Сырье, оборудование, приборы:

Для проведения работы используются следующие продукты:

– испытуемые продукты 3-4 видов, например, «Бифилайф», «Бифидок», «Ацидобифилин», «Биоряженка», а также продукты, обогащенные лактобактериями.

Для выполнения лабораторной работы также используют:

– плотная среда Блаурокка (или кукурузно-лактозная) по 10 мл в пробирках. Количество пробирок 10 штук на 1 вид продукта;

– стерилизованное молоко в пробирках по 10 мл в количестве 10 штук на 1 вид продукта, обогащенного лактобактериями;

– стерильный физиологический раствор в пробирках по 10 мл. По 10 штук на каждый вид продукта;

– раствор метиленового голубого для окраски препаратов;

– набор лабораторной посуды и инвентаря: микроскоп биологический, термостат, спиртовка, термометры, пипетки стерильные градуированные на 1 мл, стеклянные палочки и др.

Порядок выполнения работы

В ходе выполнения лабораторной работы студенты должны:

– Ознакомиться детально с сущностью и порядком проведения исследования;

– Подготовить испытуемые образцы продуктов к анализу, приготовить разведения отобранной пробы в стерильной воде (с 1-го по 8-е разведение);

– Провести высев разведений продукта в питательную среду;

– Провести термостатирование пробирок с засеянной культурой;

– Провести учет и обработку результатов;

– Оформить отчет по результатам лабораторной работы;

Подготовка среды и других материалов проводится заранее лаборантами кафедры ТМиПБ в соответствии с требованиями, изложенными в МУК 4.2.999-0.

Студенты после ознакомления с порядком проведения исследования отбирают пробу из вскрытой упаковки (1 мл) и готовят разведения в стерильном физиологическом растворе с 1-го по 8-е, каждый раз помещая 1 см³ посевного материала в пробирку со стерильным физиологическим раствором и тщательно перемешивая внесенную порцию.

Внесение посевного материала в среду (пробирки со средой подписывают заранее) проводят, начиная с последнего 8-го разведения и заканчивая 4-ым по две пробирки каждого разведения. Для каждого посева берут новую стерильную пипетку.

Определение количества живых клеток бифидобактерий

Методика определения количества живых клеток бифидобактерий основана на способности этих бактерий расти на питательных средах, разлитых высоким столбиком в пробирках при температуре (38±1)ºС и образовывать в них через 24–72 часа колонии с типичными для бифидобактерий морфологическими характеристиками. Питательной средой для бифидобактерий может служить плотная среда Блаурокка (или кукурузно-лактозная).

Пробирки с посевами образцов продукта выдерживают в термостате с температурой (38±1)ºС в течение 72ч, просматривая посевы через 24–48 ч.

Окончательный учет проводят через 72 ч. Для получения практического опыта учета бифидобактерий в посевах на кафедре заблаговременно (за трое суток) делают посевы тех же образцов продуктов.

Обработку результатов посевов проводят следующим образом: учитывают последние пробирки, в которых выросли колонии, типичные для бифидобактерий – в виде «гвоздиков», «веретен», «полос», расположенных вдоль пробирки (в плотных средах – в виде «гречищного зерна» или «дисков»), и записывают номер разведения пробирки. Выросшие колонии подсчитывают в тех разведениях, которые наиболее доступны для учета (обычно 6–7 разведение).

Подтверждение наличия бифидобактерий проводят методом микроскопирования. Из типичных колоний последнего разведения и со дна пробирки последующего разведения готовят мазки, окрашенные по Грамму или метиленовым голубым. Бифидобактерии относятся к граммположительным, в мазках имеют вид тонких, мелкозернистых, слегка изогнутых палочек с бифуркацией на концах или без нее; располагаются группами в виде римских пятерок (V), скоплений в виде китайских иероглифов, коротких цепочек.

Вычисление содержания живых клеток бифидобактерий в 1,0см³ продукта проводят по формуле:

Х = а*10ⁿ

где Х - количество живых бифидобактерий в 1,0 см³ продукта;

а – среднее количество колоний в последнем, засеянном в 2-х рядах разведений продукта;

10 – коэффициент децимального разведения;

n – показатель последнего разведения, в котором отмечен рост бифидобактерий;

В кисломолочных продуктах, полученных по способу обогащения, кроме бифидобактерий присутствуют молочнокислые палочки и стрептококки (в «Биокефире» — единичные клетки дрожжей).