Обработка результатов
ПАк исследуемых ферментных препаратов рассчитывают по формуле, подставляя полученные на ФЭКе значения оптических плотностей:
где
Д – оптическая плотность (показания на ФЭК);
4 – отношение объемов реакционной смеси и раствора фермента после добавления трихлоруксусной кислоты;
ТЭ – тирозиновый эквивалент;
10 – длительность гидролиза субстрата, мин;
а – количество ферментного препарата, взятого на реакцию, мг или мл;
1000- пересчет граммов в миллиграммы;
Указанный в формуле тирозиновый эквивалент определяют из соотношения Д/С, где С – содержание тирозина в 1 мл раствора, мкмоль. Этот эквивалент устанавливают для каждой партии реактива Фолина и каждого прибора ФЭК по градуировочной кривой, составленной по модельным растворам тирозина (см. данные таблицы для построения градуировочной кривой).
Таблица 4
Данные оптической плотности модельных растворов тирозина
С, мкмоль/мл
|
0,02
|
0,04
|
0,08
|
0,10
|
0,15
|
0,20
|
0,30
|
Д |
0,037
|
0,070
|
0,127
|
0,151
|
0,220
|
0,310
|
0,500
|
Пример расчета
На анализ взят очищенный препарат фермента, содержащий нейтральную протеазу. Приготовлен его основной раствор – 0,12 г на 100 мл. Для рабочего раствора отобрано 6 мл основного в мерную колбу вместимостью 100 мл. На анализ в соответствии с методикой эксперимента взято 2 мл ферментного раствора. Рассчитано содержание препарата (а) в 2 мл ферментного раствора:
,мг
После проведения ферментативной реакции и колориметрирования образцов (Д=0,380) определяется тирозиновый эквивалент, он равен 1,51 (см. данные таблицы 4).
Полученные значения подставляются в формулу и рассчитываются протеолитическая активность исследуемого препарата:
,ед/г
Порядок оформления работы
В отчете отразить данные, характеризующие задание и ход выполнения работы; необходимые расчеты и полученные результаты;
Сделать анализ полученных результатов;
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические основы молочного производства – М.: Агропромиздат, 1987. – 400 c.
2. Ганина В.И. Пробиотики, назначение, свойства и основы биотехнологии. М.: МГУПБ, 2001.–169 с.
3. Грачева И.М., Кривцова А.Ю., Технология ферментных препаратов. Учебник. – М.: «Элевар», 2000. – 512с.
4. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов. Учебник для ВУЗов.–Сергиев Посад: ООО «Все для Вас – Подмосковье», 1999. – 415 с.
5. Инструкция по приготовлению и применению заквасок для кисломолочных продуктов на предприятиях молочной промышленности.– М., 1992.
6. Отраслевой стандарт «Закваски бактериальные сухие и жидкие» ОСТ 49113–92
7. Паткуль Г.М., Лыщева Л.А., Кудрявцева Т.А. Непрерывное молочнокислое брожение в производстве кисломолочных продуктов.– М.: Пищевая промышленность, 1976.–53 с.
8. Рухлядева А.П., Полыгалина Г.В. Методы определения активности гидролитических ферментов.
ПРИЛОЖЕНИЕ 1