Занятие № 18. «Белковый обмен (часть 1)»

Цель занятия: изучить методы количественного определения белков; освоить расчетные методы определения биологической ценности белков.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Аминокислоты: строение и классификация.

2. Белки: строение и классификация.

3. Биохимическая роль аминокислот и белков.

4. Физико-химические свойства аминокислот и белков.

5. Переваривание белков. Протеазы пищеварительного тракта, механизм их активации. Всасывание белков и аминокислот.

6. Дайте определение понятию «азотистый обмен» и расскажите, как определяется азотистый обмен. Чем вызваны различия в питательной ценности большинства белков растительной природы с одной стороны и животного происхождения с другой?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Количественное определение общего белка в сыворотке крови.

В плазме крови содержится до 200 различных белковых компонентов. Большая часть выполняемой функции крови, так или иначе, связана с белками плазмы: поддержание онкотического давления, участие в процессах свертывания крови, регуляции рН крови, выполнение транспортной и защитной функции, функции «белкового резерва» и др. Качественное и количественное постоянство белкового состава крови четко поддерживается организмом, и любые изменения в этой системе, как правило, являются отражением нарушенного функционирования тех или органов и тканей.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Центрифуга.

4.Центрифужные пробирки.

5. Водяная баня.

6. ФЭК.

7. Кюветы, 10 мм.

Реактивы. 1. Сыворотка крови.

2. Трихлоруксусная кислота, 3%-ный раствор в этаноле.

3. Биуретовый реактив.

4. Хлорид натрия, 0,85%-ный раствор.

а) Определение концентрации альбуминов.

1. В центрифужную пробирку поместите 1,5 мл 3%-ной трихлоруксусной кислоты в этаноле.

2. Добавьте 0,5 мл сыворотки крови, тщательно перемешайте и через 10 мин центрифугируйте.

3. 0,2 мл центрифугата перенесите в пробирку, содержащую 2,3 мл 0,85%-ного раствора хлорида натрия и добавьте 2,5 мл биуретового реактива.

4. Тщательно перемешайте и выдержите 20 мин в термостате при 37С.

5. Измерьте оптическую плотность при зеленом светофильтре (540-560 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм.

б) Определение концентрации общего белка.

1. 0,1 мл сыворотки крови внесите в пробирку, содержащую 2,4 мл 0,85% раствора хлористого натрия.

2. Прибавьте 2,5 мл биуретового реактива.

3. Перемешайте, термостатируйте 30 мин при 37^оС, измерьте оптическую плотность так же, как и при определении альбуминов.

К

Калибровочный график для определения белка биуретовым методом.

онцентрацию альбуминов и общего белка определите по калибровочному графику.

Для определения концентрации альбуминов полученные по стандартному графику значения следует умножить на 2, т.к. в ходе подготовки реакции сыворотка крови была разбавлена в два раза больше, чем при определении общего белка.

Сравните полученные значения с нормальными величинами. О чем свидетельствует снижение (повышение) уровня белка в сыворотке крови у животных? К каким последствия может привести недостаточность альбумина в крови?

Опыт 2. Белки как противоядие от ионов тяжелых металлов.

Взаимодействие ионов металлов с белками лежит в основе использования молока как противоядия при отравлении тяжелыми металлами.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

Реактивы. 1. Амилаза, раствор.

2. Крахмал, 1%-ный раствор.

3. Ацетат свинца, 1%-ный раствор.