
- •Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии Электронное учебно-методическое пособие
- •Предисловие
- •Тема 1 Светопольная микроскопия. Устройство биологического микроскопа
- •Основные технические характеристики микроскопа
- •Порядок работы со светопольным микроскопом
- •Приготовление витальных препаратов микроорганизмов
- •Лабораторная работа 1
- •Устройство оптического микроскопа типа «Биолар-4». Приготовление препаратов микроорганизмов
- •План проведения занятия
- •Препараты фиксированных окрашенных клеток
- •Окраска по Граму.
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа 2
- •Препараты фиксированных окрашенных клеток
- •Окраска по Граму.
- •Задание
- •Контрольные вопросы
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов
- •«Изучение основных морфологических признаков бактерий»
- •Задание
- •Контрольные вопросы
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов. Продолжение.
- •Методические указания
- •Контрольные вопросы
- •Тема 2. Морфология микроорганизмов. Продолжение.
- •Тема 3. Основы культивирования микроорганизмов
- •Принципы составления сред для культивирования микроорганизмов.
- •Способы культивирования микроорганизмов.
- •Поверхностное культивирование.
- •Глубинное культивирование.
- •Периодическое культивирование.
- •Непрерывное культивирование.
- •Получение чистой культуры.
- •Стерилизация питательных сред, посуды, материалов и инструментов.
- •Подготовка питательных сред, посуды, материалов и инструментов к стерилизации.
- •Контрольные вопросы к теме 3.
- •Тема 4. Микроорганизмы природных биотопов.
- •Микроорганизмы литосферы
- •Микроорганизмы тропосферы.
- •Контрольные вопросы к теме 4.
- •Содержание лабораторных занятий по темам 3 и 4.
- •Лабораторная работа № 6. Приготовление питательных сред и их стерилизация. Получение накопительной культуры
- •Методические указания:
- •Лабораторная работа № 7. Анализ накопительной культуры и выделение чистой культуры. Седиментационный посев воздуха.
- •Лабораторная работа № 8. Анализ микробиологической загрязненности воздуха по Омелянскому. Изучение некоторых культуральных и морфологических особенностей выделенных микроорганизмов.
- •Итоговый контроль.
Подготовка питательных сред, посуды, материалов и инструментов к стерилизации.
Питательные среды и жидкости, предназначенные для стерилизации, разливают в колбы и пробирки не более, чем на половину их высоты. Сосуды закрывают ватными пробками, обтянутыми марлей. Пробки должны быть достаточно плотными, с равномерным распределением волокна ваты. Ватные пробки предохраняют среду от инфицирования микроорганизмами и обеспечивают проникновение пара в сосуд при автоклавировании. Сверху на пробку надевают бумажный колпачок, который фиксируется на горлышке сосуда с помощью шпагата или аптечной резинки. Колпачок предохраняет пробку от выбивания при возможном резком падении давления в автоклаве.
Посуду перед стерилизацией тщательно моют, сушат и заворачивают в бумагу для сохранения стерильности после прогревания.
Каждую пипетку заворачивают отдельно в длинные полоски бумаги, шириной 4-5 см. В верхний конец пипетки, который микробиолог при выполнении работ берет в руку, предварительно вставляют ватные тампоны. (тампоны выполняют ту же роль, что и ватные пробки). Заворачивание пипетки начинают с капиллярного, узкого конца по спирали. Постепенным движением бумаги по спирали заканчивают обмотку у конца с ватным тампоном. Бумага должна плотно охватывать пипетку. Завернутые пипетки заворачивают по несколько штук вместе в бумагу для предотвращения индивидуальной упаковки от загрязнений и разрывов или помещают в специальные металлические или картонные пеналы.
Шпатели обертывают по отдельности, а потом, как и пипетки, объединяют.
Чашки Петри заворачивают вместе по 2-4-8 штук, либо помещают в специальные, плотно закрывающиеся металлические пеналы.
Колбы, пробирки и другие сосуды закрывают ватными пробками, на которых сверху фиксируют бумажный колпачок.
Различные приспособления и материалы, используемые в работе с микроорганизмами, также стерилизуют, плотно упакованными в бумагу. Там, где это необходимо, предварительно вставляют ватный тампон.
Наиболее часто используемые способы стерилизации питательных сред, посуды и других материалов представлены в таблице 1.
Способы стерилизации лабораторных материалов. Таблица1.
Стерилизуемый материал |
Метод стерилизации
|
Режим стерилизации |
Примечание |
Питательные среды с почвенной вытяжкой; карто-фельные среды |
Автоклавирование |
1,5-2 атм, 30 мин |
В колбах, пробирках, бутылях и т. д., закрытых ватными пробками |
Жидкие и агаризованные среды, не содержащие сахаров и других веществ, разлагающихся при 120°С |
Автоклавиро ванне |
1 атм, 20 мин |
То же |
Жидкие и агаризованные среды с сахарами и другими соединениями, не выдерживающими нагревания при 120°С
|
Автоклавирование |
0,5 атм, 15—30 мин |
То же |
Среды или компоненты сред, не выдерживающие нагревания выше 100°С |
Дробная стерилизация |
Текучий пар 3 раза по 30— 40 мин через сутки |
То же |
Среды или компоиенты сред, не выдерживающие нагревания, например, белки, некоторые витамины и др. |
Фильтрование через бактериальные фильтры |
|
— |
Чашки Петри, пипетки, шпатели. |
Горячим воздухом |
165—170°С, 2 час |
Завернутые в бумагу (отверстия пипеток закрыты ватными тампонами) |
Колбы, пробирки, химические стаканы, флаконы, стеклянные центрифужные пробирки |
Горячим воздухом |
165—170°С, 2 час |
Закрытые ватными пробками |
Держатели бактериальных фильтров, резиновые пробки и шланги, фильтры Зейтца |
Автоклавирование |
1 атм, 20 мин |
Завернутые в бумагу |
Мембранные фильтры
|
Автоклавирование |
0,5 атм, 15 мин |
В сосуде с дистиллированной водой. Можно стерилизовать длительным кипячением |
Центрифужные пробирки, изготовленные из термолабильных пластмасс |
Ультрафиолетовыми лучами |
Время экспозиции устанавливают экспериментально |
Пробирки после облучения хранят в стерильной посуде |