ОТДЕЛЕННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ХАРАКТЕРА ВСКАРМЛИВАНИЯ ДЕТЕЙ. УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕС

МиНИСТЕРСВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РФ

Учебно-методическое пособие

для студентов педиатрических факультетов, интернов, ординаторов и врачей педиатров.

Отделенные последствия характера вскармливания детей

на ранних этапах развития.

На протяжении многих лет основным предметом исследования питания детей грудного возраста было изучение норм потребления отдельных пищевых веществ, адекватности вскармливания для обеспечения роста и развития. В последние годы наблюдается заметное изменение интереса исследований детского питания в направлении изучения влияния питания на ранних этапах развития на состояние здоровья в последующие годы жизни.

Первым исследованием этого направления была работа D.Barker, который в 1995 году опубликовал результаты исследований, проведенных в Англии. В ходе этой работы было проведено сопоставление веса при рождении 16000 мужчин и женщин, родившихся в период с 1911 по 1930 год в Хертворшире, с летальностью от ишемической болезни сердца (Рис.1). Было выявлено, что рождение с малой массой тела (< 2500 г) увеличивало почти в 2 раза показатели летальности от ишемической болезни сердца (ИБС). Анализ полученных данных показал, что в группе пациентов, родившихся малой массой тела, чаще встречались случаи гипертонии и инсулин-независимого сахарного диабета, так называемого инсулин-резистентного или метаболического синдрома. Так в группе мужчин, родившихся массой тела менее 2500 г, частота случаев сахарного диабета и снижения толерантности к глюкозе была в 3 раза выше по сравнению теми, кто родился массой тела 3400-3800 (1). Эта связь была подтверждена другими крупными эпидемиологическими исследованиями в Англии, США и Швеции (2,3).

В дальнейших исследованиях, проведенных в Австралии, Великобритании была прослежена взаимосвязь массы тела при рождении с уровнем артериального давления и кортизола в плазме крови (4). Было продемонстрировано, что рождение с низкой массой тела связано с повышением уровня кортизола плазмы натощак у жителей всех выбранных регионов. Статистический анализ продемонстрировал снижение уровня кортизола на 23,9 нмоль/л на каждый килограмм увеличения веса при рождении. Уровень кортизола положительно коррелировал с артериальным давлением наблюдаемых субъектов. Это исследование позволяет предположить, что возможным механизмом влияния является повышение активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси у детей с низкой массой тела при рождении.

Изучение историй развития 14611 мужчин и женщин, родившихся в 1915 – 1929 годах в Швеции, показало, что дефицит каждых 1000 г массы тела при рождении повышает на 70% риск развития ишемической болезни сердца у мужчин (5).

Низкий вес ребенка при рождении и недоношенность во многих случаях являются показателями дефицита отдельных (или многих нутриентов) и/или перенесенной гипоксией и отражают усилия плода адаптироваться к неблагоприятным условиям внутриутробного существования. Не исключено влияние каких-то дополнительных факторов, например, социальных условий или образа жизни. Однако следует отметить, что закономерности влияния малой массы тела на развитие ишемической болезни сердца найдены во всех социальных группах.

В дальнейших исследованиях ученым удалось показать, что не только малая масса тела при рождении, но и так называемый «скачок роста» или увеличение прибавки веса и роста детей, родившихся весом менее 2500 г. достоверно увеличивает риск развития ИБС. По мнению исследователей, атеросклеротические нарушения, ведущие к ИБС, являются следствием плохого пренатального питания и гипоксии с последующим усиленным постнатальным питанием.

Роль раннего постнатального питания, прибавки в весе на первом году жизни и последующего артериального давления изучали Y.Cheung с соавт. (2000), которые на протяжении 30 лет наблюдали за ростом, развитием и характером артериального давления у 122 субъектов, родившихся массой тела менее 2500 г. Исследователи доказали, что более высокие весо-ростовые показатели у детей в возрасте 6-18 месяцев сопровождались более высоким уровнем артериального давления в возрасте 30 лет (6).

Близкие результаты получены в последних по времени работах, где удалось обнаружить, что повышенная прибавка массы тела у недоношенных детей на первом году жизни приводила в возрасте 13-16 лет к более высоким показателям уровня проинсулина в плазме крови, то есть являлось фактором риска развития резистентности к инсулину и развитию диабета 2 типа (7).

Большинство закономерностей отдаленного влияния питания на развитие метаболического синдрома было получено при изучении недоношенных детей. Однако в развитых странах количество недоношенных и детей с внутриутробной гипотрофией по статистике не превышает 5-6% от общего количества детей и не может объяснить рост числа детей с ожирением и инсулин-резистентным сахарным диабетом. Поэтому особый интерес представляют крупные когортные эпидемиологические исследования, изучающие влияние прибавки массы тела у здоровых доношенных детей на первом году жизни на развитие ожирения в более старшем возрасте. Одно из таких исследований было проведено в США (8). В исследование были включены почти 28.000 новорожденных детей из 12 штатов США. Все дети получали питание в соответствие с выбором родителей; наблюдение и антропометрия проводилась на протяжении первых 7 лет жизни. Эта работа показала, что высокая прибавка массы тела в первом полугодии жизни достоверно коррелирует с развитием ожирения у детей в возрасте 7 лет (Рис. 2). Аналогичная работа, проведенная в Великобритании, также показала достоверную корреляцию ожирения у детей в возрасте 5 лет с прибавкой массы тела в первом полугодии жизни. (9)

По мнению T.Wilkin (2002) избыточная прибавка массы тела детей в раннем возрасте впоследствии становится риском развития метаболического синдрома (10). Эти данные вызывают оправданную обеспокоенность медицинской общественности вследствие широко распространения в развитых странах ожирения, сахарного диабета. В США число детей с ожирением удвоилось за последние 30 лет. Также вызывает беспокойство педиатров тот факт, что за последние 20 лет достоверно увеличился вес и рост детей дошкольного возраста. Не исключено, что существует реальная связь этих событий.

Суммируя результаты многочисленных эпидемиологических исследований, можно сказать, что малый вес ребенка при рождении и высокая прибавка массы тела на первом году жизни являются фактором риска повышения артериального давления и нарушения секреции инсулина во взрослом возрасте (11).

К сожалению, большинство исследований у здоровых доношенных детей проводились без учета потребления отдельных ингредиентов, что могло бы прояснить причинно-следственные взаимодействия. Тем не менее, в 2-х исследованиях проводился анализ рационов детей грудного и раннего возраста и сопоставление его с индексом массы тела детей более старшего возраста. По данным M.Rolland-Cachera только потребление белка с высокой степенью достоверности влияло на индекс массы тела у детей в возрасте 8 лет (12). В исследованиях Scagliono S. с соавт. (2002) было обнаружено, что дети с ожирением в возрасте 5 лет, имели достоверно более высокое потребление белка в возрасте 1 года (13). Ранее, в экспериментальных исследованиях было продемонстрировано, что у новорожденных крысят отложение жира прямо коррелирует с уровнем белка в рационе и не зависит от потребления углеводов (14)

Механизмы влияния нарушения питания на ранних этапах развития.

В настоящее время продолжается поиск механизмов влияния нарушения питания плода и новорожденного на риск развития артериальной гипертонии и ИБС. Одной из уже упомянутых теорий является «эндокринная» гипотеза. Считается, что нарушения питания и внутриутробная гипоксия вызывают нейроэндокринные нарушения у плода, вовлекающие гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую ось, которая может служить медиатором этого влияния.

Другим возможным механизмом влияния считается сосудистая эндотелиальная дисфункция, которая была выявлена у взрослых, родившихся малой массой тела (15). Сосудистая эндотелиальная дисфункция в этой работе по силе своего воздействия в качестве фактора риска развития атеросклероза равнялась курению.

Недостаточное питание плода, которое может быть следствием не только недостаточного питания матери, но и нарушением развития плаценты и токсикозом беременных, нарушает способность клеток поджелудочной железы к адекватной секреции инсулина и является фактором риска развития инсулин-резистентного сахарного диабета (10).

По мнению A.Lucas у недоношенных детей, получавших на первом году жизни «усиленное» питание, нарушается секреция лептина или, возможно, снижается чувствительность гипоталамуса к лептину. Известно, что лептин секретируется адипоцитами и действует как сигнал «сытости» в гипоталамусе (11).

Исследования метаболизма холестерина у детей в возрасте 8-12 лет, родившихся недоношенными с внутриутробной гипотрофией, показало снижение эффективности всасывания холестерина и более высокий уровень синтеза холестерина по сравнению с группой детей, без признаков гипотрофии. Возможно, нарушение внутриутробного роста является дополнительным механизмом неблагоприятного влияния недоношенности и гипотрофии на сердечно-сосудистые заболевания взрослого человека (16).

Изучения последствий нарушения питания на ранних этапах развития позволило сформулировать концепцию «программирования» питанием (11). Согласно этой концепции программирование питанием может произойти только в определенные периоды жизни, так называемые «критические» периоды или «критические окна». Воздействия в моменты повышенной чувствительности - критические периоды жизни имеют долговременные последствия для здоровья и жизни человека. В биологии понятие программирования существует с давних пор под названием импринтинга. Метаболическим импринтингом называют феномен, при котором воздействие определенных факторов в критическом периоде развития организма вызывает стойкие метаболические изменения, сохраняющиеся в дальнейшей жизни. Метаболический импринтинг является адаптивным феноменом, хорошо изученным биологами. Большинство исследователей считают, что период внутриутробного и раннего постнатального развития является критическим периодом для метаболического импринтинга.

Исследования программирования питанием у животных показали, что питание в критические периоды развития мозга имеет необратимое влияние на размер мозга, число нейронов, поведение, память и другие показали развития нервной системы (17). Согласно экспериментальным данным D.Hill (2000) у крыс недостаточное белковое питание плода приводит долговременному снижению числа клеток поджелудочной железы и нарушению секреции инсулина (18).

По экспериментальным данным использование в период введения прикорма диеты с высоким содержанием углеводов приводит к пожизненному увеличению активности ферментов синтеза холестерина и других липидов.. У приматов избыточное питание в раннем возрасте приводило к ожирению после достижения половой зрелости (19).

A.Lucas в сотрудничестве с C.Hales получили непрямые доказательства наличия метаболических нарушений, связанных с характером раннего питания у экспериментальных животных. У потомства крыс, получавших ограниченное белковое питание в период беременности, было выявлено двойное увеличение активности фосфоэнолпируват карбоксикиназы (ключевой фермент глюконеогенеза) и снижение в 2 раза активности глюкокиназы (ключевой фермент гликолиза). Это нарушение активности ферментов приводило в резкому сдвигу метаболизма углеводов в печени в направлении, противоположном действию инсулина (11,20,21).

Интересные результаты были показаны в работе C.Chapman (2000), изучавшей в эксперименте влияние потребление жира в период беременности на активность липопротеин липазы и экспрессии генов, сохранявшихся в дальнейшей жизни. Результаты работы показали, что рацион, содержащий высокий уровень омега-3 полиненасыщенных жирных кислот в период беременности сопровождался более высоким уровнем липопротеин липазы и снижением уровня триглицеридов после высоко жирового рациона у потомства (22). По-видимому, стойкие изменения метаболизма под влиянием питания на ранних этапах развития являются ключевым процессом адаптивной перестройки организма.

Существует несколько предположений о возможном механизме влияния фетального и постнатального питания на метаболизм. Наиболее вероятной представляется теория эпигенетической регуляции. Клеточная дифференциация характеризуется стабильной способностью экспрессии определенного количества генов в соответствие с поступающими стимулами. Эта стабильность обеспечивается эпигенетическими механизмами, которые позволяют контролировать некоторые наследственные свойства (23). Важно отметить, что эти эпигенетические изменения могут быть мейозно-митозно наследственными и, следовательно, могут наследоваться при репликации соматических клеток. Эпигенетические механизмы поддерживают специфичность экспрессии генов, характерных для разных тканей и клеток. Так, экспрессия генов в гепатоцитах отличается от экспрессии генов в нейронах или жировых клетках (24).

Прямые доказательства влияния алиментарных факторов на эпигенетическую генную регуляцию получены в экспериментальных условиях. В работе R.Waterland с соавт. (2002) исследовали 3 группы новорожденных крысят (маловесные, нормальные, с крупным весом) в соответствие с питанием матери во время беременности. С момента введения прикорма все крысята стали получать одинаковое, стандартное питание. Далее, у этих животных изучали функциональное состояние эндокринного аппарата поджелудочной железы. У маловесных животных было обнаружено стабильное 70% снижение концентрации инсулин 2 мРНК. Снижение экспрессии гена в локусе инсулин 2 подтверждает наличие эпигенетических изменений, сопровождающихся нарушением экспрессии гена. (25) Таким образом, нутритивные факторы в период раннего развития реально влияют на эпигенетические механизмы, которые лежат в основе метаболической дифференцировки.

К настоящему времени известны некоторые процессы реализации эпигенетических механизмов, которые включают: ДНК-метилирование, различные модификации белков гистона, которые «упаковывают» ДНК в ядре клетки (включая ацетилирование, метилирование и действие убихинона), сопровождающиеся далее ауторегуляцией специфических факторов транскрипции (26). Метилирование ДНК (добавление метильной группы к углеродному атому цитозина в 5-й позиции в составе цитозин-гуанин динуклеотида) считается фундаментальным механизмом, ответственным за эпигенетический контроль экспрессии гена и поддержание целостности генома. Процесс метилирования ДНК зависит от наличия достаточно количества отдельных нутриентов в плазме крови и тканях организма. Например, дефицит цинка в экспериментальных моделях снижает использование метильных групп и приводит к снижению метилирования ДНК в гепатоцитах. Дефицит селена снижает метилирование ДНК в энтероцитах и гепатоцитах крыс (27).

Обогащение рациона экспериментальных беременных и лактирующих животных нутриентами-донаторами метильных групп приводило к усилению процессов метилирования ДНК у новорожденных крысят и меняло их фенотип в направлении оздоровления и увеличения продолжительности жизни (28)

Изучение экспрессии гена клеток поджелудочной железы в экспериментальных условиях позволяет утверждать, что раннее постнатальное питание может определять построение и поддержание эпигенетических механизмов, ответственных за клеточно-специфическую активность гена на протяжении всей жизни. Более того, эти данные позволяют предполагать, что «импринтированные» гены генома обладают повышенной чувствительностью к факторам окружающей среды (25).

Возможно, в развитии метаболического синдрома у детей, перенесших неблагоприятный внутриутробный период и получавших постнатально избыточное питание, задействовано сразу несколько механизмов, включающих эндокринные нарушения и метаболические, связанные с эпигенетической регуляцией процессы.

К настоящему времени высказаны интересные гипотезы о механизме связи избыточного потребления белка в раннем детстве с последующим развитием ожирения и инсулин-резистентного диабета. Высокое потребление белка приводит к повышению уровня инсулиногенных аминокислот в плазме крови, которые активизируют секрецию инсулина и инсулино-подобного фактора роста-1 (ИФР-1) у детей. В работе C.Hoppe c соавт. (2004) доказано, что повышенное потребление белка увеличивает секрецию ИФР-1 у детей в возрасте 2-х лет (29). Известно, что ИФР-1 стимулирует пролиферацию адипоцитов, увеличенное количество которых в сочетании с другими неблагоприятными факторами может способствовать развитию ожирения у детей. В экспериментальных условиях было доказано, что повышение уровня белка в рационе повышало экспрессию генов ИФР-1, причем не во всех тканях, а только в адипоцитах (30).

В экспериментальном исследовании B. Lonnerdal (2003) оценивалось вскармливания смесями с разным содержанием белка на уровень инсулина в раннем постнатальном периоде у новорожденных обезьян (31). Результаты исследования показали одинаковый рост и основные биохимические показатели у животных, получавших материнское молоко или низкобелковую смесь (11 г белка/л). Проведенный в возрасте 1 месяца глюкозо-толерантный тест и определение уровня инсулина в плазме крови показали одинаковые данные в группе грудного вскармливания и низкобелковой и более высокие показатели в группе животных, получавших стандартную смесь (15 г белка/л). Расчеты показали, что каждому увеличению массы тела, равному одному стандартному отклонению в неонатальном периоде, соответствует увеличение концентрации инсулина на 32-33%, а к возрасту 13 – 16 лет уровень инсулина увеличивается на 44% (7).

Ребенок первого года жизни получает с материнским молоком очень небольшое количество белка, так как в грудном молоке содержится всего 9-11 г белка/л.

Белковый компонент детских молочных смесей

Современные детские смеси содержат в среднем от 14 до 17 г белка/л, и снижение уровня белка в продуктах оказалось довольно сложной проблемой (Табл.1). При снижении уровня белка в стандартной смеси (сывороточный белок/казеины = 60/40) до 12 г/л уплощалась весовая кривая, и обнаруживалось снижение уровня незаменимой аминокислоты триптофан в плазме крови детей. В тоже время использование в питании грудных детей смесей, содержащие 15 г белка/л приводило к неблагоприятному повышению уровня ряда аминокислот и мочевины в плазме крови.

Эти факты заставили ученых более внимательно рассмотреть состав белков коровьего и грудного молока.

Основным белком грудного молока является альфа-лактальбумин (ЛА), составляя 25-35% общего белка грудного молока (32). В коровьем молоке, на основе которого изготавливают детские молочные смеси уровень ЛА составляет только 2-5% общего содержания белка. ЛА обладает рядом физиологических свойств очень важных в раннем грудном возрасте. Прежде всего, в ЛА содержится необычно высокий уровень особенно важных для грудного ребенка аминокислот (триптофан – 4-5%, лизин – 11%, цистеин – 6%) причем гомологическое совпадение аминокислотного состава грудного и коровьего ЛА составляет 74%. ЛА обладает способностью связывать кальций и цинк и ускоряет их всасывание. При переваривании ЛА образуются пептиды, обладающие антибактериальными и иммуностимулирующими свойствами, которые влияют на процессы апоптоза и ускоряют пролиферацию клеток слизистой оболочки кишечника (33).

Низкий уровень триптофана и цистеина в белках коровьего молока требует увеличения уровня белка в детских молочных смесях и приводит ко многим неблагоприятным последствиям. Поэтому исследователи предположили, что обогащение детской смеси альфа-лактальбумином позволит, с одной стороны, снизить общий уровень белка, а с другой стороны, получить близкий к грудному вскармливанию баланс аминокислот у детей, получающих искусственное вскармливание (34). Учитывая тот факт, что триптофан является предшественником серотонина, одного из нейропередатчиков в мозге, обеспечение адекватного уровня триптофана посредством обогащения смеси альфа-лактальбумином, является важным фактором оптимального развития ребенка.

Первая смесь, содержащая новый обогащенный ЛА белок, была разработана в научно-исследовательском центре Нестле. Многочисленные клинические исследования новой смеси показали адекватный уровень роста и развития, оптимальный аминокислотный баланс, снижение уровня азота мочевины и адекватный синтез белка у детей, получавших смесь с пониженным содержанием белка, обогащенную альфа-лактальбумином (35,36). Более того, в ряде исследований было показано, что альфа-лактальбумин способствует росту бифидобактерий в кишечнике у детей.

Одно из первых экспериментальных исследований влияния ЛА на уровень бифидобактерий было проведено в 2003 году W.Bruck (2003). В этой работе на модели младенцев обезьян проверялась гипотеза о том, что обогащение смеси ЛА улучшает состав микрофлоры кишечника и может предотвратить развитие инфекции, вызываемой энтеропатогенной кишечной палочкой (E.Coli 027). При проведении этой работы встал вопрос об адекватных методах изучения микрофлоры кишечника, так как в последнее время стало очевидным, что многие бактерии кишечника не культивируются даже на самых современных средах. Поэтому в данной работе использовался метод FISH (флюоресцентная гибридизация in situ) со специфической r-РНК. Доказано, что этот метод является самым точным, позволяющим оценить вклад в общую микрофлору плохо культивируемых микробов.

Результаты этой работы позволили доказать, что обогащение смеси лактальбумином позволяет приблизить уровень микрофлоры кишечника к таковому на грудном вскармливании (37). Более того, результаты исследований показали защитное действие микрофлоры от патогенной кишечной палочки (Рис.3).

В клиническом исследовании микрофлоры кишечника у детей с использованием метода FISH, что обогащение смеси лактальбумином повышает уровень бифидобактерий в кишечнике у детей и приближает его к таковому на грудном вскармливании (рис. 4) Можно с уверенностью считать, что младенцы, получающие продукт, обогащенный лактальбумином, получают дополнительную защиту от патогенных микроорганизмов (38).

Результаты исследований смеси с пониженным содержанием и более высокой эффективностью белка позволяют говорить о новом поколении детских смесей, обладающих не только питательной, но и защитной функцией.

ИЛЛЮСТРАЦИИ 

Литература

 

1. Barker D. Fetal origin of coronary heart disease. B.Med.J. 1995;311:171-174

2. Eriksson JG, Forsen T, Tumilehto J. Catch-up growth in childhood and death from coronary heart disease: longitudinal study. Br.Med.J. 1999;318:427-431

3. Leon DA, Lithell HO, Vagero D. et al. Reduces fetal growth rate and increased risk of death from ischemic heart disease: cohort study of 15000 Swedish men and women born 1915-29. B.Med.J.1998: 317:241-245

4. Phillips DI, Walker BR, Reynolds RM. et al. Low birth weight predicts elevated plasma cortisol concentrations in adults from 3 populations. Hypertension. 2000;35:1301-1310

5. Eriksson JG, Forsen T, Tumilehto J. Early growth and coronary heart disease in later life: longitudinal study. B.Med.J. 2001; 322:949-953

6. Cheung YB, Low L., Osmond C. et. al. Fetal growth and early postnatal growth are related to blood pressure in adults. Hypertension, 2000; 36:795-805

7. Singhal A., Fewtrell C., Cole T., Lucas A. Low nutrient intake and early growth for later insulin resistance in adolescents born preterm. Lancet. 2003, 28;361 (9376); 2248-9

8. Stettler N, Zemel B, Kumanyika S. et. al. Infant weight gain and childhood overweight status in a multicenter cohort study. Pediatrics. 2002; 109:194-199

9. Ong K, Ahmed M, Emmett P, et.al Association between postnatal catch-up growth and obesity in childhood: prospective cohort studies. BMJ, 2000:320:967-971

10. Wilkin T, Metcalf B, Murphy M, et. al. The relative contribution of birth weight, weight change and current weight to insulin resistance in contemporary 5-year-olds. Diabetes. 2002;51:3468-3472

11. Lucas A. Programming by early nutrition: an experimental approach. J.Nutr. 1998;128(2):401S-406S

12. Roland-Cachera, M.F., Deheeger M, Akrout M, Bellisle F. Influence of adiposity development: follow-up study of nutrition and growth from 10 months to 8 years of age./International Journal of obesity and related metabolic disorders/ 1995:19, 573-578

13. Scaglioni S, Agostoni C, De Notaris R, Radaelli N. et al. Early macronutient intake and overweight at 5 years of age./ Int.J.of Obesity/ 2000, 24, 777-781

14. Kim S-H, Mauron J, Gleason R, et.al. Selection of carbohydrate to protein ratio and correlations with weight gain and body fat in rats allowed three dietary choices. J.Vit.Nutr.Res. 1991;61:166-179

15. Leeson CP, Kattenhorn M, Morley R. et.al. Impact of low birth weight and cardiovascular risk factors on endothelial function in early adult life. Circulation, 2001; 103:1264-1270

16. Mortaz M, Fewtrell MS, Cole T. et.al. Birth weight, subsequent growth, and cholesterol metabolism in children 8-12 years old born preterm. Arch.Dis.Child. 2001, 84:212-217

17. Smart J. Undernutrition, learning and memory: review of the experimental studies. In: Taylor TG, Jenkins NK, eds. Proceeding of XII international congress of nutrition. London: John Libbey, 1986:74-78

18. Hill DJ, Duville B. Pancreatic development and adult diabetes. Ped.Res. 2000; 48:269-274

19. Park KS, Kim SK, Kim MS, et.al. Fetal and early postnatal protein malnutrition cause long-term changes in rat liver and muscle mitochondria. J.Nutr. 2003; 133: 3085-3090

20. Hales CN, Desai M, Ozanne SB, et al. Fishing in the stream of diabetes; from measuring insulin to the control of fetal organogenesis. Biochem.Soc.Trans. 1996:24:341-350.

21. Hales CN, Ozanne SE. The dangerous road of catch-up growth. The J.of physiology. 2002;547.1:5-10

22. Chapman C, Morgan L, Murphy M. Maternal and early dietary fatty acid intake: changes in lipid metabolism and liver enzymes in adult rats. J.Nutr. 2000;130:146-151.

23. Reik W, Dean W, Walter J. Epigenetic reprogramming in mammalian development. Science. 2001;293:1089-1093

24. Waterland R, Jirtle R. Transposable elements: targets for early nutritional effects on epigenetic gene regulation. Molecular and cellular Biology. 2003; 23:5293-5200.

25. Waterland R, Garza C. Early postnatal nutrition determines adult pancreatic glucose-responsive insulin secretion and islet gene expression in rats. J.Nutr. 2002;132:357-364

26. Bird A. DNA methylation patterns and epigenetic memory. Genes and Development. 2002;16(1):6-21

27. Friso S, Choi S-W. Gene-nutrient interaction and DNA methylation. J.Nutr. 2002;132:2382S-2387S.

28. Cooney CA, Dave AA, Wolff GL. Maternal methyl supplements in mice affect epigenetic variation and DNA methylation of offspring. J.Nutr. 2002; 132:2393S-2400S

29. Hoppe C, Molgaard C, Lykke B. et.al. Protein intake at 9 mo of age is associated with body size but not with body fat in 10-y-old Danish children. Am.J.Clin.Nutr. 2004;79:494-501

30. Brameld JM, Atkinson JL, Saunders JC, Pell JM, Buttery PJ, Gilmour RS. Effects of growth hormone administration and dietary protein intake on insulin-like growth factor I and growth hormone receptor mRNA Expression in porcine liver, skeletal muscle, and adipose tissue. J Anim Sci. 1996 Aug;74(8):1832-41.

31. Lonnerdal B, Kelleher S, Lien E. Effect of insulinogenic amino acids on growth and metabolic response in formula-fed infant rhesus-monkeys. J.Ped.Gastroent.Nutr. 2003;36:531.

32. Montagne P, Cuilliere ML, Mole C, et.al. Immunological and nutritional composition of human milk in relation to prematurity and mother’s parity during the first 2 weeks of lactation. J.Ped.Gastroent.Nutr. 1999;29:75-80.

33. Lien EL. Infant formulas with increased concentrations of a–lactalbumin. Am.J.Clin.Nutr. 2003;77 (Suppl):1555S-8S

34. Lonnerdal B, Lien LL. Nutritional and physiologic significance of a–lactalbumin in Infants. ILSI, 2003,Sept. 295-305.

35. Raiha NCR, Fazzolari Nesci A, Cajozzo C et. al. Protein Quantity and quality in infant formula: closer to the reference. NNW series “Infant Formula:Closer to the reference. Ed: Raiha N, Rubatelli F. Lippicott Williams&Wilkins 2002, v.47, p.111-120

36. Bachmann C, Haschke-Becher E. Plasma amino acid concentrations in breaste-fed and formula-fed infants and reference intervals. . NNW series “Infant Formula:Closer to the reference. Ed: Raiha N, Rubatelli F. Lippicott Williams&Wilkins 2002, v.47, p.121-138

37. Bruck WM, Kelleher SL, Gibson GR et.al. rRNA probes used to quantify the effects of glycomacropeptides and a-lactalbumin supplementation on the predominant groups of intestinal bacteria of infant rhesus monkeys challenged with enteropathogenic Escherichia Coli. J.Ped.Gastroent.Nutr. 2003,37:273-280.

38. Hager JC, Grathwohl D, van Hof MA. Growth and metabolism of infants fed a whey-based formula with reduced protein content with probiotic, prebiotic and cymbiotic (Prof. Fazzolari, Palermo study). 99.01.INF.2002; 1-65. Nestle Research Center