Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
МУ_Санитария_2009г_корр 15.02.2010г.doc
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
689.15 Кб
Скачать

3 .1 Определение лейкоцитов в молоке

Для определения лейкоцитов в специальные центрифужные пробирки наливают 10 см3 профильтрованного через вату молока и центрифугируют 5 мин при 1200 об/мин. Обычно в осадке на дне пробирки сконцентрированы белки молока, лейкоциты, микроорганизмы, частички механической примеси и др. Осадок, полученный при центрифугировании проб молока здоровых коров, обычно имеет

желтоватый цвет. Из осадка платиновой петлей берут пробу и делают на

Рисунок 2.1 – Молоко, содержащее лейкоциты (увеличение в 400 раз)

предметном стекле тонкий мазок, подсушивают его на воздухе, фиксируют и окрашивают раствором метиленового синего (1 см3 насыщенного спиртового раствора краски, растворенной в 30 см3 дистиллированной воды). Далее мазок рассматривают под микроскопом. В молоке больного животного в поле зрения окуляра микроскопа лейкоцитов встречается большое количество: 20-50 лейкоцитов (рисунок 2.1).

3.2 Определение остаточных количеств антибактериальных веществ в молоке с использованием стандартного диффузионного теста «Delvotest»

Агаровая среда в ампулах теста содержит стандартизованное количество спор микроорганизмов Bacillus stearothermophillus var. Calidolactis С 953. Этот вид бактерий обладает высокой чувствительностью к большинству антибиотиков, и, в особенности, к пенициллиновым и другим бета-лактамовым веществам. При хранении в холодных условиях споры остаются жизнеспособными в течение многих месяцев. При повышении температуры до 640С споры быстро размножаются, потребляя присутствующий в среде сахар и высвобождая кислоту в качестве метаболита. Когда количество кислоты становится достаточное, происходит изменение индикаторной среды с фиолетового цвета на желтый цвет. Если проба молока содержит ингибирующие вещества, например, остатки антибиотиков, то они будут распространяться в агаровой среде и, когда их концентрация станет достаточно высокой, они задержат процесс размножения бактерий и образования кислоты. В этом случае цвет теста не изменится на желтый, он останется фиолетовым. Если концентрация ингибитора выше предела обнаружения для этого ингибитора, цвет теста останется фиолетовым. Если концентрация ингибитора близка к пределу обнаружения, тест будет иметь цвет между фиолетовым и желтым.

Исходное молоко осторожно перемешивают во избежание образования пены и пузырьков воздуха. «Delvotest» разработан для объема пробы в 0,1 см3. Чувствительность метода не существенно зависит от точности этого объема, однако желательно, чтобы отклонение составляло не более 10 %. Уровень молока в пипетке в этом случае совпадает с нижним пластмассовым ободком. Капли, образующиеся на конце пипетки, удаляют о внутренний край пробирки с молоком. Проба не должна содержать пену или воздушные пузырьки. Запрещено одной и той же пипеткой отбирать более чем одну пробу.

С помощью ножниц отрезают необходимое количество ампул для проведения анализа, стараясь не повредить фольгу соседних ампул. Промаркировывают ампулы для надлежащей идентификации. Открывают ампулу, прокалывая отверстие в фольге. Отбирают 0,1 см3 молока с помощью одноразовой пипетки для отбора проб молока или дозирующего шприца с одноразовым наконечником. Для этого помещают одноразовый наконечник на дозирующий шприц, полностью нажимают на поршень, погружают наконечник на 1 см в образец молока, медленно отпускают поршень. После того как поршень вернется в начальное положение, капли на конце наконечника удаляют о внутренний край пробирки. Пробу молока в пипетке (0,1 см3 ± 10 %) , избегая образования пены и воздушных пузырей, вводят в соответствующую освобожденную и помеченную ампулу прямо на агаровую среду.

Для уточнения оптимального времени инкубации и для определения антибактериальных веществ на уровне предела обнаружения параллельно с пробами молока исследуют «контрольную пробу». Она представляет собой молоко, свободное от антибактериальных веществ. В качестве такой пробы нельзя использовать воду.

Инкубируют ампулы в термостате или водяной бане при температуре 64±0,5°С в течение времени в соответствии с таблицей 2.1, в которой представлены пределы обнаружения «Дельвотест Р» и «Дельвотест SP» для антибактериальных веществ, при этом определение результата происходит в момент, когда фиолетовый цвет «контрольной» пробы изменился на бледно- желтый (контрольное время) и когда проходит фиксированное время: 2,5 часа, 2,75 часа и 3 часа, соответственно.

Определяют результаты теста по изменению цвета среды в нижней (2/3) части ампулы. Если на поверхности агаровой среды в ампуле появляется узкий темный слой, то им пренебрегают. Определение результата проводят немедленно после извлечения ампулы из нагревателя, используя цветовую карту, прилагаемую к каждому набору. Учет результатов реакции ведется визуально. При использовании отрицательной («контрольной пробы»), она должна оцениваться первой.

Если окраска 2/3 нижней части агара изменилась на желтый цвет, то тест является отрицательным, то есть в образце отсутствуют остаточные количества антибактериальных веществ. Узкую фиолетовую полосу сверху желтого агарового слоя не учитывают, и результат теста оценивают как отрицательный.

Таблица 2.1 – Минимальные уровни обнаружения для «Дельвотеста Р» и «Дельвотеста SP»

Антибактериальное вещество, мг/л молока

«Дельвотест Р»

«Дельвотест SP»

Контрольное время

2,5 часа

Контрольное время

2,75 часа

3 часа

Пенициллин С

0,0025

0,003

0,002

0,0025

0,0025

Пенициллин G

0,004

0,005

0,003

0,003-0,004

0,003-0,004

Клоксациллин

0,015-0,025

0,025

0,015

0,015-0,025

0,02-0,025

Диклоксациллин

0,015

0,02

0,01

0,01-0,015

0,01-0,015

Оксациллин

0,01

0,01-0,015

0,005

0,01

0,01

Нафциллин

0,005-0,01

0,01

0,005

0,005-0,008

0,01

Ампициллин

0,003-0,004

0,005

0,002-0,003

0,003-0,004

0,003-0,005

Амоксициллин

0,004

0,005-0,006

0,002

0,003-0,005

0,003-0,005

Цефалексин

0,04-0,06

0,06-0,1

0,04-0,06

0,06-0,1

0,06-0,1

Цефалониум

0,01-0,015

0,015-0,02

0,005-0,01

0,01-0,02

0,015-0,025

Цефапирин

0,005

0,008-0,01

0,005

0,005-0,006

0,005-0,01

Цефаперазон

0,04-0,06

0,08

0,04 ч

0,06-0,1

0,06-0,1

Цефацетрил

0,02-0,03

0,03-0,04

0,02

0,02-0,04

0,02-0,04

Тетрациклин

0,05-0,1

0,2-0,8

од

0,2-0,4

0,3-0,6

Окситетрациклин

0,05-0,2

0,3

0,1

0,2-0,4

0,4-0,5

Хлортетрациклин

0,05-0,1

0,25-0,8

0,1-0,15

0,2-0,4

0,3-0,6

Спирамицин

1,0-5,0

5,0- не ч.

0,2

0,35-0,75

не ч.

Дигидрострепто-мицин

2,0-5,0

не ч.

0,3-0,5

1,5-3,0

2,5-10,0

Гентамицин

0,2-0,8

1,0-4,0

ОД-0,3

0,2-0,4

0,4-0,5

Канамицин

7,5- не ч.

не ч.

2,5

7,5

не ч.

Эритромицин

0,3-1,0

0,5-1,5

0,05

0,1-0,15

0,25

Тилозин

0,04-0,15

0,1-0,3

0,01-0,02

0,03-0,05

0,1

Линкомицин

0,1-0,3

0,4-1,0

0,1

0,2

0,3-0,4

Сульфадиазин

не ч.

не ч.

0,05

0,05-0,1

ол

Дапсон

не ч.

не ч.

0,001

0,001-0,004

0,004-0,008

Триметоприм

0,02-0,05

0,5-0,15

0,05

0,1-0,3

0,5

Примечание: «не ч.» - не чувствительно, предел обнаружения - выше 10 частей/млн.

Если окраска 2/3 нижней части агара лишь слегка изменилась и стала желто-фиолетовой, то образец является частично положительным, но концентрация ингибирующего соединения ниже уровня чувствительности теста.

Если окраска содержимого флакона после 3-х часов инкубации осталась фиолетовой, то образец является положительным, что говорит о наличии в пробе остаточных количеств антибиотиков в пределах чувствительности теста.

При использовании «Delvotest» на уровне предельных величин обнаружения оценку результата производят в то время, когда в «контрольной пробе» фиолетовый цвет в нижних 2/3 частях среды полностью исчезнет.