Ход работы

Провести реакции осаждения белка различными способами.

Опыт 1. Осаждение белков кипячением

№ пробы	Раствор белка, капель	Ход анализа	Результат	Вывод
1	5	Нагреть до кипения
2	5	Нагреть до кипения+1капля раствора СН3СООН
3	5	5капель раствора СН3СООН+кипячение
4	5	5капль раствора СН3СООН+2капли насыщ. раствора NaCl+ кипячение
5	5	2капли раствора NaOH+ кипячение

Опыт 2. Осаждение белков при комнатной температуре нейтральными солями – высаливание

Реагенты, условия опыта	Количество реагента, мл
	Опыт А	Опыт Б
Раствор белка	1	1
NaCl, порошок	До насыщения	-
(NH4)2SO4, насыщенный раствор	-	1
Отфильтровать	Через 10 мин. на фильтре глобулины	Без инкубации на фильтре глобулины
Исследуется фильтрат
(NH4)2SO4, порошок	-	До насыщения
Результат	Исследуется после кипячения

Во втором варианте после осаждения альбуминов надосадочную жидкость проверяют на отсутствие белка с помощью биуретовой реакции.

Опыт 3. Осаждение белков солями тяжелых металлов

К 5 каплям раствора яичного белка осторожно прибавить 1 каплю раствора сульфата меди (II). Образуется бледно-голубой осадок, нерастворимый в воде. К другой такой же порции раствора белка прилить вначале 1 каплю раствора сульфата меди (II), а затем еще 10 капель и наблюдать растворение осадка в избытке реактива. К 5 каплям раствора яичного белка прибавить 2 капли раствора ацетата свинца (II), образуется осадок, нерастворимый в воде, но легко растворяющийся в избытке осадителя.

Опыт 4. Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами.

К 5 каплям концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки прилить 5 капель раствора белка так, чтобы обе жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца (проба Геллера). Осторож­но встряхнуть пробирку и добавить избыток азотной кислоты: оса­док не исчезает, так как в избытке азотной кислоты он не растворя­ется. Осаждение серной кислотой проводится аналогично реакции с азотной кислотой. К 5 каплям концентрированной серной кисло­ты осторожно по стенке пробирки прилить 5 капель раствора белка. Образуется осадок, растворимый в избытке серной кислоты (при встряхивании).

Опыт 5. Осаждение белков органическими веществами:

а) органическими кислотами: к 5 каплям раствора белка добавить 2 капли раствора сульфосалициловой кислоты. Выпадает осадок бел­ка. К 5 каплям раствора белка добавить 2 капли раствора трихлоруксусной кислоты. Выпадает осадок белка;

б) спиртом: к 5 каплям раствора белка прилить 15—20 капель этанола. Раствор мутнеет. Добавить 1 каплю насыщенного раствора хлористого натрия. Наблюдается выпадение осадка;

в) алкалоидными реактивами: к 5 каплям раствора белка добавить 2 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты и 2 капли рас­твора уксусной кислоты. Выпадает осадок белка.

Тема 2

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ В БИОХИМИИ

(4 ч)

Работа 3 . Хроматографический метод разделения смесей.

Хроматография – это метод, применяемый для разделения различных смесей на составляющие их компоненты. Метод основан на том, что в неподвижной среде, через которую протекает растворитель, каждый из компонентов, увлекаемых растворителем, движется со своей собственной скоростью независимо от других. В зависимости от природы используемой неподвижной среды выделяют разные типы хроматографии и различные модификации хроматографических методов: адсорбционная, распределительная, ионообменная, фронтальная ионообменная хроматографии.

Исследуемый материал: метиловый оранжевый (защищенный), фломастеры.

Оборудование: хроматографическая бумага, чашка Петри, пипетка, хроматографическая камера, ножницы, карандаш, линейка.

Реактивы: 1) 10% раствор NH₃, 2) дистиллированная вода.