И Н С Т Р У К Ц И Я

По выполнению практической работы № 22 по теме «Определение активности лактатдегидрогеназы (лдг), гидроксибутиратдегидрогеназы (нbdн) в сыворотке крови кинетическим методом» Цели занятия:

1. Ознакомить учащихся с методами исследования активности ЛДГ и НБДН в биохимических отделах КДЛ.

2. Сформировать понятие о роли ЛДГ и НBDН в организме, механизме ферментативного катализа, изоформах ЛДГ, их значении в диагностике патологических состояний, принципе кинетического метода определения активности ЛДГ и НBDН в сыворотке крови.

3. Научить определять активность ЛДГи НBDН в сыворотке крови кинетическим методом, интерпретировать полученный результат.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Теоретический материал по теме «Значение ферментов в медицине».

Учащийся должен уметь:

1. Провести определение активности ЛДГи НBDН в сыворотке крови кинетическим методом, интерпретировать полученный результат.

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

• Микролекция

1. Практическая часть:

• Провести определение активности ЛДГи НBDН в сыворотке крови кинетическим методом, интерпретировать полученный результат.

Микролекция

Лактатдегидрогеназа — гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление L-лактата в пировиноградную кислоту. Для лактатдегидрогеназы в качестве промежуточного акцептора водорода требуется НАД. Реакция, катализируемая лактатдегидрогеназой, может быть представлена в следующем виде:

L-лакгат + НАД ↔ пируват + НАД Н + Н+.

Фермент широко распространен в организме человека. По степени убывания активности энзима органы и ткани могут быть расположены в следующем порядке: почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови. Изменения в строении белковой части изофермента обусловливают их различные физико-химические свойства, что, в частности, сказывается в неодинаковой электрофоретической подвижности разновидностей этого фермента в агаровом, крахмальном, полиакриламидном и других гелях. В сыворотке крови обнаружено пять изоэнзимов лактатдегидрогеназы: ЛДГ1, ЛДГ2, ЛДГ3, ЛДГ4, ЛДГ5, располагающихся в геле в порядке убывания их электрофоретической подвижности. Установлено, что фракция ЛДГ1 происходит в основном из ткани сердца, ЛДГ5 — из печени. В отличие от последней ЛДГ1 обладают большей устойчивостью к действию мочевины.

Лактатдегидрогеназа содержится не только в сыворотке, но и в значительном количестве в эритроцитах, поэтому сыворотка, используемая для анализа, должна быть свежей, лишенной следов гемолиза.

Исследование общей активности фермента характеризует интенсивность окислительно-восстановительных процессов организма, а определение активности отдельных изоэнзимов ЛДГ способствует диагностике некоторых заболеваний сердца, печени и других органов.

Альфа-гидроксибутират дегидрогеназа – это изофермент лактатдегидрогеназы-1 (ЛДГ-1) -  фракция ЛДГ, характерная для сердечной мышцы.

Изофермент ЛДГ 1 присутствует в большой концентрации в мышце сердца (тетрамер НННН), а также в эритроцитах и корковом веществе почек;