Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
Метод
основан на способности мезофильных
аэробных и факультативно-анаэробных
микроорганизмов размножаться на плотном
питательном агаре при 30
С
в течении 72 часов.
Для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов готовят разведения от 1:10 до 1:1000000. Стерильной пипеткой переносят 1 мл исследуемого молока в пробирку с 9 мл физраствора, из нее переносят 1 мл смеси в другую пробирку с физраствором, затем в 3, 4, 5 и 6 пробирку. Из последних двух разведений в чашки Петри вносят по 1 мл и заливают 15 мл расплавленного и охлажденного до температуры 40-45 ˚С МПА, тщательно перемешивают вращательными движениями. После их помещают в термостат при температуре 30 ˚С на 72 часа. Количество выросших колоний подсчитывают на каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне. Каждую подсчитанную колонию отмечают маркером на дне чашки. При этом для подсчета берут чашки, количество колоний в которых не менее 30 и не более 500. При большом числе колоний и равномерном их распределении дно чашки Петри делят на четыре и более одинаковых секторов, подсчитывают число колоний на двух-трех секторах, находят среднеарифметическое число колоний, выросших на одной чашке.
Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 см3 вычисляют по формуле
Х
= n
*
где n – количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;
m – число десятикратных разведений.
За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое, полученное по всем чашкам.
Сорт молока зависит от количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1мл молока, по санитарным правилам и нормам сырое молоко подразделяют на:
Молоко сырое, высший сорт – не более 300 тыс бактерий в 1 мл;
Молоко сырое, I сорт – не более 500 тыс бактерий в 1 мл;
Молоко сырое, II сорт – не более 4 млн бактерий в 1 мл. [7]
2.2.3 Определение бактерий группы кишечных палочек (бгкп)
Метод основан на способности БГКП ( бесспоровые грамотрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, в основном, являющиеся представителями родов эшерихий, цитробактер, энтеробактер, клебсиелла, серация) сбраживать в питательной среде лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37˚ С в течении 24 ч.
Для определения БГКП посев молока проводят дробно в объеме 3,3 мл в шесть пробирок. Для этого в три пробирки со средой Кесслера вносят по 1 мл молока, а в три другие пробирки по 0,1 мл молока. Посевы помещают в термостат при температуре 37˚ С на 24 ч. Пробирки с посевами просматривают, отмечают изменения: появление помутнения среды и газа. По сумме признаков устанавливают бродильный титр, т.е. наименьший объем продукта, в котором обнаружены БГКП.
Для подтверждения принадлежности к БГКП проводят пересев на среду Эндо с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии, для чего петлей берут минимальное количество посевного материала и проводят посев частым штрихом. Перед посевом дно чашки с агаром Эндо делят на четыре сектора. Посев из каждой забродившей пробирки со средой Кесслера проводят в отдельный сектор. Чашки с посевами помещают в термостат при температуре 37˚ С на 24 ч.
При отсутствии на среде Эндо колоний, типичных для БГКП ( красных с металлическим блеском, розовых), продукт считают не загрязненным БГКП. При наличии типичных колоний для БГКП, готовят препараты из изолированных колоний, окрашивают по Грамму и микроскопируют.[4]