- •Приготовление и окраска микропрепаратов:
- •Способы фиксации мазков из микробов и смешанного материала
- •Существует два метода химической фиксации мазков:
- •Микроскопия препарата с иммерсионным объективом
- •Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
- •Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе
- •Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
- •А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
- •Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза
- •А) выявление зёрен волютина по нейссеру
- •Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
- •Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
- •Выявление спор у бактерии методом ожешко
- •1. Метод шукевича:
- •2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
- •Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:
- •Методы выявления спирохет и лептоспир
- •2. Микроскопия в темном поле
- •Люминесцентная прямая микроскопия
- •Техника окраски:
Люминесцентная прямая микроскопия
Особенности:
При приготовлении препарата к биоматериалу для прижизненной окраски добавляют флюорохром акридин оранжевый в рабочем разведении 1:1000 и только после этого накрывают покровным стеклом. Микроскопируют в люминесцентном микроскопе МЛ-1 или МЛ-2 с набором пропускающих и запирающих фильтров для УФ-лучей.
Вместо обычного иммерсионного масла используют нелюминисцирующее иммерсионное или его заменители (репелленты - дибутилфталат, диметилфталат). Микроскопируют в затемнённом помещении.
Учёт результатов. При микроскопии жизнеспособные клетки двигаются, имеют чаще зелёное свечение, нежизнеспособные и умирающие - оранжевые и обездвижены. Оба метода особенно удобны при обнаружении лептоспир, которые невозможно окрасить.
ОКРАСКА СПИРОХЕТ В ЧИСТОМ ВИДЕ И В БИОМАТЕРИАЛЕ
1. ОКРАСКА ПО РОМАНОВСКОМУ - ГИМЗЕ
Техника окраски:
Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором красителя, который готовят непосредственно перед использованием (к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель красителя Романовского – Гимзы, коммерческого).
Через час краситель сливают, препарат промывают водой и высушивают на воздухе, исследуют при иммерсии.
Оценка результата. Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток – в голубовато-синий, ядра – в фиолетовый красный.
При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый.
Примечание: если краситель спиртовой, то мазок не фиксируется.
2.Серебрение по Морозову. 3. Окраска по Граму. 4. Обработка по Бурри.