Лабораторные работы.

1. Влияние желчи на активность липазы панкреатического сока.

Принцип метода. Скорость действия липазы в отдельных порциях жира молока можно узнать по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе жира за определенных промежуток времени. Количество жирных кислот определяют титрованием щелочью в присутствии фенолфталеина. В случае добавления в пробу желчи липаза активируется и гидролиз жиров молока протекает с большей скоростью. Результаты определения выражают в миллилитрах титрованного раствора щелочи и раствора щелочи, пошедшей на нейтрализацию жирных кислот в миллилитрах, а на оси абсцисс – время в минутах.

Ход работы. В два стакана или колбы налить по 10 мл молока и по 1 мл 5% раствора панкреатина. В один стакан прилить 1 мл воды, в другой – 1 мл желчи. Жидкость в стаканах быстро перемешать. Из каждого стакана отобрать по 1 мл смеси в колбу, добавить 1-2 капли 0,5% раствора фенолфталеина и сразу титровать 0,05 N раствором едкого натра до слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек. Затем оба стакана с оставшейся смесью поместить в термостат при 38 оС. Через каждые 15 мин из стакана отбирать по 1 мл смеси и титровать 0,05 N раствором едкого натра в присутствии фенолфталеина до слабо-розового окрашивания. Провести 5-6 таких определений и на основании полученных данных построить две кривые, отражающие процесс гидролиза жира под действием фермента липазы во времени и в зависимости от наличия или отсутствия желчи.

2. Эмульгирования жира желчью.

Принцип метода. Метод основан на способности желчных кислот понижать поверхностное натяжение растворов.

Ход работы. Налить в две пробирки по 2 мл дистиллированной воды и по 3-5 капель растительного масла, затем в одну из пробирок добавить 3 капли желчи, тщательно встряхивать обе пробирки в течение 1-2 минут. Отметить образование стойкой эмульсии жира в присутствии желчи.

3. Определение активности фосфолипазы панкреатического сока.

Принцип метода. Метод основан на обнаружении ортофосфорной кислоты, образующейся при гидролизе фосфолипидов, по реакции с молибденовокислым аммонием.

Ход работы. В две пробирки налить по 5 капель 1% суспензии лецитина. В первую пробирку добавить 2 капли 5% раствора панкреатина, во вторую – две капли дистиллированной воды. Обе пробирки поместить в термостат при 37 С на 30 мин. Затем в обе пробирки налить по 5 капель молибденовокислого аммония и нагреть. При наличии фосфорной кислоты появляется желтый осадок.

4. Качественная реакция на кетоновые тела в моче ( проба Легаля).

Принцип метода. Кетоновые тела образуются с нитропруссидом натрия окрашенный комплекс.

Ход работы. К 3 мл мочи прибавить 5 капель раствора нитропруссида натрия. При этом проба окрашивается в красный цвет. При отсутствии кетоновых тел моча окрашивается в желтый цвет.

Схема протокола

Определяемый показатель	Принцип метода	Результаты
1. Эмульгирования жира желчью.	Способность желчных кислот. Понижать поверхностное натяжение растворов.	Образование эмульсии жира в воде при действии желчи
2. Влияние желчи на активность липазы панкреатического сока.	Титрование образовавшихся жирных кислот раствором 0,05N гидроксида натрия	V(NaOH)мл	Т,мин (исх. ур.)	15	30	45	60
		Без желчи
		С желчью
3. Определение активности фосфолипазы панкреатического сока.	Под действием желчи активизируются фосфолипазы панкреатического сока и происходит гидролиз лецитина	Желтое окрашивание фосфорной кислоты, образовавшейся при гидролизе фосфолипидов, с молибденовокислым аммонием.
2. Качественная реакция на кетоновые тела в моче	Кетоновые тела образуются с нитропруссидом натрия окрашенный комплекс	В норме содержится в крайне низких концентрациях красное окрашивание

Выводы.