1.3. Определение растворимых сбраживаемых углеводов

1.3.1 Приборы и материалы

- пробирка объемом 10-15 см³;

- водяная баня;

- термометр лабораторный;

- часы песочные лабораторные;

- фотоэлектроколориметр;

- лабораторный штатив;

- антроновый реагент;

- дистиллированная вода;

1.3.2. Техника проведения анализа

Для анализа берут совершенно прозрачный раствор. Если раствор содержит взвеси, его предварительно фильтруют через бумажный фильтр. Первые 20—25 см³ фильтрата отбрасывают, а последующие используют для анализа. Полученный фильтрат разбавляют таким образом, чтобы в разбавленном растворе содержалось углеводов от 2,0 до 10 мг на 100 см³. Например, при анализе фильтрата бражки его разбав­ляют в 50—100 раз в зависимости от содержания угле­водов.

В разбавленном растворе определяют углеводы ан­троновым методом. Для этого берут пробирку на 10—15 см³ с притертой пробкой, наливают в нее при помощи бюретки с краном 5 см³ антронового реагента (приго­товление реактива см. в приложении), осторожно по стенке доливают 2,5 см³ разбавленного испытуемого раствора с таким расчетом, чтобы жидкости не смешивались, а образовывали два слоя, после выливают пробирку притертой пробкой.

Параллельно готовят подобным же образом холостую пробу, добавляя к 5 см³ реактива 2,5 см³ дистиллирован­ной воды.

Содержимое пробирок энергично встряхивают в течение 10 с, ставят в штатив и погружают в бурно ки­пящую водяную баню. После пре­кращения кипения оно должно во­зобновиться в течение 0,5 мин с мо­мента погружения штатива с про­бирками в баню.

Замечают начало кипения воды в бане и выдерживают раствор в течение 5,5 мин для проведения ре­акции. Общее время выдерживания в бане должно быть 6 мин. Затем штатив с пробирками вынимают, помещают в баню с проточной во­дой температурой 10—12° С и охла­ждают содержимое пробирок до 20° С.

Одновременно можно анализи­ровать до 14—20 различных проб. В этом случае вначале необходимо наливать реактив во все пробирки, затем добавлять испытуемые ра­створы и только после этого смеши­вать жидкости (одновременно по две пробы).

Раствор после реакции приоб­ретает синевато-зеленую окраску. В полученных окрашенных растворах определяют опти­ческую плотность, используя кюветы с длиной грани 5 мм.

Кювету ополаскивают 2—3 раза испытуемым раство­ром, затем заполняют ее с таким расчетом, чтобы жидкость не доходила до краев на 5 мм. Внешние стенки кюветы обмывают струей воды из промывалки и вытирают сухой фильтровальной бумагой.

В две другие кюветы такого же размера подобным же образом наливают холостой раствор и определяют оптическую плотность, как описано в инструкции прилагаемой к фотоэлектроколориметру, снимая показания по левому барабану.

1.3.3. Обработка результатов

B результате анализа получают два значения опти­ческой плотности D₁ и D₂ и по уравнению (1.1) определяют содержание углеводов в растворе С_р._у (г/100 см³).

С_р.у.= , (1.1)

где: 18,9 — постоянный коэффициент, полученный экспериментальным путем;

D₁ — оптическая плотность, полученная с оранжевым светофильтром;

D₂ — оптическая плотность, полученная с синим светофильтром;

n – Коэффициент разведения.

Пример, На анализ взята зрелая бражка. Прозрачный фильтрат разбавлен в 50 раз (n=50). После анализа были получены значения оптических плотностей: D₁=0,485 и D₂=0,155.

Содержание растворимых сбраживаемых углеводов в зрелой бражке составит

С_р.у.= =0,312 г/100 см³

Уравнением можно пользоваться при анализе с применением различных образцов приборов — ФЭК-Н-57, ФЭК-М, ФЭК-60, ФЭК-56М. Необходимо только, чтобы светофильтры имели указанную длину волны (λ=610 нм и λ = 413 нм). Иногда фотоэлектроколориметры снабжаются светофильтрами, пропускающими не точно монохроматический свет. Поэтому периодически при анализе необходимо проверять коэффициент и составлять новое расчетное уравнение.