов в термостат, лишь после этого учитывают результаты опыта. Фаговар культуры определяют по фагу, который полностью лизирует культуру.

Для определения фаговаров салмонелл паратифа В исполь­зуют набор из 15 фагов, вариант определяют по таблице.

Биологический этап не применяется.

Серологический этап. Используемая ранее РА Видаля для обнаружения О-антител в крови больного в настоящее время не находит широкого применения и вытеснена более чувствитель­ной РНГА с эритроцитарными диагностикумами (О-, Н-, Vi-).

Для дифференциации бактерионосителей от вакцинированных применяют определение класса антител (IgM, IgG).

Аллергологический этап не применяется.

Шигеллы.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследо­вания служат испражнения больных, реконвалесцептов, носителей; реже — рвотные массы и промывные воды желудка и кишок, в летальных случаях используют кусочки органов.

Микроскопический этап. В качестве экспресс-диагностики эпи­демических вспышек дизентерии используется метод флюоресци­рующих антител (РИФ).

Бактериологический этап. Материал засевают на среды Левина, Плоскирева, с красным конго по Либерману, с бромкрезоловым пурпурным. Полученную культуру испытывают в РА на предметном стекле с адсорбированными сыворотками, сначала — с поливалентными сыворотками или смесью моносывороток, а за­тем — с каждой из входящих в состав той, с которой получен положительный результат. В случае обнаружения палочки вида Флекснера или Бойда устанавливают серовар или подсеровар при помощи адсорбированных сывороток. Подсеровар шигелл Флекс­нера определяют по антигенной формуле. Шигеллы Зонне иденти­фицируют по колициногенности. У шигелл Зонне установлено 17 колициногенных вариантов (колициногеноваров). С целью подтверждения принадлежности к шигеллам определяют способность культур лизироваться поливалентным дизентерийным фагом.

Биологический этап. Одним из надежных тестов, устанавлива­ющих принадлежность культуры к шигеллам, является керато-конъюнктивальная проба. Ее проводят на морских свинках, кото­рым в конъюнктивальный мешок вводят петлю суточной агаровой культуры или каплю бульона. Свежевыделенные шигеллы вызы­вают выраженный кератит. Помутнение или изъязвление роговицы наступает на 2—5-е сутки после введения культуры в глаз.

Серологический этап. Используется РИГА. Положительные ответы могут быть получены уже с 5-го дня болезни.

Аллергологический этап. Не применяется.

6. Особенности иммунитета при кишечных инфекциях, индуцированного Т-независимыми антигенами.

1. Токсические инфекции. Особенности их этиологии, патогенеза и диагностики.

Пищевые токсикоинфекции - группа острых бактериальных кишечных инфекций и интоксикаций, обусловленных употреблением в пищу продуктов, инфицированных (контаминированных) патогенными и условно-патогенными МБ, в которых они размножились и накопились их токсины.

Этиология: условно-патогенные микробы, способные продуцировать экзотоксин, а при разрушении выделять эндотоксин (обыкновенный протей, клебсиелла, энтеропатогенные кишечные палочки и др.)

Клиника: 2 синдрома - гастроэнтеритический и общей инфекционной интоксикации.

а) синдром острого гастрита - характеризуется периодическими болями и чувством тяжести в эпигастральной области, тошнотой, повторной рвотой; при глубокой пальпации отмечается болезненность в эпигастрии

б) синдром острого энтерита - выражается урчанием, периодическими схваткообразными болями по всему животу, обильным жидким стулом; испражнения водянистые, с комочками непереваренной пищи, часто пенистые, имеют светлую желтоватую или желтовато-зеленоватую окраску; при пальпации живота выявляется урчание, шум плеска, болезненность в проекции тонкой кишки, толстая кишка не изменена; следствием энтерита является обезвоживание

в) синдром острого колита - проявляется периодическими схваткообразными болями в нижней части живота, чаще в левой подвздошной области, ложными позывами на дефекацию, тенезмами, ощущением неполного освобождения кишечника после дефекации; стул частый, скудный, при тяжелом патологическом процессе - некаловый, состоящий из одних продуктов воспаления толстой кишки - слизи, крови; пальпаторно спазм, уплотнение и болезненность пораженных отделов толстой кишки; может развиться инфекционно-токсический шок или инфекционно-токсическая энцефалопатия.

г) общеинфекционный синдром - головная боль, общая слабость, головокружение, познабливание или ознобы с повышением температуры тела от субфебрильной до фебрильной.

Диагностика: связь с употреблением недоброкачественного пищевого продукта, короткий инкубационный период, острое начало, синдромы острого гастрита, гастроэнтерита, гастроэнтероколита. Для установления этиологии токсикоинфекции проводят бактериологическое исследование испражнений с целью выявления патогенных энтеробактерий (ректальные мазки берут в приемном покое и в отделении, посев на питательные среды и идентификация производится в бактериологической лаборатории), выявляют антигены возбудителей в биологических жидкостях больного (кровь, испражнения, моча, слюна) и на объектах внешней среды (иммуноферментный метод, метод флуоресцирующих антител, реакция коагглютинации, реакция иммунодиффузии в агаре, реакция торможения пассивной гемагглютинации, полимеразная цепная реакция).