5.1 Окраска мазков околоплодных вод по Граму

Окраска по Граму наиболее часто используется в качестве быстрого диагностического теста для обнаружения микроорганизмов в амниотической жидкости и широко применяется для определения тактики ведения беременных из группы высокого риска в отношении внутриутробного инфицирования.

Для того чтобы получить оптимальные результаты при выполнении этого теста, должны приниматься во внимание некоторые аспекты методики его выполнения. Препараты необходимо готовить непосредственно из жидкости, содержащейся в шприце, поскольку при использовании тампонов они будут абсорбировать воды и содержащиеся в них клетки, что может снижать вероятность обнаружения микроорганизмов в мазке или культуре.

Хотя центрифугирование амниотической жидкости при низкой скорости не влияет на возможность обнаружения бактерий при окраске по Граму, его использование все-таки повышает концентрацию микроорганизмов в осадке, что, вероятно, может способствовать их лучшей идентификации.

Чувствительность теста в среднем составляет 49,5% (196 из 396), специфичность - 97,5% (1388 из 1423), прогностическая значимость положительного результата теста - 79,4% (196 из 247) и отрицательного - 87,4% (1387 из 1587). Чувствительность достоверно повышается с увеличением концентрации микроорганизмов (>105 КОЕ/мл). Важно помнить, что микоплазменная инфекция, которая часто обнаруживается в околоплодных водах у пациенток с угрозой прерывания беременности на фоне целого плодного пузыря или с подтеканием околоплодных вод, не определяется при окраске по Граму.

5.2 Окраска околоплодных вод акридиновым оранжевым. Лимулиновый тест околоплодных вод

Акридиновый оранжевый является метахроматическим красителем, который при низких значениях рН среды связывается с ДНК бактерий и окрашивает их в оранжевый цвет. Ядра эпителиальных клеток и клеток воспалительного ряда окрашиваются в цвета от зеленого до желтого, при этом цитоплазма остается неокрашенной (ни в оранжевый, ни в зеленый цвет). Таким образом, бактерии легко идентифицируются на темном фоне как яркие оранжевые структуры.

По мнению ряда авторов, окраска акридиновым оранжевым для обнаружения бактерий в биологических жидкостях является более чувствительной, чем по Граму. Однако по нашим данным окраска только этим красителем не может использоваться в качестве единственного теста, поскольку его чувствительность, специфичность и прогностическая значимость не превышают аналогичные показатели для окраски по Граму.

Потенциальное преимущество окрашивания с помощью акридинового оранжевого состоит в возможности обнаруживать микоплазмы, однако при решении вопроса, использовать ли только данный тест, должен быть тщательно рассмотрен тот факт, что может возрасти частота ложноотрицательных диагнозов.

5.3 Лимулиновый тест околоплодных вод

Это быстрая, недорогая и чувствительная биологическая проба для обнаружения липополисахаридов бактерий. Она основана на коагуляционных свойствах лизата клеток крови (амебоцитов) мечехвоста (Limulus polyphemus) в присутствии эндотоксина.

При инфицировании околоплодных вод в них часто обнаруживаются грамотрицательные микроорганизмы. Их клеточная стенка содержат липополисахариды, которые могут быть обнаружены как при наличии живых бактерий, так и после их лизиса.

Окрашивание по Граму и лимулиновый тест имеют сравнимую точность для диагностики внутриутробной инфекции (с чувствительностью 69% и специфичностью 95%), а при их комбинированном использовании можно получить значительное увеличение чувствительности (с 69 до 96%) с небольшим снижением специфичности (с 95 до 86%). Хотя считается, что лимулиновый тест может обнаруживать только грам-отрицательные микроорганизмы, он также выявляет до 33% случаев инфицирования вод грам-положительной флорой, а также микоплазмами или кандидами.

Существует два объяснения данного явления. В этих случаях имевшиеся грамотрицательные возбудители инфекции могли быть не обнаружены при последующем культуральном исследовании из-за небольшого количества или из-за того, что они не попали в образец вод в живом виде. В последнем случае свободные липополисахариды, образовавшиеся при разрушении бактерий, могут обусловливать положительный лимулиновый тест, хотя их роста в культуре не будет. Согласно другому предположению взаимодействие с продуктами жизнедеятельности микроорганизмов может также обусловливать коагуляцию, выявляемую с помощью теста.

Так, например, пептидгликаны, как компонент грам-положительных бактерий, и маннит (представленный молекулами карбогидрата), который продуцируется грибами рода Candida, приводят к положительному лимулиновому тесту.