На правах рукописи

САЙДАРОВА МУХАЙЁ МАХМАДРАХИМОВНА

РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ ВИРУСОВ ГРИППА ПТИЦ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН: ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени

кандидата ветеринарных наук

МОСКВА – 2011

Работа выполнена на Научно – производственном предприятии «Биологические препараты» Таджикской академии сельскохозяйственных наук (НПП БП ТАСХН)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Амирбеков Муллоджон

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Соловьёв Борис Васильевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Масимов Нусрат Абулфатович

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности.

Защита диссертации состоится «17» мая 2011года в 16 часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при Государственном научном учреждении Всероссийский научно – исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко Российской Академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии) по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, д.24 корп. 1, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «______ » апреля 2011 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета

кандидат биологических наук Ездакова И.Ю.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Грипп птиц (кур) – острая высококонтагиозная вирусная болезнь птиц, характеризующаяся общим угнетением, отёками, поражением органов дыхания, пищеварения и ЦНС. Болезнь впервые описал Перрончито (1880) в Италии под названием «экссудативный тиф кур». Впоследствии она неоднократно возникала во многих странах мира, где её диагностировали под разными названиями, в том числе как европейскую или классическую чуму птиц. Вирусную природу возбудителя (классической, европейской) чумы птиц установил Чентани в 1901 г., а в 1955 г. возбудитель был идентифицирован как influenza virus A, и после этого с 1971 г. болезнь стали называть гриппом птиц (Конопаткин А.А., Бакулов И.А. и др., 1983, Кельмик Д.У., 2003).

В течение XX века вспышки болезни, вызванные разными штаммами, происходили во многих регионах мира, в том числе в Северной и Южной Америке, на севере Африки, в странах Среднего и Дальнего Востока, Европе и бывшем Советском Союзе. Из числа выделенных возбудителей высокой вирулентностью для птиц обладают вирусы подтипов Н5N1 и Н7N7.

В природе у диких птиц встречаются практически все известные подтипы вирусов гриппа типа А. При этом существует механизм рекомбинации поверхностных антигенов гемагглютинина и нейраминидазы. Вирусы, которые авирулентны для своих носителей, имеют широкий круг хозяев, включая другие виды птиц и млекопитающих. Важным фактором эффективной передачи таких вирусов другим видам, в частности водоплавающим птицам, может быть репликация вирусов в кишечном тракте птиц; этот резервуар в живой природе играет важную роль в экологии вирусов гриппа (Джавадов Э.Д., Придыбайло Н.Д., Амдий Э.М., Мирзоев Д.М., Салимов, Т.М., 2008). Весьма важным фактом, определяющим актуальность наших исследований, является определенная связь между заболеванием людей и вспышками гриппа птиц. В последние годы некоторые подтипы вирусов птичьего гриппа зачислены в число опасных для человека. В Соединенных Штатах Америки каждый год более 200 000 пациентов обращаются в больницы из - за гриппа и регистрируется приблизительно 36 000 смертельных случаев. В 328 случаях вирус подтипа H5N1 вызвал заболевание и в 200 случаях со смертельным исходом (Lipman D. Journal of Virology, January 2008).

В Таджикистане проблема гриппа птиц изучена не достаточно. В республике до настоящего времени не зарегистрирован высокопатогенный подтип вируса H5N1, но в различные годы были обнаружены штаммы других подтипов ВГП: 6-й (1972 г.), 7-й (1976-1978 гг.) и 4-й (1978-1979, 1983-1984 гг.) (Салимов Т.М., Фатхудинова М.Ф., 2008). Вопрос нельзя считать закрытым, принимая во внимание постоянную циркуляцию вируса H5N1 в соседних странах, возможность переноса возбудителей с дикими птицами, маршруты перелёта которых пролегают через территорию Таджикистана.

В Таджикистане наряду с птицеводческими хозяйствами промышленного типа значительное поголовье кур содержится в мелких фермерских и частных подворных хозяйствах. Эта птица обычно имеет свободный выгул, и по этой причине возможны множественные контакты с дикими и синантропными птицами - потенциальными носителями штаммов вируса гриппа. Следовательно, наблюдение за распространением гриппа птиц весьма важно для прогнозирования возможных эпизоотических вспышек болезни и организации противоэпизоотических мероприятий.

Кроме того, согласно «Санитарного кодекса наземных животных» -официального издания Международного эпизоотического бюро, членом которого является Республика Таджикистан, все страны обязаны предоставлять другим странам - членам МЭБ любую информацию по предупреждению распространения опасных болезней животных (ст. кодекса 1.1.2.).

Цель и задачи исследования. В связи с вышеизложенным была поставлена цель - провести мониторинг гриппа птиц с использованием иммунологических (серологических) тестов для определения возможной циркуляции вирусов в популяции домашней птицы в различных регионах Республики Таджикистан и разработать рекомендации по предупреждению эпизоотических вспышек болезни.

Для достижения указанной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Отработать методики иммунологического (серологического) мониторинга вируса гриппа птиц различных подтипов.

2. Разработать тест - систему для выявления антител к высокопатогенному вирусу гриппа птиц H5N1 в ИФА.

3. Изучить возможность выявления потенциальных очагов возбудителя гриппа с гемагглютинином Н7 и Н3 с использованием вирусов гриппа лошадей «А/лошадь1/Прага56» (H7N7) и «А/лошадь2/Майами 63» (H3N8).

4. Провести серологическое обследование домашних птиц (в РТГА) для выявления специфических антител к различным подтипам вируса гриппа птиц.

5. На основании полученных данных разработать практические предложения по профилактике инфекции.

Научная новизна исследования. Впервые в Республике Таджикистан установлена циркуляция ранее не регистрировавшихся вирусов гриппа птиц, нескольких подтипов. Проведенным исследованием на 12 подтипов вируса гриппа, положительные результаты в РТГА получены с вирусами: H3, H6, H8, H11, H12, H13.

Установлено, что непрямой вариант твердофазного ИФА (иммуноферментный анализ) вследствие высокой чувствительности позволяет выявлять скрытые очаги инфекции, в которых не наблюдают манифестные формы гриппа птиц H5N1.

При отрицательных результатах на вирус H5N1 в РТГА, получены совпадающие положительные результаты в ИФА и иммуноблотинге с использованием моноклональных антител.

Установлено, что гетерологичные вирусы «А/лошадь1/Прага 56» (H7N7) и «А/лошадь 2/Майами 63» (H3N8), использованные в тест-системе ИФА выявляют антитела к общим поверхностным антигенам возбудителей гриппа птиц.

Указанное позволяет использовать гетеротипичные вирусы «А/лошадь1/Прага 56» (H7N7) и «А/лошадь 2/Маями 63» (H3N8) для иммунологического мониторинга и выявления скрытых очагов вирусов гриппа птиц содержащих геммаглютинины Н7 и Н3.

Практическое значение работы. Установлено, что в птицеводческих хозяйствах разного типа ряда районов Республики Таджикистан, несмотря на отсутствие в последние годы зарегистрированных вспышек гриппа птиц, циркулируют штаммы возбудителя, отнесенные к низкопатогенным подтипам вируса гриппа птиц. Выявлены очаги на территории, которых у домашней птицы обнаруживаются антитела к высокопатогенным подтипам вируса H5N1 и H7N7, что очевидно связано с циркуляцией низковирулентных штаммов, представляющих потенциальную опасность для домашней птицы.

Проведена апробация нескольких тестов, для целей лабораторной диагностики и мониторинговых исследований, а именно: ИФА-выявление антител к группоспецифическому белку вируса гриппа А; ИФА и иммуноблотинга- определение антител к поверхностным гликопротеинам вируса. Разработаны наборы ИФА для ретроспективной диагностики высокопатогенных вирусов гриппа птиц (H5N1 и H7N7). В качестве компонентов тест - систем методом ИФА, предназначенных для ретроспективной диагностики гриппа птиц H7 и H3, могут использоваться гетеротипичные вирусы «А/лошадь1/Прага56» (H7N7) и А/лошадь2/Майами63 (H3N8).

Применение апатогенного для птиц штамма А/лошадь1/Прага56» в диагностическом наборе взамен высоковирулентного вируса H7N7 гриппа птиц, обеспечивает биологическую безвредность диагносткума и снижает опасность для окружающей среды.

Полученные данные использованы при разработке системы профилактических мероприятий против гриппа птиц в Республике Таджикистан.

Апробация работы. Материалы работы были представлены на 10-м Международном конгрессе Всемирной Конской Ветеринарной Ассоциации (г. Москва, 2008), Ученом Совете Научно – производственного предприятие «Биологические препараты» Республики Таджикистан (Душанбе, 2010), Ученом Совете ГНУ «Всероссийский научно - исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Ковалено» (Москва, 2011). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном научно - производственном совещании научных сотрудников Научно – производственного предприятия «Биологические препараты» Республики Таджикистан (Душанбе, 2010).

Основные положения, выносимые на защиту:

- данные исследований, характеризующие циркуляцию вирусов сптиц различных подтипов, которые ранее не регистрировались в Республике Таджикистан.

- результаты экспериментальных исследований, обосновывающие использование метода непрямого твердофазного ИФА для мониторинговых исследований на грипп птиц H5N1, позволяющие вследствие высокой чувствительности метода, выявлять скрытие очаги инфекции при отсутствии манифестных форм гриппа.

- результаты разработки твердофазного ИФА для выявления антител к поверхностным гликопротеинам вируса гриппа птиц H5N1.

- материалы исследований, обосновывающих перспективность использования гетеротипичных вирусов «А/лошадь1/Прага56» (H7N7) и «А/лошадь 2/Маями 63» (H3N8), в составе тест-систем ИФА для выявления антител к вирусам гриппа птиц H7 и H3.

Личный вклад соискателя. Экспериментальные исследования, анализ и обобщение результатов выполнены автором самостоятельно при участии научного руководителеля д.в.н., М. Амирбекова. Исследования по разработке ИФА с гомологичными и гетерологичными антигенами вируса гриппа птиц выполнены совместно с к.б.н. Г.К. Юровым, к.б.н. С.В. Алексеенковой, В.В. Ивановым в период прохождения стажировки в отделе вирусологии ВИЭВ. Часть исследований по серодиагностике гриппа птиц выполнены совместно с сотрудниками Национального центра ветеринарной диагностики и Службы государственного ветеринарного надзора МСХ РТ - Тиллоевым Т., Зухурбековой О. «Пособие для ветеринарных специалистов по борьбе с птичьим гриппом» разработано совместно с Мамадшоевым М.М. и Тошматовым Н. Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи сотрудникам ГНУ ВИЭВ имени Я.Р. Коваленко д.в.н., профессору К.П. Юрову, к.б.н., Г.К. Юрову и к.б.н., С.В. Алексеенковой.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, 3 в изданиях рекомендованных ВАК РФ (Журналы «Иммунология», «Ветеринарная патология» и «Кишоварз (Земледелие)»).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 111 страницах машинописного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, результаты исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы содержит 159 источника, из них – 140 иностранные. Диссертация иллюстрирована 2 таблицами, 12 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ