Лабораторное занятие 8

Задание: 1. Освоить методы определения молока, полученного от больных

коров.

2. Освоить методы установления примеси анормального молока в сборном.

3. Освоить метод выявления в молоке антибиотиков.

Приборы и реактивы: Молочно-контрольная пластинка, уленгутовские пробирки, стеклянные палочки, 5%-ный раствор димастина, 4%-ный раствор едкого натра, 2,5%-ный раствор препарата «Мастоприм», реактив Росса, бруцеллёзный антиген, маститопроб, маститодиагност, вискозиметр ВМЛК.

Мастит – воспаление молочной железы. Лабораторная диагностика маститов основана на выявлении физико-химических изменений молока, увеличении в нём количества соматических клеток (лейкоциты, эпителиальные клетки) и выделении возбудителя. Молоко от здоровых коров в среднем периоде лактации имеет слабокислую реакцию (pH6,3-6,9). При заболевании коров маститом реакция молока в большинстве случаев становиться щелочной (pH 7,0 и выше).

Молоко, полученное от животных, больных маститом, можно обнаружить с помощью постановки проб с мастидином, димастином, маститодиагностом, маститопробом, пробой Уайтсайда и при помощи специальных приборов.

А) Проба с димастином

Реактив димастин состоит из сульфанола, гипосульфита натрия, глауберовой соли, фенолово - красного индикатора. Для исследований готовят 5%-ный раствор на дистиллированной воде.

Техника определения:

В каждое углубление пластинки МКП-1 из соответствующей четверти вымени надаивают по 1 cм³ молока и добавляют 1 cм³ приготовленного раствора димастина. Смесь молока с реактивом перемешивают в каждой луночке в течение 10-15 сек.

Реакцию учитывают по консистенции сгустка и цвета смеси:

- реакция отрицательная - однородная жидкость оранжевого, оранжево-красного цвета, pH 6,5-6,8

- реакция сомнительная – следы образования желе, цвет красный, pH 6,8-7,0

- реакция положительная – ясно видимый плотный сгусток алого или пунцового цвета, pH выше 7,0

Б) Проба с 10%-ным раствором мастидина.

Техника постановки аналогична, как с 5%-ным раствором димастина.

- реакция отрицательная – однородная жидкость светло – сиреневого (дымчатого) цвета;

- реакция сомнительная – следы образования желе, почти белого цвета;

- реакция положительная – ясно видимый плотный сгусток, тёмно – сиреневого цвета.

В) Проба с маститодиагностом.

Маститодиагност представляет собой смесь сульфанола, триполифосфата натрия, водорастворимого бромтимолового синего и розоловой кислоты. В сухом виде индикатор сохраняет активность в течение 5 лет, а в растворе при температуре 3-5°С – до трёх лет. Индикатор готовят следующим образом: в 1 л дистиллированной воды, подогретой до 70-76°С, растворяют 50г триполифосфата натрия и 300г порошкообразного сульфанола. Когда смесь раствориться и раствор остынет до температуры 20-25 °С, добавляют 0,2г водорастворимого бромтимолового синего и 5 cм³ 1%-ного спиртово-водного раствора розоловой кислоты. После взбалтывания индикатор готов к употреблению.

Техника определения. В молочно-контрольную пластину или в пробирку наливают 1 cм³ маститодиагноста и 1 cм³ молока, перемешивают 3-5 сек. Учёт реакции проводят по таблице 17.

Таблица 17.

Учёт реакции с индикатором маститодиагностом

Реакция	Характеристика смеси молока с маститодиагностом	Учёт реакции
		В крестах	примесь мастит-ного молока %
Положи-тельная	Появление в смеси сгустка сине-зелёного цвета различной консистенции, в том числе: Образование плотного желеобразного сгустка Умеренный сгусток в виде белка куриного яйца слизистая тягучая масса наличие обильного количества хлопьев и слизи жидкой консистенции	++++ ++++ +++ ++	>25 20-25 15-20 10-15
Отрица-тельная	небольшое количество жидкой слизи единичные слизистые тяжи и хлопья Молоко здоровых коров образует с индикатором гомогенную смесь	++ + -	5-10 1-5 -

Г) Исследование молока с маститопробом.

Маститопроб изготовляют из стирального порошка «Лотос». Для приготовления индикатора 300г порошка «Лотос» растворяют в 1,5 л горячей воды. Для лучшего растворения смесь подогревают до кипения (кипятят около 1 мин), отстаивают 3-4 часа, затем отстоявшуюся жидкость фильтруют, а осадок выбрасывают. Полученный индикатор не теряет активности в течение 3-5 лет.

Техника определения. В молочно-контрольную пластину наливают 1 cм³ маститопроба и 1 cм³ молока. Учёт реакции через несколько секунд. При положительной реакции образуется слизистая масса или желеобразный сгусток, сомнительная – наличие единичных слизистых нитей, отрицательная – гомогенная жидкая смесь.

Д) Проба Уайтсайда.

Для постановки реакции используют 4 % раствор едкого натра.

Техника определения. В молочно-контрольную пластину наливают 1 cм³ молока и 0,2 cм³ 4%-ного раствора NaOH. Учёт реакции через несколько секунд. При положительной реакции образуется густая тягучая масса с хлопьями, отрицательная – гомогенная жидкая смесь.

Ж) Определение кетоновых тел.

В молоке здоровых коров кетоновые тела отсутствуют. Появляются они в нём при нарушении у животного обмена веществ, возникающего чаще всего из-за белкового перекорма.

Техника определения. В пробирку налить 5 cм³ молока и добавить 1г реактива Росса (состоящего из 1г нитропруссида натрия и 100г хлористого аммония) и один кристаллик едкого натра. Через 5 мин оценивают реакцию. При наличии кетоновых тел появляется сиреневый цвет. При отсутствии – цвет желтоватый.

З) Определение молока коров, больных бруцеллёзом.

Кольцевая реакция. При добавлении в молоко больных бруцеллёзом коров антигена, окрашенного гематоксилином, происходит взаимодействие с антителом с образованием окрашенного в синий цвет кольца на поверхности содержимого пробирки.

Техника определения. В уленгутовскую пробирку наливают 1 cм³ исследуемого молока и добавляют 1 каплю окрашенного антигена. Содержимое встряхивают и ставят в термостат (37°С) на 40 мин.

Положительная реакция – кольцо окрашено в синий цвет, содержимое пробирки просветляется.

Отрицательная – равномерное окрашивание содержимого пробирки.

Сомнительная – слабо окрашенное кольцо, содержимое не просветляется.