Занятие № 4 Тема: Бактериологический метод диагностики. Дыхание бактерий. Культивирование анаэробных бактерий

Вопросы для подготовки

1. Бактериологический метод диагностики, его этапы, цель.

2. Дыхание бактерий. Аэробный и анаэробный типы дыхания. Классификация микроорганизмов по типам дыхания (строгие аэробы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы, микроаэрофилы).

3. Методы выделения анаэробов. Питательные среды.

Задания для самостоятельной работы студентов

Задание №1

Бактериологический метод исследования.

Выделить из смеси бактерий чистые культуры бактерий и провести их идентификацию.

Изучаемый объект – смесь бактерий. По готовым демонстрациям провести бактериологическое исследование по дням. Полученные данные занести в таблицу:

День исследования	Исследуемый материал	Ход исследования	Результат

1 день исследования – изучить мазок, приготовленный из смеси и окрашенный по Граму. При микроскопии мазка установить, какие морфологические виды микробов присутствуют в мазке, определить их тинкториальные свойства. Произвести условный посев смеси штрихом на МПА для получения изолированных колоний.

2 день исследования – в посевах на чашках Петри изучить макроскопические и микроскопические особенности каждой колонии (см. справочные материалы).

Изучить мазок, приготовленный из части изучаемых колоний. Убедиться, что в колонии содержатся одинаковые по морфологии бактерии. Мазки окрашены по Граму.

Из оставшейся части колоний делают посев на скошенный агар для накопления чистой культуры.

3 день исследования – изучить характер роста бактерий на скошенном агаре. Проверить чистоту культур. Сделать высев с агара на пестрый ряд и в МПБ с целью изучения биохимических свойств бактерий.

4 день исследования – провести идентификацию чистых культур бактерий.

Учесть результаты посевов на средах Гиса и на МПБ:

а) На средах с углеводами отметить наличие кислых продуктов расщепления углеводов и газообразование.

б) На МПБ обратить внимание на характер роста, отметить наличие продуктов гидролиза белка (сероводорода и индола).

Проанализировать все полученные свойства микробов (морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические) и установить видовую принадлежность выделенных бактерий, пользуясь справочными таблицами

Задание №2

Изучить приборы и способы культивирования анаэробов.

Приборы: Анаэростат, эксикатор

Способы: Виньяль-Вейона, Аристовского, Фортнера, Перетца

Питательные среды: высокий столбик сахарного агара, молоко, среда Китта-Тароцци, среда Вильсон-Блера, среда Цейслера.

Составить таблицу, классифицирующую способы культивирования анаэробов.

Справочный материал

Макроскопические признаки колоний

В проходящем свете:

1. величина колоний (мелкие, средние, крупные)

2. форма колоний (круглая, неправильная)

3. прозрачность (прозрачная, непрозрачная)

В отраженном свете:

1. высота колонии (плоская, плосковыпуклая, куполообразная)

2. поверхность колоний (гладкая, блестящая, шероховатая, матовая)

3. цвет колоний (бесцветная, пигментная, цвет пигмента)

Микроскопические признаки колоний

Изучаются под микроскопом с увеличением объектива 8х, со слегка опущенным конденсором. Эмульгируемость колоний в физиологическом растворе (хорошо или плохо эмульгируется) проверяется при приготовлении из колоний мазков с целью микроскопии их.

1. край колонии (правильно закругленный, волнистый, фестончатый, зубчатый, бахромчатый, петлеобразный)

2. структура колоний (гомогенная, негомогенная, аморфная, зернистая)

3. консистенция колоний (мягкая, слизистая, хрупкая).