Практическое занятие № 2

(Лабораторный практикум)

ТЕМА: Физико-химические свойства белков Растворимость, ионизация, гидратация и виды осаждения белков.

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ: Изучить основные свойства белка: растворимость, гидратация, ионизация белков в растворе, осаждение белков из растворов (обратимое и необратимое), познакомиться с методами выделения белков, освоить метод разделения белка - хроматографический

СПИСОК ОСНОВНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Лекции по курсу биологической химии

2. Северин Е.С. Биохимия . М. 2006

3. Николаев А.Я. Биологическая химия. 2004

4. Таганович А.Д. Кухта В.К Биологическая химия. 2005

5. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. М. 2001

СПИСОК ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

6. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия, 2002

7. Марри Р. Греннер Д. Биохимия человека, 2000

8. Некоторые вопросы биохимии детского возраста . Учебное пособие для студентов педиатрического факультета, Оренбург, 2012.- 120С.

Содержание темы

1. Физико-химические свойства белков. Молекулярный вес, размеры и форма молекул. Растворимость, ионизация, гидратация.

2. Белки как амфотерные электролиты. Механизм возникновения электрического заряда у белковой молекулы. Факторы, определяющие величину и знак заряда. Понятие изоэлектрической точки белков.

3. Обратимое осаждение белков – высаливание; механизм и факторы, вызывающие процесс.

4. Лабильность пространственной структуры белков и их денатурация. Факторы, вызывающие денатурацию. Шапероны – класс белков, защищающий другие белки от денатурации в условиях клетки и облегчающие формирование их нативной структуры.

5. Методы выделения индивидуальных белков: гель-фильтрация, ионообменная, афинная хроматография.

Методы очистки белков от низкомолекулярных примесей (диализ, ультрафильтрация). Применение.

Базисные знания

Из курса биоорганической химии студенты должны знать:

- физико-химические свойства белков;

- уровни организации белковой молекулы

Из курса биофизики:

- устройство и работу ФЭК, а также порядок работы с ним.

Практические навыки, которыми должен овладеть студент по теме занятия

а) при разделении белков сыворотки крови на фракции методом высаливания (разделение альбуминов от глобулинов).

б) открывать качественно белок в моче сульфосалициловой

кислотой

Студент должен уметь выполнить работы по осаждению белков плазмы или патологических белков в биологических жидкостях, методы очистки белков, знать лабораторные работы, имеющие практическую значимость, интерпретировать данные анализов

Практическая часть занятия Высаливание белков сыворотки

Принцип метода: Высаливание белков сыворотки крови (NH₄)SО₄ может быть использовано для разделения альбуминов от глобулинов в связи с тем, что глобулины осаждаются при 50% насыщении, а альбумины при 100% насыщении (NH₄)SО_4.

Ход работы. Налить в пробирку 2-3 мл сыворотки крови и добавить равный объем насыщенного раствора (NH₄)SО₄. Через 15 минут осадок отфильтровать и к фильтрату добавить сухого (NH₄)SО₄ до полного насыщения. Осадок через 10 минут отфильтровать. Для доказательства обратимости высаливания полученные осадки прямо на фильтрах смочить 2-3 мл дистиллированной воды. Отметить их растворение. С фильтратами проделать биуретовую пробу.

Результат:

Вывод: