Ход работы

Опыт 1. Разделение индикаторов. Нанесите каплю защищенного метилового оранже­вого в центр хроматографической бумаги. Высу­шите бумагу при комнатной температуре, немного по­держите ее над открытой бутылкой раствора аммиака и затем положите на чашку Петри (рис.1). Капните одну каплю воды на пятно индикатора.

Рис.1 Хроматографическое разделение метилового оранжевого.

Два индикатора, содержащиеся в растворе мети­лового оранжевого, двигаются центробежно с раз­ными скоростями, причем синее кольцо двигается быстрее желтого. Синее кольцо - это индикатор бромтимоловый синий, а желтое - метиловый оран­жевый.

Опыт 2. Разделение цветных чернил на составляющие компоненты. На прямоугольнике из хроматографиче­ской бумаги на расстоянии 1 см от края проведите карандашом линию. Разметьте стартовую лилию крестиками через равные интервалы; на каждый цвет чернил должно приходиться по одному крестику. Фломастерами с водорастворимыми чернилами разных цветов нанесите на каждый крестик по пятну чернил разного цвета и под каждым пят­ном отметьте его местоположение карандашом. Пятно должно быть не более 2 мм в диаметре. Высушите пятна.

Подвесьте бумагу в хроматографическую камеру таким образом, чтобы стартовая линия находилась около по­верхности растворителя, а конец бумаги был погружен в растворитель. Растворителем служит дистиллированная вода. Продолжайте хроматографию до тех пор, пока фронт растворителя не окажется на расстоянии 1 см от верхнего края бумаги. Выньте хроматограмму и высушите ее, предварительно от­метив карандашом положение фронта раствори­теля (рис. 2).

Рис. 2 Движение растворителя и вещества при хоматографии

При хроматографии подвижность растворенного вещества относительно фронта растворителя постоянна для данного вещества. Это выражается величиной R_f:

Расстояние, пройденное растворенным веществом

R_f = ------------------------------------------------------------------

Расстояние, пройденное фронтом растворителя.

Вычислите R_f для каждого цвета.

Работа 4. Разделение аминокислот методом тонкослойной ионообменной хроматографии.

Разделение аминокислот из их смеси производят на катионообменной синтетической смоле, на которую нанесен сильный катионит в натриевой форме. При нанесении образца на пластинку все аминокислоты должны сорбироваться в стартовой позиции путем их обмена с катионом натрия. Следова­тельно, все аминокислоты в исходной пробе должны быть в форме катионов, что достигается доведением наносимого раствора до рН<2.2. Степень удержания аминокислот смолой зависит от степе­ни диссоциации основных и кислотных групп аминокислот, от числа этих групп в молекуле, от способности к гидрофобным взаимодействиям со смолой и некоторых других ус­ловий. Ароматические и основные аминокислоты (арг, гис, лиз, фен, тир), а также лейцин прочно удерживаются на катионите. Для их разделения применяют пропускание нитратного буфера рН 5.25 с концентрацией Na⁺ 0.35 моль через слой смолы. В этих условиях все остальные аминокислоты (кислые и нейтральные) приобретают высокую подвижность и идут с фронтом растворителя. Для выявле­ния отдельных аминокислот пластинку опрыскивают раствором нингидрина. Появляются фиолетовые пятна аминокислот, распола­гающиеся по всей длине пластинки по степени возрастания подвиж­ности аминокислот. Полуколичественная оценка содержания ами­нокислоты в смеси достигается путем сравнения величины пятна из анализируемого образца с пятном соответствующей стандартной аминокислоты.

Исследуемый материал: растворы аминокислот.

Оборудование: хроматографическая камера, пластинки для ТСХ

Реактивы: 1) стандартная смесь аминокислот, 0.01 н. НС1, 2) цитратный буфер рН 5.28, 3) нингидриновый реактив