
- •Питательные среды и условия роста мк.
- •Скорость роста.
- •Технология полного смещения (вытеснения).
- •Контроль за постоянством абиотических факторов при непрерывном куль-ии мк в ферментерах и реакторах.
- •Субклеточные (рибосомальные) вакцины.
- •Биотехнология культивирования мк.
- •Питательные среды и условия роста мк.
- •Рост бактерий в периодической культуре.
- •Влияние концентрации пит. В-в на V роста.
- •Технологические основы получения и произ-ва гипериммунных сывороток, -глобулинов и монокланальных ат.
- •Фазы синтеза ат.
- •Получение гипериммунных сывороток и гамма-глобулинов.
- •Технология полного смещения (вытеснения).
- •Контроль за постоянством абиотических факторов при непрерывном куль-ии мк в ферментерах и реакторах.
Фазы синтеза ат.
Синт. – в плазме кл. Они размнож. дифференц. Система синтеза АТ запуск в теч. 10-15 мин. после контакта с АГ. Первые 10 ч. идет приобрет. иммунокомп-ти. Iфаза – индуктивная;IIфаза – продуктивная фаза иммуногенеза. Кол-во АТ пост. в теч. 4-15 дн.IgМ – сначала, ->IgG(полный иммун. ответ). Организм на повторное введение АГ отвечает по типу вторичного ответа. Синтез АТ уже индуцируется меньш. дозами АГ продукц. АТ начин. быстрее, пик синтеза наступает раньше.Методы иммунологич. опред. состоян. напряжен. им-та. 1) метод направлен на выясн. АТ и АГ основан на состоянии гиперчувствительности немедленного типа.; 2) р-н, основ. на специф. сост. гиперчувств. замедленного типа (туберкулинизация); 3) биопрепараты.
Получение гипериммунных сывороток и гамма-глобулинов.
Перенос медиаторов в медицине АТ получ. от гологич. или гетерологич. доноров. Последн. время – вместо нативных гипериммунных сывороток использ. их очищенную фракцию (Ig). Большинство АТ входят вIgG, но могут входить и в др.Ig. Все АТ отвеч. за блокировку АГ. Пассивная иммунизация сущ. с конца прошлого века. Оральн. исск. иммуниз. АТ примен. оч. редко, т.к. идет их переваривание. Гаммаглобулины берут от ж-ых доноров. Сывор. белок подразделен на классы: 1) гомологичные антисыворотки – из нормальной сыворотки здоровых ж-х; 2)Igдоноров с норм. содерж. подходящих АГ; 3) специф. АТ гипериммун-х доноров.Стадии получения очищенных Ig . 1) получение сыворотки (центрифугир., фильтры); 2) Фракционирование (термо – преципитат, высаливание, осажд. эта полон. полиэтиленгликолем, хромотография, адсорбция, ультрацентрифугир., фильтрация); 3) разруш. макромол. протеина; 4) стерилиз. – УФ, пастериз., фильтрация; 5) консервация – фенол; 6) стабилизация – добавление в-ва меофильновысушен.
Технология полного смещения (вытеснения).
I. Хемостатическое культивирование;II. Турбидостатическое куль-ие. По принципу полного смещения возможноhвариантов, в т.ч. хемостатическое и турбидостатическое куль-ие.I. Хемостатическое культивирование – компонент пит. среды, кот. усваив. рост. клеткой медленнее чем остальные, наз-ся лимитирующим фактором пит. среды. Хем. культивир. – вариант проточного культивирования, при кот. стационарное (равновесное) состояние культуры поддерживается за счет регулируемой подачи лимитирующего субстрата.=F/V=D. Пит. субстрат, кот. подается – лимитирован по какому-то питат. компоненту, т.е. недостаток.Скорость роста зависит от концентр. лимитир. рост. фактора -= мах х /+K (формула Мано).- [ ] лимитирующ. фактора в ферментере; К- константа Мано = концентр. лимитир. фактора, при кот.= ½мах. Лимитирующий фактор (субстрат) будет определять концентрацию биом.y=x/0 -->x=y(0 -), где0 – концентр. лимитир. субстрата;- [ ] сустрата в ферментере;y– экон. коэффиц. культивирования. = К х D/ м – D - > конц. лимитир. фактора в ферментере (D–constкоэфф. разбавления).t=V/F<- время нахождения клетки в ферментере. /// Скорость вымывания клеток из ферментера. -Dкр (скорость вымывания кл-к из ферментера)=м х0/+ К.Dкр=м – это теор., а на самом деле культура у нас растет меньше, чеммах (меньше на кол-во израсходов. лим. фактора). Произв-сть ферментера по выходу биом: K=Dx.График....
II. Турбидостатное культивирование – вариант проточного культивирования, при кот. равновесное (стационарное) состояние культуры обеспечивается изменением коэфф-та разбавления в зав-сти от [ ] биом в ферментере. = F/V=D.D(коэф. разбавления)constМеняется в зав-ти от измен. х. ПриII– лимитирующ. субстр-в не используют (пит. ср. полностью сбаллансиров., все пит. компоненты в избытке).и х –const-> эти константы поддерж. только коэф. разбавления в зав-сти от надобности больше подают пит. среды или меньше, тем самым измен-ся коэф. разбавления (D). Исп-ся оптич. плотность, измен. рН, выделение О2 -> зависят от [] биом. Будем контролировать рН разбавлением пит. среды и тем самым изменяетсяD. В хемостате создаются условия близкие к стационарной фазе мах-ма -> рост кл. заторможен, т.к. не хватает основного пит. компонента. Исп-ся при получении вторичных метаболитов. Турбидостатн. культив-ие – скорость роста не ограничена, использ. при получении мах биом или при получении персвичных метаболитов (= аналог. фазе логарифм. роста) – скорость роста ни чем не ограничивается. Другие методы проточного культивирования: а) объемно-доливной метод проточного культивирования – на опред. этапе лог. роста заканч-ся и поэтому 90% биом и залив. новую пит. среду (График -, далее гармошкой); б) Многократное выращивание без стерилизации – сливают почти всю биом, оставляют 10%, залив. новой пит. средой (график -); в) Диалезное культивирование – биом в непроницаемой для мк капсуле, в нее проходят полько пит. элементы. Использ. для получения высокой концентрации.