1.2.5. Эпидемиологическое маркирование штаммов

Определение фагочувствительности. Чувствительность к диагно–стическим фагам используется как один из признаков для опре–деления видовой и родовой принадлежности бактерий. На чашки

с плотной питательной средой засевают газоном исследуемую куль–туру, посев подсушивают и на его поверхность наносят петлей или пастеровской пипеткой капли фага, соответствующего рабо–чему разведению, указанному на ампуле. Предварительно прове–ряют соответствие титра фага тому, что обозначен на этикетке (см. ниже). Посевы помещают в термостат на 12– 18 ч. Литическое действие фага учитывают по появлению прозрачных («негатив–ных») пятен. Положительный результат позволяет отнести иссле–дуемые бактерии к соответствующему роду или виду.

Определение фаговаров бактерий. Оно проводится для эпидеми–ологического анализа и установления источников инфекции при кишечных, стафилококковых, дифтерийной и других инфекциях.

Чашки с 1,5%-м МПА подсушивают, расчерчивают с обрат–ной стороны на квадраты по количеству фагов, входящих в на–бор, и маркируют. После этого 3–4-часовую бульонную культуру бактерий засевают газоном, подсушивают и на каждый квадрат

Разведе–ние фага

Расплав–ленный «верхний» агар

Клетки индика–торных бактерий

Р

Наслоение смеси на ^ «нижний» I–\s> агар в чашке Петри

Двухслойный агар (после застывания

верхнего слоя)

«Негативные колонии» фага

«Газон» роста индикаторной культуры

ис. 1.10. Определение количества фаговых частиц методом агаровых слоев

Аэробные и факультативно-анаэробные бактерии

На первом этапе из исследуемого материала :

• приготовление мазков с окраской по Граму, микроскопия мазков;

• посев материала на плотную среду (МПА) в чашки Петри шпателем или бактериологической петлей для получения изолированных колоний →Т 37 °С, 24 ч.

При этом достигается механическое разъединение микроорганиз­мов на поверхности питательной среды, что позволяет получить их рост в виде изолированных колоний. В отдельных случаях иссле­дуемый материал вначале сеют в жидкую среду накопления, а затем пересевают его в чашки Петри с плотной ПС. Чашки с посевами обычно помещают в термостат на 18-24 ч при 37 °С.

На втором этапе изучают культуральные свойства бакте­рий (характер их роста на питательных средах).

Этапы	Цель	Ход исследования
I	Выделение чистой куль туры	Посев исследуемого материала на плотные питательные среды
Инкубация посевов при оптимальных условиях (обычно 18 –20 ч при 37 °С)
II	Накопление чистой куль туры	Изучение культуральных свойств изолированных колоний Микроскопия окрашенных мазков (изучение морфологических и тинкториальных свойств) Пересев колоний на свежую среду для накопления
Инкубация посевов при оптимальных условиях (обычно 18 – 20 ч при 37°С)
III	Идентификация и изуче ние свойств чистой куль туры	Проверка чистоты выделенной культуры. Изучение биохимиче ских свойств (ферментативной активности): сахаролитических; протеолитических Внутривидовая идентификация и эпидемиологическое маркиро вание (при необходимости): серотипирование; биотипирование; фаготипирование; колицинотипирование; генотипирование Определение токсигенности (вирулентности) Определение чувствительности к антибиотикам и другим антимикробным средствам
Инкубация посевов при оптимальных условиях (обычно 18 –20 ч при 37 °С)
IV	Учет результатов

11