Опыт 5. Открытие апофермента и кофермента в аспартат-аминотрансферазе.

В сложных белках-ферментах белковый компонент (апофермент) может быть обнаружен с помощью биуретовой реакции. Небелковый компонент, содержащий производное какого-либо витамина, может быть открыт с помощью качественных реакций на соответствующий витамин.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

2. Сульфат меди, 2%-ный раствор.

3. Хлорное железо, 1% раствор.

4. Аспартатаминотрансфераза, 1%-ный раствор.

1. Докажите наличие апофермента в аспартатаминотрансферазе с помощью биуретовой реакции. (См. занятие №3).

2. Докажите наличие кофермент аминотрансферазы с помощью качественной реакции на витамин В₆.

3. Поясните Ваши наблюдения.

Опыт 6. Количественное определение витамина С.

Приборы. 1. Колбы, 100 мл.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Аскорбиновая кислота.

2. Уксусная кислота, 0,6 М раствор.

3. Крахмал, 1% раствор.

4. Йод, стандартизированный раствор.

5. Дистиллированная вода.

6. Апельсиновый сок, свежий.

7. Апельсиновый сок, консервированный.

4. Внесите в колбу 25 мл свежеприготовленного раствора аскорбиновой кислоты (50 мг/100 мл дистиллированной воды)

5. Добавьте 2 мл 0,6 М уксусной кислоты и 3 мл 1%-ного раствора крахмала.

6. Оттитруйте этот раствор стандартизированным раствором йода, считая количество капель до появления синей окраски.

7. Возьмите еще 2 колбы. В первую из них, вместо аскорбиновой кислоты, добавьте 25 мл свежего апельсинового сока,

8. Во вторую – такой же объем сока консервированного (вместо сока можно использовать также мочу, разведенную 1:1 водой).

9. Оттитруйте оба раствора раствором йода до появления синей окраски.

10. Рассчитайте количество акскорбиновой кислоты в исследуемом образце.

Сравните полученные результаты и сделайте выводы. Из чего синтезируется в организме животных витамин С? Какова биологическая роль витамина С в организме?

Опыт 7. Определение устойчивости витамина С при нагревании в разных условиях

Приборы. 1. Колбы, 100 мл.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Шиповник настойка (хвои настойка).

2. Уксусная кислота, 0,6 М раствор.

3. Крахмал, 1% раствор.

4. Йод, 0,01 моль раствор.

5. Соляная кислота, 1мраствор.

6. Меди сульфат, 10%-ный раствор.

7. Перекись водорода, 3%-ный раствор.

1. В четыре колбочки налейте по 25 мл настойки шиповника (или по 25 мл настойки хвои).

2. Потом долейте: в первую колбочку 5 мл 1М НСl, во вторую - 10 капель 3% Н₂О₂, в третью - 0,5 мл 10% раствора CuSO₄.

3. Все колбочки кипятите на электрической плитке в течение 2 минут.

4. После охлаждения во все четыре колбочки долейте по 2 мл 0,6 М уксусной кислоты и 3 мл 1%-ного раствора крахмала.

5. Титруйте каждую пробу раствором йода (Сн=0,01 моль) до стойкого, не исчезающего в течение 30 секунд синего цвета.

6. Сравнивают цифры титрования после нагревания в разных условиях с исходными цифрами титрования настойки шиповника или хвои.

7. Полученные результаты запишите в таблицу:

	Условия нагревания
	HCl	H2O2	CuSO4	Без реагента
V (I2) пошедшего на титрование
Выводы:

Сделайте выводы, при каких условиях витамин С сохраняется в наибольшей степени.

Задание 1. Заполните таблицу, обобщающую сведения об основных коферментах.

Коферменты Название	Хим. Структура кофермента и его активная группа	Роль кофермента в катализе	Витамин- предшественник
1. НАД+, НАДФ+
2. ФМН, ФАД+
3. ТПФ
4. Биоцеталь
5. КоА
6. ПФ
7. ТГФК

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________