Ход работы

Извлечение нуклеопротеинов из дрожжей. В фар­форовую ступку помещают 1 г дрожжей, добавляют 1 каплю диэтилового эфира, 2 капли дистиллированной воды, около 0,1 г стеклянного песка. Дрожжевую массу растирают пестиком 1—2 мин для разрушения клеток. В ступку добавляют 4 мл раствора гидроксида натрия и растирание продолжают в течение 5 мин. Содержимое ступки пипеткой переносят в центрифужную пробирку, уравновешивают на весах с другой пробиркой, в которую налита вода, и центрифугируют в течение 10 мин. Надосадочную жидкость переносят пипеткой в стакан с 80—90 мл воды, подкисленной до рН = 4.5 уксусной кислотой. Выпавший осадок РНК-протеина отделяют центрифугированием.

Работа 16. Изучение химического состава рибонуклеопротеинов дрожжей

Исследуемый материал: прессованные дрожжи

Оборудование: коническая колба 150 мл, ступка с пестиком, марля, центрифуга, штатив, пробирки (маленькие и большие), деревянные палочки, спиртовка, спички, воронка, 2 химических стакана, лакмусовая бумага, весы, разновесы, водяная баня, обратный воздушный холодильник.

Реактивы: 1) 10% раствор H₂SO₄, 2) 10% раствор NaOH, 1 % раствор CuSO₄, 3) 10% раствор NH₃, 4) аммиачный раствор серебра, 5) мо­либденовый реактив.

Ход работы

200 мг дрожжей помещают в широкую пробирку и добавляют 5 мл 10%-го раствора серной кислоты и 5 мл дистиллированной воды. Перемешивают и закрывают пробкой с обратным воздушным холодильником. Пробир­ку помещают на кипящую водяную баню и кипятят при слабом нагревании 1 час. Затем пробирки охлаждают, фильтруют содержимое и с гидролизатом проводят реакции на составные части нуклеотидов.

А) Биуретовая реакция на белок.

К 5—6 каплям гидролизата прибавляют 10 капель 10% -го раствора NaOH и 1 каплю 1 % -го раствора медного купороса. При наличии белка жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

Б) Серебряная проба на пуриновые основания.

К 0.5 мл гидролизата добавляют аммиак до щелоч­ной реакции по лакмусу и 0.5 мл аммиачного раствора серебра. Через 5 мин при стоянии выпадает не­большой хлопьевидный осадок серебряных соединений пу­риновых оснований.

В) Реакция на пентозы.

К 0.5 мл гидролизата добавляют 0.5 мл ра­створа NaOH и по каплям раствор сульфата меди до обра­зования гидрата окиси меди (избегать избытка). Нагревают до кипения. В случае присутствия моносахаридов (пентоз) образуется красный осадок закиси меди.

Г) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

К 0.5 мл гидролизата прибавляют равный объем мо­либденового реактива и кипятят несколько минут. Жид­кость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаж­дении образуется желтый осадок фосфорно-молибденовокислого аммония.

Сделать схему полного распада РНК-протеинов.

Тема 6

ФОТОСИНТЕЗ

(2ч)

Работа 17. Обнаружение крахмала в зеленых листьях растений

Крахмал может быть обнаружен только в зеленых листьях растений.

Материал для исследования: зеленый и пожелтев­ший листья.

Оборудование: штатив с пробирками, спиртовка, водяная баня, мерный цилиндр (на 10 мл), фильтровальная бумага, пипетки.

Реактивы: 1) этанол, 2) 1% раствор йода.