3.2.Механизмы инактивации фактора Xa и viIa ингибитором пути тканевого фактора (tfpi).

Ингибитор пути тканевого фактора (TFPI) (син. ингибитор свертывания, ассоциированный с липопротеином) впервые клонирован и охарактеризован по первичной аминокислотной последовательности молекулы в лаборатории Broze (1988) . Он блокирует самые первые реакции системы свертывания крови. TFPI принадлежит к семейству трехглавых ингибиторов Кунитца (кунинов) и состоит из тандема трех доменов Кунитца (К1, К2 и К3), из которых первый (К1) ингибирует фактор VIIa, связанный с тканевым фактором, а второй (К2) – фактор Xa. Третий домен не имеет ингибиторной активности к протеазам, но в его структуре и в положительно заряженной С (СООН) –концевой последовательности молекулы TFPI локализован участок связывания гепарина и гепаран сульфата протеогликанов эндотелия, таких как синдеканы и глипиканы. В основном TFPI синтезируется клетками эндотелия сосудов и экспонируется на клеточную поверхность. Когда тканевой фактор появляется на поверхности поврежденной стенки сосуда TFPI ингибирует инициирование каскада свертывания следующим механизмом. Сначала TFPI образует комплекс с фактором Xa. Этот комплекс связывается с отрицательно заряженными протеогликанами мембраны клеток и повышается локальная концентрация ингибитора, который связывает фактор VIIa и инактивирует комплекс тканевой фактор- фактор VIIa. TFPI блокирует способность комплекса тканевой фактор- фактор VIIa активировать фактор X, а также связываться и активировать клетки через рецептор, активируемый протеиназами –2 (PAR-2).

3.3.Механизмы инактивации фактора Xa серпином, зависимым от протеина z(zpi).

Впервые протеин Z был получен в 1977 году Plowse и Esnouf из плазмы быка и назван протеином Z , поскольку был последним белком, элюируемым с колонки при ионнообменной хроматографии. В 1984 году белок получен из плазмы крови человека. Структура молекулы протеина Z весьма подобна структуре факторов VII,IX,X и протеина С. Но в отличие от указанных факторов протромбинового комплекса в структуре, соответствующей типичному активному центру сериновых протеиназ отсутствуют гистидин и серин каталитической триады (Ser,His,Asp). Именно эта особенность явилась причиной того, что протеин Z, подобно протеину S, не имеет протеолитической активности. Основная функция протеина Z – служить кофактором серпина, ингибитора, зависимого от протеина Z(ZPI).

Ингибитор, зависимый от протеина Z(ZPI) , является членом семейства серпинов и содержит тирозин (Tyr) в своем реактивном центре ( в P1). В плазме ZPI циркулирует в комплексе с протеином Z. ZPI ингибирует фактор Xa в присутствии фосфолипидов и ионов Са и скорость ингибирования возрастает в 1000 раз при наличии в системе протеина Z. Создана модель ингибирования фактора Xa ZPI.Согласно этой модели циркулирующий в плазме комплекс протеина Z- ZPI взаимодействует с фосфолипидной поверхностью активированных клеток через протеин Z , имеющий, как все белки протромбинового комплекса, Гла-домен. ZPI, связанный с поверхностью, взаимодействует с фактором Xa и ингибирует его активность.

Гепарин не оказывает влияния на ингибирование фактора Xa ZPI в присутствии протеина Z. ZPI не ингибирует активности тромбина, факторов IXa, XIIa, каллекреина, протеина С , но способен ингибировать фактор XIa , причем для осуществления этой реакции не требуется протеин Z, фосфолипиды и ионы Са.

Отмечают низкий уровень протеина Z, как и другим факторов протромбинового комплекса, у новорожденных, а также снижение его уровня при ДВС-синдроме (диссеминированном внутрисосудистом свертывании), заболеваниях печени, амилоидозах, что может объясняться потреблением этого белка при свертывании крови или нарушением его синтеза. Дефицит протеина Z проявляется в геморрагиях. Вместе с тем, весьма неожиданным оказался тот факт, что 10% здоровых людей имеют уровень протеина Z ниже 50% без тенденции к кровоточивости. Подобный феномен (снижение уровеня протеина Z) выявлен у женщин, принимающих оральные контрацептивы. Трансгенные мыши, дефицитные по протеину Z, также имели нормальный фенотип, не имели склонности к геморрагии при отсутствии провокации тромбообразования и сочетанных дефицитов факторов свертывания. Однако, у трансгенных мышей, гомозигот по протеину Z, в комбинации с дефектом фактора V ( Лейденовская мутация) отмечена абсолютная летальность. Полагают, что тромботический риск у трансгенных мышей гомозигот по протеину Z подобен таковому у гетерозигот, дефицитных по TFPI.

Снижение протеина Z ассоциируется с первичной стенокардией и в 4 раза повышает риск развития стенокардии. Взаимосвязь между дефицитом протеина Z и риском артериального тромбоза свидетельствует о важной физиологической функции этого белка, еще не до конца изученной.