Занятие № 19. «Белковый обмен (часть 2)»

Цель занятия: изучить метаболизм аминокислот.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Механизм реакций трансаминирования. Биологическая роль данного процесса.

2. Пути декарбоксилирования аминокислот. Биологическое значение конечных продуктов этих реакций

3. Дезаминирование аминокислот. Биологическое значение конечных продуктов этих реакций.

4. Роль ароматических аминокислот в метаболизме.

5. Роль серосодержащих аминокислот в метаболизме.

6. Нарушения белкового обмена. Причины и пути профилактики.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Расщепление белка под действием щелочи.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Газовая горелка.

4. Держатель для пробирок.

Реактивы. 1. Яичный белок, 30%-ный раствор.

2. Желатин, 30%-ный раствор.

3. Гидроксид натрия или калия, 30%-ный раствор.

4. Ацетат свинца, 10%-ный раствор.

1. В пробирку налейте 1-2 мл 30%-ного раствора яичного белка.

2. Добавьте двойной объем концентрированного раствора щелочи и кипятите смесь в течение 2-3 мин. При этом выпадает осадок (иногда незначительный), растворяющийся при дальнейшем кипячении, и выделяется аммиак.

3. К полученному горячему сильнощелочному раствору добавьте 1 мл раствора ацетата свинца и снова кипятите смесь; образующийся сначала белый осадок гидроксида свинца растворяется в избытке щелочи. Если белок при действии щелочи отщепляет серу, то образуется сульфид свинца, в результате чего прозрачная жидкость постепенно окрашивается в коричневый цвет; при относительно высоком содержании отщепляемой серы выпадает темно-коричневый или черный осадок сульфида свинца.

4. Повторите пункт 1-3 с раствором желатина.

Объясните полученные результаты и наблюдавшиеся эффекты.

Опыт 2. Количественное определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови.

Аминотрансферазы или трансаминазы катализируют межмолекулярный перенос аминогруппы с аминокислот на кетокислоты. АлАТ катализирует реакцию переаминирования между аланином и -кетоглутаровой кислотой. По количеству образовавшейся пировиноградной кислоты можно судить об активности фермента. Количество пировиноградной кислоты определяется колориметрическим путем по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином, при которой развивается красно-бурое окрашивание.

1. В две пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:

   	Контрольная проба	Опытная проба
   Реагент 1 (АлАТ, субстрат), мл	0,25	0,25
   Дистиллированная вода, мл	0,05	–
   Сыворотка, мл	–	0,05
   Перемешать и инкубировать 30 мин
   Реагент 2 (динитрофенилгидразин), мл	0,25	0,25
   Перемешать и оставить при комнатной температуре на 20 мин
   NaOH (С = 0,4 моль/л), мл	2,5	2,5

2. Перемешайте и через 10 минут измерьте оптическую плотность пробы против контрольной пробы при длине волны 540 нм, кювета с толщиной слоя 5 мм.

3. Активность АлАТ в опытной пробе определите по калибровочному графику в нмоль/сл.

Сравните полученный результат с физиологическими величинами и сделайте вывод. Опишите механизм работы кофермента трансаминаз.

Опыт 3. Качественная реакция на наличие фенилпировиноградной кислоты в моче.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная воронка.

4. Фильтр.

Реактивы. 1. Моча.

2. Серная кислота, 5 н раствор.

3. Хлорид железа (III), 10%-ный раствор.

1. В пробирку налейте 5 мл свежепрофильтрованной мочи.

2. Долейте 4 капли 5 н раствора серной кислоты. Перемешайте и добавьте к смеси 4 капли 10%-ного раствора хлорида железа (III).

При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты через 30 секунд-1 минуту появляется сине-зеленая окраска, исчезающая через 5-10 минут.

Запишите полученные результаты. В каких случаях возможно появление фенилпировиноградной кислоты в моче? Чем опасно накопление данного метаболита в тканях организма животных?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________