Звіт по виконанню завдання

Представити малюнку всіх фаз мітозу з поясненнями.

ЗАНЯТТЯ № 6

Тема: ПІДГОТОВКА ПОСТІЙНИХ ПРЕПАРАТІВ

(2 години)

Мета занятя : Засвоїти методику готування постійних препаратів.

Завдання:. Перевести тимчасовий препарат у постійний.

Матеріали та обладнання

1.Мікроскоп.

2.Препаровальні голки.

3.Пінцет.

4.Предметні й покривні скла.

5.Чашки Петрі.

6.Сірника.

7.Стаканчики на 100 мм – 100 шт.

8.Спирт 70%-вий і 96%-вий.

9.Бутиловий спірт.

10. Ксилол.

11.Бальзам.

12.Сухий лід або рідкий азот, або 10%-ва оцтова кислота.

13.Оцтовий алкоголь.

14.Ацетокарміновий препарат.

Пояснення до завдання

Існують кілька методів перетворення тимчасових препаратів в постійні. Найбільше широко використовується для цих цілей тверда вуглекислота по Конжеру й Ферчайльду. Для відділення покривного скла від предметного готовий давлений препарат кладуть на рівну поверхню сухого льоду на 1-5 хвилини. Замість сухого льоду іноді застосовують для заморожування давлених препаратів рідкий азот. Для цього в судину з рідким азотом вставляють алюмінієвий стрижень, що має круглий столик. Столик швидко прохолоджується й на його поверхню кладуть препарати. Якщо немає сухого льоду або рідкого азоту, можна використовувати 10%-ву оцтову кислоту для відділення покривних стекол з ацетокармінових препаратів.

У чашку Петрі наливають оцтову кислоту, кладуть два сірники й на них поміщають препарат покривним склом долілиць. Через 10-15 хвилин покривне скло відділяється. Предметне скло швидко опускають у фіксатор 9- оцтовий алкоголь - спирт = 3:1), а потім послідовно в стаканчик з наступним змістом:)

I). Спирт 70° - на 3-5 хвилин

2). Спирт 96° (1) - на 3-5 хвилин

3). Спирт 96° (П) - на 3-5 хвилин

4). Бутиловий спирт (1) - на 3-5 хвилин

5). Бутиловий спирт (П) - на 3-5 хвилин

6). Бутиловий спирт : ксилол (1:1) - на 3-5 хвилин

7). Ксилол (1) - на 3-5 хвилин

8). Ксилол (П)-(можна зберігати 1-2 години). , Після ксилолу препарат містять у канадський бальзам, використовуючи чисте покривне скло, просушують і переглядають під мікроскопом.

Звіт по виконанню завдання

Приготовлений постійний препарат. Занотувати методику приготування

ЗАНЯТТЯ № 7

Тема: ВИВЧЕННЯ ХРОМОСОМНИХ АБЕРАЦІЙ НА ТИМЧАСОВИХ ПРЕПАРАТАХ.

(4 години)

Мета занятя : Засвоїти методику проведення метафазного аналізу хромосомних аберацій.

Завдання:. 1. Вивчити основні етапи мета фазного аналізу.

2. Провести аналіз хромосомних аберацій.

Матеріали та обладнання

1. Мікроскоп.

2. Препаровальні голки, пінцет, предметне та покривне скло, лезо.

3. 0,002 М розчин оксіхінолу.

4. 0,01 – 0,05 % розчин колхіцину.

5. Крижана оцтова кислота.

6. Ацетокармін.

7. Водяна баня.

8. Термостат.

9. Преперат корінців насіння пшениці.

1. 10. Препарат насіння пшениці.

Пояснення до завдання

Для цитологічного аналізу процесів та порушень, що відбуваються під час мітозу, необхідно визначити тканини рослин, найбільш придатні для таких спостережень. Також необхідно визначити найбільш оптимальний час фіксації корінців. Мітози найбільш чітко можна спостерігати в меристемах молодих швидкоростучих корінців рослин.

Метод № 1. Матеріал промивали під проточною водою протягом 10-15 хвилин і пророщували в чашках Петрі зі зволоженим фільтрувальним папером в термостаті при температурі +25^оС. Для цитологічного аналізу структури хромосом первинні корінці фіксували у фіксаторі Карнуа, який складається з 3 частин 96%-ного спирту і 1 частини оцтової кислоти, протягом 24 годин. Фіксований матеріал зберігали в 70-градусному спирті при температурі +2^оС в холодильнику. По кожному варіанту фіксувалося 25-30 корінців.

Метод № 2. Пророслі корінці з довжиною 5 -6 мм витримують в холодильнику при температурі 1 – 2 на протязі доби для фіксації хромосом. С тією ж метою на 3 години в 0,002 М розчин 8 - оксіхінолина при температурі 10-14° чи за 2 години до фіксації оброблюють колхіцином в концентрації 0,01-0,05%. После промивання обекту у воді, фіксують в оцтовому алкоголі с 5-6 краплинами ацетокарміну на 10 мл фіксатору и 30-35 мг хлорного заліза.

Виготовлення ацетокарміну по Ремсдерх. До 1 гр. карміну додають 100 мл дистильованої води та 100 мл крижаної оцтової кислоти. Розчин кип’ятять на слабкому вогні на протязі 3 годин. Фільтрують двічі. Через добу корінці додають у пробірку, заливають на 3/4 ацетокарміном, додають 1/4 объему 45% оцтової кислоти, кип’ятять на водяной бані на протязі 15-10 хвилин.

Відрізаний кінчик (1 – 2 мм) поміщають на предметне скло у краплину 45%-ї оцтової кислоти. На корінець покласти покровное скло та роздавити корінець легким постукуванням зворотного кінця препаровальної голки. Надлишок оцтової кислоти сбирають фільтровальним папером. Препарат продивляються під мікроскопом.

Типи хромосомних перебудов, що можуть бути виявлені під час аналізу:

• фрагменти, подвійні фрагменти;

• хроматидні мости, хромосомні мости мости;

• відстаючі хромосоми;

• мікроядра.

Використовують в селекційній практиці на багато хромосомних об’єктах з великою кількістю подібних або не ідентифікованих хромосом при вивчені дії мутагенів.

Клітина може містити не один, а декілька типів хромосомних порушень. В цьому випадку кожне порушення обліковується окремо.

Результати підрахунків заносять в наступну таблицю:

Поле зору	Частота хромосом- них аберацій %	Спектр хромосомних аберацій
		Фрагменти, %		Мости, %		Вістаючі хромо- соми, %	Мікро- ядра, %
		одино- чні	парні	хрома-тидні	хромо- сомні

Встановив загальну кількість клітин у метафазі та кількість аберантних клітин, обраховують частоту як відсоткове відношення кількості клітин з абераціями до загальної кількості метафаз.