Лейкоконцентрат

Изучение лейкоконцентратов, приготовленных из крови здоровых людей, позволяет обнаружить в них не­большое количество незрелых клеток гранулоцитарного ряда (от миелобластов до метамиелоцитов), неиден-тифицируемые бластные клетки, ретикулярные клет­ки, мегакариоциты или их фрагменты, фигуры митозов, так называемые атипичные мононуклеары с базофильной цитоплазмой.

В лейкоконцентратах обычно не встречаются ядро-содержащие клетки красного ряда, за исключением базофильных эритробластов. Можно предположить, что по мере гемоглобинизации и, следовательно, увеличе­ния удельного веса, они оседают вместе с эритроцита­ми при выделении лейкоцитарной фракции и поэтому редко обнаруживаются в препаратах. Что касается мегакариоцитов, то если в лейкоконцентратах, приготовленных из периферической крови, их находят не час­то, при исследовании образцов крови из центрально расположенных вен (пульмональных) и непосредствен­но из правого предсердия мегакариоциты выявляются почти постоянно.

При анализе мононуклеарных клеток периферичес­кой крови установлено, что они неоднородны по мор­фологическим признакам, по содержанию и обмену нуклеиновых кислот и белков.

Среди них можно выделить две категории клеток:

1. Морфологически идентифицируемые незрелые клет­ки гранулоцитарного и реже эритроцитарного ряда, мегакариоциты или их фрагменты, фигуры мито­зов.

2. «Атипичные» мононуклеарные клетки, способные к синтезу ДНК и состоящие, очевидно, в свою оче­редь, из клеток, функционально неидентичных. Для большинства этих клеток характерны: сравнитель­но большие размеры (13—14 мкм), неправильная форма (часто лопастная), ядро с глыбчатым строе­нием хроматина и, как правило, ярко выраженная базофилия цитоплазмы и интенсивное включение меченого предшественника ДНК.

Количество этих клеток в периферической крови составляет 0,2±0,02% или в 1 мкл 4,5±0,4 клеток. Цир­куляцию в крови здоровых людей ДНК-синтезирующих клеток можно считать явлением постоянным и доволь­но устойчивым, и это является одной из физиологи­чески обусловленных функций организма.

Соотношение клеток в лейкоконцентрате меняется при резком раздражении кроветворения и при болез­нях системы крови.

Современный подсчет клеток и их анализ

Необходимость эффективного учета показателей крови в ряде клинических ситуаций стала основой создания авто­матизированных проточных систем ее анализа.

Для подсчета лейкоцитарной формулы в проточных счетчиках в принципе используются два метода. Пер­вым из них является метод жидкостной цитохимии, например, окраска на пероксидазу. Интенсивность ок­раски зависит от пероксидазной активности. Эозинофилы имеют интенсивную пероксидазную активность, нейтрофилы — выраженную активность пероксидазы, а у моноцитов она слабая. Пероксидазы нет в лимфоцитах. Типичные приборы такого типа выпускает фирма Technicon.

Другой подход чисто биофизический: это различие клеток на основании измерения угла отражения от коге­рентных источников света. Наиболее современные при­боры такого типа с высокой производительностью — это счетчики фирмы Abbott.

Серия гематологических автоматов и полуавтома­тов фирмы Coulter (США), Sysmex (Япония), Abbott (США), Hoffman la Roche (Швейцария) позволяет ис­пользовать для общего клинического анализа венозную кровь. Рекомендовано брать венозную кровь в специаль­ные одноразовые пробирки с порошком ЭДТА. Считает­ся, что для исследования достаточным является 0,2 мл крови. При объеме менее 0,2 мл могут возникнуть значи­тельные трудности в получении проб, что, в свою оче­редь, может повлиять на конечные результаты за счет гемолиза либо образования скоплений и небольших сгу­стков тромбоцитов.

Вышеуказанные аппараты-автоматы с их высокой производительностью, безусловно, внесли и вносят исключительно большой вклад при массовой диспансе­ризации населения, при обследовании больных без си­стемного поражения органов кроветворения. При забо­леваниях системы крови работу таких аппаратов долж­ны контролировать врачи-лаборанты (гематологи), так как, например, автоматы считают микробласты как лимфоциты. В эритроцитах не определяются включе­ния. Малярийные паразиты в эритроцитах вносят путаницу при подсчете эритроцитов, то же происходит при анализе эритроцитов с поражением цитоскелета.

Следует сказать, что морфология эритроцитов и лейкоцитов может быть оценена только в окрашенных мазках крови. Однако более качественные мазки крови (равномерные и имеющие стандартные размеры и тол­щину) получаются при использовании автоматических устройств «Hemaprep» фирмы Opton (Германия), «Seide Spinee» фирмы Corning Scientific Instruments (США).

Наиболее приняты методы окраски мазков по Нох-ту, Паппенгейму, Романовскому-Гимзе. Автоматичес­кая окраска мазков может быть осуществлена с помо­щью специальных устройств, например, «Hematek» фирмы Ames (США), в котором ручным способом заг­ружаются нефиксированные мазки. Последующее ав­томатическое дозирование красителей и буферных ра­створов обеспечивает стандартную и равномерную ок­раску мазков (Sysmex).

Известно, что при приготовлении мазка крови об­щепринятым методом клетки распределяются случай­но. Хотя имеется тенденция распределения мононуклеаров по периферии мазка.

В настоящее время, помимо общепринятого мето­да приготовления мазка, ведутся работы по созданию упорядоченного монослоя на стандартном предметном стекле. Так, например, для создания монослоя кровь наносят на стекло пером. При этом распределение лей­коцитов соответствует кривой Гаусса. Эти полоски можно наносить как из венозной крови, так и из капиллярной. В качестве антикоагулянта используется ЕДТА или цитрат (3,9%). Линейные дорожки крови окрашиваются по Романовскому-Гимзе. Их исследование предусмат­ривает изучение как нормальных, так и аномальных лейкоцитов с учетом их распределения по всей длине дорожки крови. Вполне достаточно, используя иммер­сионный объектив, идти по длине полосы, классифи­цируя и сопоставляя каждый лейкоцит, который появ­ляется в поле зрения.

Таким образом, в результате дифференциального счета получается правильное процентное распределе­ние, полностью исключаются или сводятся к минимуму случайные ошибки.

При световой микроскопии мазков могут быть обна­ружены нарушения как эритроцитов, так и лейкоци­тов, возникающие в условиях патологии. Нарушения эритроцитов выражаются в уменьшении или увеличе­нии размера, изменении их формы, интенсивности и характера окрашивания, в появлении патологических включений. Нарушения в лейкоцитах выражаются в гиперсегментации нейтрофилов, вакуолизации клеток, появлении атипичных мононуклеаров, изменении раз­меров клеток и т.д.

Исследование морфологических особенностей эрит­роцитов и лейкоцитов крови в лейкоконцентрате на мазке может дать ценную информацию для установле­ния диагноза, для прогностической оценки, контроля эффективности проводимых лечебных мероприятий.

При действии физических и химических факторов, с которыми сталкивается человек в современных эко­логических условиях, а также в своей трудовой дея­тельности, большинство изменений функции системы кровообращения имеет адаптационный характер. Лишь в крайних случаях эти изменения являются следствием повреждения. Выявить и правильно оценить адаптаци­онные гематологические реакции на действие токси­ческих факторов малой интенсивности трудно. Не все­гда имеется четкая картина различных нарушений. Не­большие изменения количества клеток крови легко «теряются» среди физиологических колебаний, свой­ственных этим показателям, а сами изменения ограни­чены в своей направленности.

Одним из перспективных направлений изучения крови может быть цитохимический анализ ферментных систем в клетках крови. Исследования на клеточном уровне могут выявить адаптационные и компенсатор-

Количество базофилов не превышает одного про­цента и составляет в среднем 0,5%. Плазматические клетки — от 0% до 0,1%.