
- •Билет №9
- •Окислительное фосфорилирование
- •Практическое применение бактериофагов.
- •Определение, условия возникновения инфекции и пути передачи возбудителя
- •3)Гуморальные иммунные реакции
- •4) Серологические реакции применяются в двух направлениях.
- •1. Механическим разобщением бактериальных клеток;
- •2. Действии физических и химических факторов, оказывающих избирательное действие;
- •3. Способности некоторых бактерий размножаться в организме.
- •1.Морфология грибов. Морфологические признаки плесневых грибов.
- •2.Условия культивирования бактерий
- •3.Развитие микробиологии во второй половине 19 века. Вклад э.Ру, а.Йерсена, Мечникова, Эрлиха и других учёных
Билет №1Взаимодействие вируса с клеткой хозяина - это сложный «ногоступенчатый процесс, который начинается с адсорбции вирусных частиц на рецепторах клетки хозяина и продолжается после их проникновения внутрь клетки. В результате такого взаимодействия мовивается либо продуктивная, либо абортивная, либо интегративная форма клеточной инфекции. При продуктивной форме происходит размножение, точнее, репродукция (лат. reproduce - воспроизводить) вируса, при абортивной - ее нарушение на одном из этапов, при интегративной - интеграция вирусной нуклеиновой кислоты в клеточный геном.
Существует четыре типа взаимодействия:
1) продуктивная вирусная инфекция (взаимодействие, в результате которого происходит репродукция вируса, а клетки погибают);
2) абортивная вирусная инфекция (взаимодействие, при котором репродукции вируса не происходит, а клетка восстанавливает нарушенную функцию);
3) латентная вирусная инфекция (идет репродукция вируса, а клетка сохраняет свою функциональную активность);
4) вирус-индуцированная трансформация (взаимодействие, при котором клетка, инфицированная вирусом, приобретает новые, ранее не присущие ей свойства).
2. Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:
1. Механическим разобщением бактериальных клеток;
2. Действии физических и химических факторов, оказывающих избирательное действие;
3. Способности некоторых бактерий размножаться в организме.
Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление мазка, окраска по Граму).2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.
II этап.1. Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, характеру поверхности, краев, консистенции колонии.
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление мазка, окраска по Граму)
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным ога-ром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признакам клетки). Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам фагочувствительности токсигенности и другим признакам
При выделении отдельных видов микробов из смешанных культур, богатых разнообразными микробными видами, используют несколько методов.Этот метод можно осуществлять либо при помощи посева материала на твердых питательных средах либо серийным разведением на жидких питательных средах.Для физического расчленения на твердых питательных средах чаще всего применяют мясопептонный агар. Каплю исследуемого материала, разведенного физиологическим раствором, наносят на чашку с мясопептонным агаром и бактериальной петлей или стеклянным шпателем рассеивают по поверхности агара. Этой самой петлей или шпателем продолжают делать посев на второй и третьей и т. д. чашках. Если на первой чашке будет наблюдаться сплошной рост, то на следующих он будет более редкий и на последних вырастут отдельные изолированные колонии. Эти колонии проверяют на чистоту. Чистой считается колония, имеющая однородный внешний вид; в мазке с нее наблюдается микроорганизмы, однородные по форме и по величине, а также одинаково окрашенные по Граму. Чистые колонии пересевают на скошенный мясопептонный агар для получения чистой культуры. Такая методика проста и доступна для выделения аэробов, легко осуществима в практических лабораториях.Бактериостатический метод выделения чистых культур. Этот метод основан на том, что некоторые химические вещества или антибиотики неодинаково влияют на развитие различных видов микробов, а поэтому упомянутыми веществами можно угнетать рост одних и не влиять на рост других. К таким химическим веществам можно отнести красители: малахитгрюн, бриллиантгрюн, генцианвиолет и метилвиолет. Например, для выделения культуры чумного микроба из загнивающего материала его засевают на мясопептонный агар, предварительно смешанный со спиртовым раствором геннианвиолета. Для выделения тифопаратифозных, дизентерийных микробов применяют среду Плоскирева с бриллиантгрюном, хорошо задерживающим рост банальной микрофлоры фекальных масс.
3. Различают конститутивные и индуцибельные ферменты. Конститутивные ферменты синтезируются клеткой непрерывно, вне зависимости от наличия субстратов в питательной среде. Индуцибельные (адаптивные) ферменты синтезируются только при наличии в среде субстрата данного фермента. Например, кишечная палочка на среде с глюкозой практически не образует Р-галактозидазу, но резко увеличивает ее синтез при выращивании на среде с лактозой или другим Р-галактозидом.
Билет № 2
1) природные L-формы бактерий, которые в силу разных причин утратили способность к синтезу пептидогликана и также не имеют клеточной стенки. Они имеют форму сферических и вакуолизированных тел .Отсутствие ригидной клеточной стенки позволяет им вытягиваться в тонкие нити, проходящие через бактериальные фильтры.Впервые они обнаружены в культуре бациллы, Позже были описаны L-формы самых разнообразных видов бактерий кишечной и дизентерийной папочки, протея, стрептококков, азотобактера, актиномицетов и др. Эти формы возникают спонтанно н индуцирование под действием агентов, блокирующих синтез клеточной стенки. Такими агентами могут служить антибиотики, ферменты, химические вещества (хлористый литий, теллуррит натрия. L-формы способны расти на плотных питательных средах и в культуре тканей. По характеру колоний и некоторым другим свойствам их разделяют на два типа: 3А и 3В. Тип 3А на агаризованных средах образует очень мелкие располагающиеся под поверхностью агара колонии, состоящие из гранул. Тип 3В образует на поверхности агара четко очерченные приподнятые колонии с темным ячеистым или зернистым центром, уплотненным вследствие роста колонии в толщу агара, L-фермы типа 3В нестабильны. Они легко возвращаются к исходной форме бактерий.
Протопласты клетки микроорганизмов, полностью утратившие клеточную стенку. Могут образовываться в результате мутаций, автолитических процессов, действия некоторых антибиотиков (лизоцима, пенициллина). Мико–плазмы и L–формы бактерий представляют собой П. Их получают и искусственно для исследовательских целей в исследованиях клеток и генной инженерии. Жизнеспособные протопласты получают, в частности, в результате обработки клеток специальными ферментами, разрушающими клеточную оболочку.Это позволяет путем химических и механических методов выделять и исследовать структурные компоненты и даже отдельные молекулы, вносить изменения в генетическую структуру и так далее. Протопласты могут регенировать клеточную оболочку, что используется, в частности, для получения полноценных генетически измененных клеток.После слияния (соматической гибридизации) протопласты образуют целые живые организмы — регенеранты. Таким путем могут быть получены соматические гибриды растений.L-формы бактерий и микоплазмы изначально лишены клеточных стенок, по этому признаку их относят к протопластам.
Сферопласты формы грам- бактерий, некоторых грибов и растений, лишенные части клеточной стенки. Образуются под действием пенициллина, лизоцима и др. веществ. Имеют сферическую или полусферическую форму. В обычных условиях погибают в результате осмотического лизиса. В условиях повышенного осмотического давления способны некоторое время переживать, расти и даже размножаться. Не утрачивают чувствительности к фагам. При удалении из среды индуцирующего агента в среде с желатиной часть С. реверсирует в исходную форму. Выявляют фазово-контрастной микроскопией.
2) Органы пищеварения у микробов необычны. У них нет таких пищеварительных органов (пищевод, желудок, кишечник), которыми пользуются животные и человек. Микроорганизмы питаются двумя способами: 1) голозойным, сущность которого состоит в том, что одноклеточные простейшие обладают способностью заглатывать плотные органические вещества, переваривать и превращать их в растворенное состояние, доступное усвоению; 2) го-лофитным, при котором бактерии,дрожжи, плесени и риккетсий поглощают (диффундируют) питательные вещества в растворенном состоянии. Эти микроорганизмы выделяют во внешнюю среду пищеварительные ферменты (экзоферменты), которые, вступая в контакт с питательными веществами, растворяют их. Благодаря действию этих ферментов белки превращаются в аминокислоты, жиры ― в жирные кислоты. Эти вещества в растворенном состоянии легко усваиваются. Таким образом, переваривание, превращение питательных веществ в молекулярное состояние происходит вне клетки.
3)Питательные среды, требования к ним.
Питательная среда — вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро- и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред.
Требования к ним: быть питательными, т.е. содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста - витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать.
иметь оптимальную концентрацию водородных ионов - pH, т.к. только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.
Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (pH 7,2-7,4). Исключение составляют холерный вибрион - его оптимум находится в щелочной зоне (pH 8,5-9,0) и возбудитель туберкулёза, нуждающийся в слабокислой реакции (pH 6,2-6,8).
Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили pH, среды́ должны обладать буферностью, т.е. содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена.
быть изотоничными для микробной клетки; т.е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальная среда, соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида.
быть стерильными, т.к. посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.
плотные среды́ должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.
обладать определённым окислительно - восстановительным потенциалом, т.е. соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH2. Например, анаэробы размножаются при RH2, не выше 5, а аэробы - при RH2 не ниже 10.
быть по возможности унифицированным, т.е. содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.Желательно, чтобы среды́ были прозрачными - удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.
Билет №3
1)При попадании в организм незначительного числа патогенных микроорганизмов (что бывает наиболее часто) их обычно эффективно элиминируют защитные факторы организма. Для развития заболевания необходимо, чтобы патоген обладал достаточной вирулентностью, а его количество (инфицирующая доза) превышало некоторый порог, определяемый в каждом конкретном случае вирулентностью возбудителя и состоянием резистентности организма. В контексте патогенных свойств инфицирующую дозу можно рассматривать как определённое количество микроорганизмов, обеспечивающее возможность адгезии, колонизации и инвазии в ткани.
Входные ворота инфекции. Тропизм. Пантропизм. Не менее значимо проникновение возбудителя. Многих возбудителей отличает тропизм [от греч. trope, направление] к определённым тканям. Например, гонококк вызывает типичные поражения после попадания на слизистые оболочки половых органов или глаз, а дизентерийная амёба — на слизистую оболочку кишечника. С другой стороны, туберкулёзная или чумная палочки способны, вызвать заболевание вне зависимости от пути проникновения, приводя к развитию полиморфных поражений, варьирующих в зависимости от места проникновения. Для таких патогенов характерен пантропизм. Проникнув в организм, возбудитель начинает размножаться в месте внедрения, формируя первичный очаг поражения (первичный аффект), либо распространяется (диссеминирует) в другие органы и ткани
3) Иммуноглобулины: определение, структура.
Иммуноглобулинами называются белки, которые синтезируются под влиянием антигена и специфически с ним реагируют. При электрофорезе они локализуются в глобулиновых фракциях. Иммуноглобулины состоят из полипептидных цепей. В молекуле иммуноглобулина различают четыре структур: 1. Первичная – это последовательность определенных аминокислот. Она строится из нуклеотидных триплетов, генетически детерминируется и определяет основные последующие структурные особенности. 2. Вторичная определяется конформацией полипептидных цепей. 3. Третичная определяет характер расположения отдельных участков цепи, создающих пространственную картину. 4. Четвертичная характерна для иммуноглобулинов. Из четырех полипептидных цепей возникает биологически активный комплекс. Цепи попарно имеют одинаковую структуру. Любая молекула иммуноглобулина имеет Y-образную форму и состоит из 2 тяжелых (Н) и 2 легких (L) цепей, связанных между собой дисульфидными мостиками. Каждая молекула иммуноглобулина имеет 2 одинаковых антигенсвязывающих фрагмента Fab (англ. Fragment antigen binding) и один Fc-фрагмент (англ. Fragment cristalisable), с помощью которого ИГ комплементарно связываются с Fc-рецепторами клеточной мембраны. Концевые участки легких и тяжелых цепей молекулы иммуноглобулина достаточно разнообразны (вариабельны), а отдельные области этих цепей отличаются особенно выраженным разнообразием (гипервариабельностью). Остальные участки молекулы ИГ относительно низменны (константны). В зависимости от строения констатных областей тяжелых цепей иммуноглобулина разделяются на классы (5 классов) и подвиды (8 подвидов). Именно эти константные области тяжелых цепей, существенно отличаясь по аминокислотному составу у различных классов иммуноглобулинов, в конечном итоге определяют особые свойства каждого класса антител:
4) Моноклональные антитела.Моноклональные антитела (МАТ) секретируются иммунными клетками, происходящими от единственной антителообразующей клетки. Поэтому МАТ направлены только против определенного эпитопа иммуногенного вещества, так называемой "антигенной детерминанты". Для получения МАТ изолируют лимфоциты из селезенки иммунизированной мыши (1) и производят их слияние с опухолевыми клетками мыши (клетками миеломы) (2). Это необходимо, так как жизнеспособность антителопродуцирующих лимфоцитов в культуре ограничена лишь несколькими неделями. При слиянии с опухолевой клеткой возникают гибридные клетки, так называемые гибридомы, которые являются потенциально бессмертными.Слияние клеток (2) является редким событием, частота которого повышается в присутствии полиэтиленгликоля [ПЭГ (PEG)]. Отбор продуктивных гибридных клеток проводится при длительной инкубации первичной культуры в ГАТ-среде (НАТ-среде) (3), содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Аминоптерин, аналог дигидрофолиевой кислоты, конкурентно ингибирует дигидрофолат-редуктазу и тем самым биосинтез дТМФ (см. с. 388). Поскольку дТМФ существенно необходим для синтеза ДНК, миеломные клетки не могут выживать в присутствии аминоптерина. С другой стороны, клетки селезенки могут преодолевать действие ингибитора, используя для синтеза ДНК гипоксантин и тимидин, однако и они существуют в течение ограниченного времени. Только гибридома выживает в виде культуры в среде ГАТ, так как эти клетки обладают одновременно бессмертием миеломных клеток и способностью клеток селезенки приспосабливаться к аминоптерину.В действительности продуцировать антитела способны только единичные гибридомные клетки. Такие клетки необходимо выделить и размножить клонированием (4). После тестирования клонов на способность образовывать антитела отбираются положительные культуры, которые снова клонируются и подвергаются последующей селекции (5). В результате получают гибридому, продуцирующую моноклональные антитела. Производство моноклональных антител этими клетками осуществляют in vitro в биореакторе или in vivo в асцитной жидкости мыши (6). 2) БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕисследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекц. болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, к-рые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептич. условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию (в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, осн. клинич. признаки болезни и патологоанатомич. изменения, цель исследования). Б. и. включает 3 осн. метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патол. или др. исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологич., культурально-биохимич., антигенных и патогенных свойств бактерий.Б. и. начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение). При микроскопии патол. материала готовят мазки-отпечатки из органов, тканей или тонкие мазки из др. исследуемого материала, высушивают их на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследования (см.Окраска микроорганизмов). Для обнаружения нек-рых бактерий (напр., возбудителя туберкулёза) патол. материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащения, чтобы повысить в нем концентрацию бактерий и избавиться от посторонних микробов. Для ускоренного обнаружения бактерии применяют люминесцентную микроскопию. Для изучения подвижности бактерий, обусловленной наличием жгутиков, используют микроскопию молодой (12—24 ч) живой культуры с помощью препаратов висячей капли или раздавленной капли. Подвижность бактерий может быть установлена также на основе особенностей роста культуры в полужидком МПА
Билет№6 1. микробные ферменты (гиалуронидаза, коагулаза, фибринолизин, коллагеназа, лецитиназа,лейкоцидины и др.), к-рые способствуют инвазии бактерий и помогают им противостоять защитным реакциям организма. [Роль этих ферментов видна из следующих примеров. Дюран-Рейнальс (F. Dnran-Raynals, 1942) описал так наз. диффузионный фактор, к-рый оказался ферментом — гиалуронидазой. Высоковирулентные бактерии (стрептококки, возбудители газовой гангрены и др.) продуцируют гиалуронидазу, к-рая, расщепляя гиалуроновую кислоту, снижает вязкость соединительной ткани и таким образом способствует внедрению бактерий и распространению их в тканях. Коагулаза, выделяемая нек-рыми вирулентными бактериями, вызывает свертывание плазмы с выделением фибрина, к-рый, обволакивая бактерии, защищает их от фагоцитов и антител];
2.3.Антиидиотипические антитела, антиидиотипы (anti-idiotypic antibodies, anti-idiotypes)[греч. anti — против, idios — собственный, свой, частный, отдельный, своеобразный и typos — отпечаток, образец, тип] — антитела , специфические по отношению к антигенным детерминантам, расположенным на вариабельных участках других антител. Иными словами, А.а. комплементарны определенной конфигурации пептидной цепи в составе другого антитела, в свою очередь комплементарной конфигурации антигена. Тем самым А.а. химически воспроизводят нужную конфигурацию антигена и могут рассматриваться как «имитаторы» или аналоги антигена. Применение А.а. создает принципиально новый подход к получению диагностических и вакцинных препаратов, особенно полезный в тех случаях, когда антигены не удается приготовить на основе нативного вируса. В ряде случаев А.а., полученные к антителам против ферментов, обладают ферментативной активностью (см.
4. Сущность метода флюоресцирующих антител заключается в визуализации реакции антиген-антитело люминесцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году А. Кунсом (англ.)русск..[1]Различают МФА прямой, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом,[2] МФА непрямой, разработанный А. Кунсом и Уиллером и непрямой МФА с комплементом.При прямом методе (пМФА) на препарат с антигеном наносят известную, предположительно соответствующую ему, люминесцирующую сыворотку. В случае образования комплекса, он обнаруживается, люминесцентной микроскопией в виде зеленоватого свечения разной степени интенсивности и четкости.При непрямом методе (нМФА) на мазок из наслоения антигена и немеченой сыворотки наносят антиглобулиновую (видовую по отношению к диагностической сыворотке) люминесцирующую сыворотку. В случае образования комплекса антиген-антитело, последний компонент реагирует с видовой антиглобулиновой люминесцирующей сывороткой. При нМФА с комплементом, его добавляют к комплексу антиген-антитело и идентифицируют образование тройного комплекса по люминесцирующей антикомплементарной сыворотке.Результаты описываются в так называемых «крестах» (от одного + до четырех ++++) — субъективная градация исследователем степени выраженности реакции. Непрямые методы требуют наличия только антиглобулиновых видовых сывороток с флюорохромами, но при этом необходимо большое количество тестовых контролей. При постановке прямым методом делается только один контроль, но требуется множество моноспецифических сывороток. Недостатками всех видов МФА является ограниченная чувствительность из-за наличия возможных перекрестных реакций между близкими по антигенному составу объектами и неспецифическая флуоресценция вследствие адсорбции флуоресцирующих глобулинов на различных элементах препарата. В настоящее время используются коммерческие стандартные конъюгаты, содержащие глобулины к исследуемым антигенам. Метод флуоресцирующих антител.
Билет №7 1.Ферментывирусов .Ферментывирусовподразделяют навирионныеивирусиндуцированные .Кпервымотносятферменты транскрипцииирепликации(ДНК-иРНК-полимеразы),обнаруженныеумногихвирусов,обратнаятранскриптазаретровирусов,а также эндо- иэкзонуклеазы, АТФ-аза,нейраминидазаотдельных вирусов. Вирусиндуцированнымисчитаютсятеферменты,структура которыхзакодированаввирусномгеноме.Преждевсегоэтоотноситсяк РНК-полимеразампикорна-,тога-,орто-ипарамиксовирусам,атак-жеДНК-полимеразепокс-игерпесвирусов. Нарядуссобственнымивирусыиспользуютклеточные ферменты,которыенеявляютсявирус специфическими.
2.Гликолиз.Врезультате расщепленияглюкозырасходуется2исинтезируется4молекулы АТФ .Длянекоторыхмикроорганизмовакцепторомэлектроновв цикле гликолизамогутбытьнитратыилиС0 2.Дальнейшиепути превращения пируватапредопределяютсяметаболическими особенностямимикроорганизмов.Дляанаэробовброжениеявляется способомполученияэнергииврезультатеокислительно-восстановительныхреакций.Взависимостиотобразования конечныхпродуктовразличаютнесколькотиповброжения:молочно-кислое,спиртовое,муравьинокислое,пропионовокислое .
Молочнокислоеброжение.БактерииродовLactobacillus ,Streptococcus,Bifidobacteriumспособныобразовыватьизпируватамолочную кислоту.Приэтомводнихслучаяхпроисходит образованиетолькомолочнойкислоты,вдругих нарядусмолочнойкислотой образуютсяпобочныепродукты:спирт,ацетонидр.,количествокоторых может превосходитьсодержаниеосновногопродукта.
Муравьинокислоеброжение.Этоттипброженияхарактерендля представителейсемействаэнтеробактерий.Однимизконечных продуктовданноготипаброженияявляетсямуравьинаякислота.Наряду снейобразуютсямолочная,уксуснаякислотыидругиепродукты.
Маслянокислоеброжение.Однимизосновныхпродуктов броженияявляетсямаслянаякислота.Приэтомтипеброжения образуютсятакжеуксуснаякислота,С0 2иН2.
Пропионовокислое брожениехарактернодляпропионобактерий, которыеизпируватаобразуютпропионовуюкислоту.
3. Выделение чистых культур. Наиболее распространенным способом выделения чистых культур является посев смеси микробов на плотные питательные смеси с целью получения отдельных колоний культур, которые считают результатом развития одной клетки. Для посева чаще используют агаризованные среды в чашках Петри.
Существуют два основных метода разведения исследуемого материала:
1) на поверхности плотной питательной среды;
2) предварительное разведение материала в физиологическом растворе.
Метод на поверхности плотной среды используется для выделения чистых культур аэробных и факультативно анаэробных м/организмов. С этой целью для посева берут ряд чашек Петри с плотной средой. В первую чашку наносят исследуемый материал и распределяют его по поверхности шпателем. Затем производят посев последовательно на поверхность Среды в остальных чашках. Количество материала ,внесенного в среду, при этом последовательно убывает. Метод предварительного разведения используется для выделения чистых культур м/организмов как аэробных, так и анаэробных. Готовят разведение материалов 10-100 раз и более и производят посев разведений, пользуясь поверхностным или глубинным методом.
Выделение чистых культур строгих анаэробов требует условий выращивания без доступа кислорода.
Билет №9
1.Хламидии, микоплазмы и уреаплазмы
Хламидии – грамотрицательные кокковидные прокариоты диаметром от 0,25 до 1,5 мкм. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Являются строгими внутриклеточными паразитами, не растущими на искусственных питательных средах. Вызывают у человека трахому и некоторые другие заболевания. Инфекционной формой являются небольшие спороподобные сферические клетки (0,25-0,4 мкм), называемые элементарными тельцами. Они имеют ригидную клеточную стенку и ЦПМ, которые по своему составу близки к аналогичным структурам других прокариотов. В цитоплазме обнаружены нуклеоиды и рибосомы. При попадании чувствительную клетку элементарные тела превращаются в так называемые ретикулярные тельца, способные к бинарному делению. После некоторых циклов деления образуются промежуточные формы, которые затем превращаются в элементарные тела.Микоплазмы - самые мелкие прокариоты, способные самостоятельно размножаться. Они не имеют клеочной стенки, т. к. протоплазм снаружи ограничен только плазматической мембраной, клетки осмотически черезвычайно лабильны. Прихотливы к условиям культивирования. В составе сред необходимы холестерин и стерины, нативные сыворотки, витамины, соли. Основным источником энергии являются углеводы (особенно глюкоза) или аминокислоты (аргинин). Микоплазмы - мембранные паразиты и способны адсорбироваться на различных эукариотических клетках. Этому способствует подвижность патогенных микоплазм, связанная с хемотаксисом и наличием микроворсинок. Микоплазмы способны тесно связываться с мембранами эукариотической клетки, вступать в межмембранное взаимодействие, обмениваться мембранными компонентами (в том числе использовать холестерин и стенолы для построения собственных клеток), оказывать разнообразное влияние на клетки. Коротко остановимся на основных эффектах действия микоплазм на различные клетки.Уреаплазмы - бактерии, лишенные клеточной стенки, относятся к семейству Mycoplasmatacea. Уреаплазмы и микоплазмы являются возбудителями воспалительных процессов в мочеполовой системе. Уреаплазмы, как и другие инфекции, передающиеся половым путем, широко распространены.
Окислительное фосфорилирование
Все аэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы имеют дыхательную цепь, локализованную в ЦПМ. Перенос электронов от органического субстрата на молекулярный кислород осуществляется пиридинзависимыми дегидрогеназами, хинонами, цитохромами и др. Дыхательная цепь прокариотов различается в зависимости от видовой специфичности по составу промежуточных переносчиков(хиноны и цитохромы)и терминальными оксидазами. На состав дыхательной цепи оказывают влияние физиологические условия: стадия развития культуры, состав пит. среды, природа конечного акцептора электронов. Процесс переноса электронов сопряжен с окислительным фосфорилированием, в результате которого освобождающаяся на отдельных участках дыхательной цепи энергия запасается в форме энергии фосфатной связи АТФ. Обычно об окислительном фосфорилировании судят строго на основании измерения величины Р/О(число молий неорганического фосфата перешедших в органическую форму, в расчете на каждый поглащонный атом О2 )Некоторые бактерии (в основном факультативные анаэробы ) в качестве конечного акцептора электронов в анаэробных условиях могут использовать нитраты с образованием молекулярного азота, окиси азота или закиси азота. Этот процесс называют денитрификацией. У бактерии распространены также системы окисления субстратов связанные не с цитохромами а с фловиновыми оксидазами.
Накоплентие перекиси водорода у анаэробов, не содержащих каталазы, приводит к задержке роста клеток и к их гибели.