Глава 2.13
Гранулоцитарный эрлихиоз лошадей
НИКОЛА ПУСТЕРЛА
ДЖОН Э. МАДИГАН
Дэвис, Калифорния
Гранулоцитарный эрлихиоз лошадей (EGE) представляет собой сезонное риккетсиозное заболевание лошадей, которое впервые было обнаружено в конце 1960-х гг. в предгорьях северной части Калифорнии. Этиологический возбудитель является членом геногруппы Anaplasma phagocytophila, грамотрицательных кокков с тропизмом гранулоцитов. Клинические проявления данного заболевания включают лихорадку, частичную анорексию, упадок сил, отек конечностей, петехиальные высыпания, желтуху, атаксию и залеживание. Гематологические патологические изменения включают тромбоцитопению, увеличение показателя желтухи в плазме, уменьшение гематокрита (PCV) и выраженную лейкопению с начальным поражением лимфоцитов, а затем гранулоцитов. Передача инфекции клещами-переносчиками скорее всего является причиной сезонности заболевания, которое все чаще встречается в Соединенных Штатах, Канаде, Бразилии и северных странах Европы.
ЭТИОЛОГИЧЕСКИЙ ВОЗБУДИТЕЛЬ
Возбудителем EGE является Anaplasma phagocytophila (ранее известная как Ehrlichia equi). Данные микроорганизмы можно обнаружить в выстланных мембранами вакуолях в цитоплазме зараженных эукариотических клеток-«хозяев», прежде всего гранулоцитах. Такие тельца включения состоят из одного или более коккоидов или кокковых бактериальных микроорганизмов диаметром примерно 0,2 мкм до крупных гранулярных структур под названием морулы, диаметром приблизительно 5 мкм. Микроорганизмы можно увидеть при глубоком микроскопировании. При окрашивании мазка по методу Гимза и Райта-Лейшмана они приобретают оттенок от бледного серо-голубого до темно-синего.
В геногруппу A. phagocytophila входит возбудитель лихорадки жвачных животных в Европе, переносимой клещами (ранее известный как Ehrlichia phagocytophila), и недавно обнаруженный возбудитель гранулоцитарного эрлихиоза человека (HGE) в Соединенных Штатах и Европе. Члены данной геногруппы имеют одинаковую морфологию и тропизм нейтрофилов и в серологическом и генетическом отношениях они очень тесно связаны друг с другом. Последовательности ДНК 16S рРНК гена из периферической крови лошадей из Коннектикута и Калифорнии, зараженных естественным путем, идентичны тем, которые имеются у HGE возбудителя. Кроме того, впрыскивание инфицированной крови пациентов с признаками HGE, взятой от человека, лошадям вызывает характерное течение эрлихиоза лошадей, который может передаваться другим лошадям. Эти данные показывают, что возбудитель EGE и HGE, возможно, принадлежит одному и тому же виду и в самом начале реклассификации возбудителей значился под названием A. phagocytophila.
ЭПИДЕМИОЛОГИЯ
Лошадь является аберрантным «хозяином», и маловероятно, что зараженные лошади могут являться эффективными резервуарами A. phagocytophila, поскольку наличие данного микроорганизма у пораженных животных ограничивается острой стадией данного заболевания. Лошади любого возраста восприимчивы к данному заболеванию, но у лошадей младше 4 лет клинические проявления менее тяжелые. У лошадей в эндемических зонах выше доминирование серотипа антител к A. phagocytophila, чем у лошадей в неэндемических зонах, что наводит на мысль о субклиническом течении заболевания у некоторых животных. Кроме того, у лошадей, привезенных в эндемическую зону, с большей вероятностью возникнет EGE, чем у местных лошадей. Стойкость A. phagocytophilia не была доказана на животных, зараженных естественным или экспериментальным путем. Данное заболевание не является заразным, но инфекция может легко передаваться восприимчивым лошадям при переливании лишь 20 мл крови от лошадей с активным заражением. Чаще всего в группах лошадей на одном и том же пастбище можно встретить одну зараженную лошадь. Имеются сообщения о данном заболевании у лошадей в Калифорнии, Вашингтоне, Орегоне, Нью-Джерси, Нью-Йорке, Колорадо, Иллинойсе, Миннесоте, Коннектикуте, Флориде, Висконсине, а за пределами Соединенных Штатов – в Канаде, Бразилии и северных странах Европы.
Недавно была проведена передача EGE экспериментальным путем посредством собачьего клеща (Ixodes pacificus и Ixodes scapularis). Кроме того, эпидемиологическое исследование, проведенное в Калифорнии, показало, что пространственный и временной характер случаев возникновения EGE можно тесно сопоставить с хорошо охарактеризованным анамнезом жизни и распространением I. pacificus, но они не имеют ничего общего с другими клещами, которые обычно контактируют с лошадьми. На Востоке и Среднем Западе Соединенных Штатов I. scapularis является переносчиком гранулоцитарного эрлихиоза; возможную важную роль в качестве резервуаров инфекции играют мелкие грызуны, такие, как белоногий хомячок, темноногая древесная крыса, олени, ящерицы и птицы.
КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ
Период паразитарной инкубации после экспериментального воздействия зараженных клещей на лошадей составляет 8-12 дней и 3-10 дней после впрыскивания зараженной крови. Период инокуляции при естественном заражении составляет менее 14 дней, в зависимости от времени появления клинических признаков у лошадей, которые ранее предположительно подвергались нападению клещей перед возвращении в неэндемическую зону для EGE.
Тяжесть клинических признаков ЕGE зависит от возраста лошади и продолжительности заболевания, что может затруднить клиническое распознавание EGE во время первого обследования. У лошадей старше 4 лет обычно появляются характерные прогрессирующие признаки – лихорадка, упадок сил, частичная анорексия, отек конечностей, петехиальные высыпания, желтуха, атаксия и залеживание. У клинически и экспериментально зараженных лошадей младше 4 лет клинические признаки меняя тяжелые, в том числе умеренная лихорадка, упадок сил, умеренный отек конечностей и атаксия. У лошадей моложе 1 года распознавание клинических признаков затруднено при наличии одной лишь лихорадки. В течение первых 1-2 дней после заражения температура обычно высокая и варьируется от 39,4 до 41,3º С (102,9-106,3º F).
Первоначальными клиническими признаками являются залеживание, атаксия, упадок сил и иногда желтуха и петехиальные высыпания на слизистой носовой перегородки. Слабость и атаксия могут носить тяжелый характер до такой степени, что после падения у лошадей возникают переломы. Лошадь часто шатается, принимает неустойчивые позы, что вызывает подозрения о проприорецепции. Во многих случаев возникает частичная анорексия. Отек конечностей и более тяжелые симптомы заболевания появляются к 3-5 дню, а лихорадка и слабость у лошадей, не подвергавшихся терапевтическому лечению, продолжаются 10-14 дней. Частота сердечных сокращений часто бывает немного учащенной (50-60 сердечных сокращений в минуту). Поражение сердца с развитием сердечной аритмии встречается редко. Наряду с обычными клиническими признаками наблюдаются вентрикулярная тахикардия и преждевременные вентрикулярные сокращения. Клиническое течение заболевания длится от 3 до 16 дней. Заболевание лошадей обычно проходит без лечения, гибель возникает в связи с вторичной инфекцией и повреждениями вследствие травм, вызванных нарушениями координации. У жеребых кобыл выкидыши не наблюдались, и ламинит не считается характерным признаком данного клинического синдрома.
Начальная стадия заболевания характеризуется возникновением лихорадки, и его можно ошибочно принять за вирусную инфекцию. Дифференциальными диагнозами EGE являются гемморрагическая пурпура, заболевания печени, инфекционная анемия лошадей, вирусный артериит лошадей и энцефалит.
Лабораторные патологические изменения у лошадей, пораженных EGE, включают лейкопению, тромбоцитопению, анемию, желтуху и характерные тельца включений (морулы) в нейтрофилах и эозинофилах. Морулы носят плеоморфный характер и имеют оттенок от серо-голубого до темно-синего и часто внешне напоминают колеса со спицами.
ПАТОЛОГИЯ
Характерными тяжелыми поражениями, наблюдаемыми у лошадей, зараженных экспериментальным путем, являются кровоизлияния – обычно петехии и кровоподтеки – а также отек. Отекают чаще всего область конечностей, вентральной стенки брюшины и крайней плоти. Кровоизлияния чаще возникают в подкожных тканях, фасциях и эпимизии дистальных отделов конечностей. В гистологическом отношении воспаляются мелкие артерии и вены, главным образом в подкожном слое, фасциях и нервах конечностей и в яичниках, яичках. Васкулярные поражения бывают пролиферативными и некротизирующими, с разбуханием эндотелиальных и гладкомышечных клеток, клеточным тромбозом и периваскулярным накоплением главным образом моноцитов и лимфоцитов и в меньшей степени нейтрофилов и эозинофилов. Во время вскрытия животных в ходе заболевания в почках, сердце, головном мозге и легких также отмечались небольшие воспалительные васкулярные или интерстициальные поражения. Вентрикулярная тахикардия и периодически наблюдаемые преждевременные вентрикулярные сокращения у пораженных лошадей, по-видимому, связаны с миокардиальным васкулитом. Кроме того, у лошадей с хронической бактериальной инфекцией возникает обострение предшествующих поражений (например, бронхопневмония, артрит, перикардит, лимфаденит, целлюлит).
ИММУНИТЕТ
Иммунологические исследования A. phagocytophila показали наличие клеточно-опосредованной и гуморальной иммунной реакции на проявление клинически выраженной инфекции. У лошадей, поправившихся, после экспериментального заражения, развиваются гуморальная и клеточно-опосредованная иммунные реакции через 21 день после инфицирования. У лошадей, зараженных естественным путем, титры антител достигают максимума на 19-81 день после появления клинических признаков. Длительность иммунитета составляет, по крайней мере, 2 года и, по-видимому, не зависит от латентной инфекции или носительства. Кровь ранее инфицированных лошадей, выздоровевших естественным путем или после лечения тетрациклином, не является инфицированной.
ДИАГНОСТИКА
Для постановки диагноза необходимо установить зону географического распространения инфекции, характерные клинические признаки, патологические лабораторные данные и характерные морулы в цитоплазме нейтрофилов и эозинофилов в мазке из периферической крови, окрашенному по методу Гимза и Райта (рис. 2.13-1). Поскольку у лошадей развивается лейкопения, большое количество нейтрофилов можно исследовать при микроскопии окрашенного мазка. Количество клеток, содержащих морулы, варьируется от менее 1 % клеток в начальный период до 20-50 % нейтрофилов на 3-5 день после заражения. Также могут применяться непрямое исследование флуоресцентных антител и двукратное исследование титров со значительным (четырехкратным или более) увеличением титров антител к A. phagocytophila для ретроспективного подтверждения недавнего заражения. Однако, поскольку тельца включения всегда заметны во время средней стадии периода подъема температуры, у лошадей в эндемических зонах или после недавних пребываний в эндемических зонах не нужно проводить исследование на антитела для постановки точного диагноза. Недавно было разработано несколько планов исследований с применением полимеразной цепной реакции (PCR) для членов геногруппы A. phagocytophila, которые оказались высоко чувствительными и специфичными. Обнаружение инфекции посредством PCR анализа помогает при диагностике EGE, в особенности на ранней и поздней стадиях заболевания, когда число микроорганизмов слишком незначительно для микроскопической диагностики.
Рис. 2.13-1. Включения Anaplasma phagocytophila (стрелочка) в нейтрофилах лошади с гранулоцитарным эрлихиозом лошадей (EGE; мазок периферической крови, окраска по Гимза, увеличение х 1000).
ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА
Внутривенное (в/в) введение окситетрациклина со скоростью 7 мг/кг массы тела один раз в день в течение 5-7 дней является эффективным лечением при EGE. Быстрое клиническое улучшение и появление аппетита у лошадей, а также спад температуры отмечается в течение 12 часов после начала терапевтического лечения. В действительности невозможность сбить температуру в течение 24 часов в значительной степени указывает на другую причину заболевания. В редких случаях у лошадей, терапевтическое лечение которых составило менее 7 дней, возникает рецидив в течение последующих 30 суток. Без применения терапевтического лечения клинические признаки заболевания могут исчезать самостоятельно через 2-3 недели при отсутствии сопутствующей инфекции, но потеря веса, наличие отеков и атаксия имеют более тяжелый и затяжной характер. У лошадей с проведенной терапией признаки атаксии продолжаются 2-3 дня, а отек конечностей держится несколько дней. Тельца включения обычно с трудом обнаруживаются после первого дня лечения и больше не наблюдаются через 48-72 часа. В тяжелых случаях рекомендуется поддерживающее лечение, в том числе инфузионная и электролитная терапия, поддерживающее обертывание конечностей и содержание в стойле лошадей с тяжелой формой атаксии для предупреждения вторичных поражений.
В неосложненных случаях прогноз при EGE благоприятный, что резко отличается от других заболеваний в списке дифференциальной диагностики. В настоящее время в продаже нет вакцины против EGE; поэтому меры предосторожности заключаются в соблюдении мер по борьбе с клещами-переносчиками.