ЗАНЯТИЕ 1.1.5

Физиология микробов. Бактериологический метод диагностики (продолжение). Методы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов.

Цель занятия:

изучить методы выделения чистых культур анаэробов; методы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов.

Студент должен знать:

1. Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение).

2. Методы культивирования анаэробов.

3. Типы взаимодействия вируса с клеткой, стадии репродукции вируса.

4. Методы культивирования риккетсий, вирусов.

Студент должен уметь:

применять бактериологический метод диагностики для идентификации бактерий.

Студент должен иметь представление:

о способах заражении биологических моделей для культивирования риккетсий, хламидий и вирусов

Работа№1. Схема бактериологического метода диагностики анаэробных инфекций

Цель: выявить особенности бактериологического метода диагностики для анаэробных инфекций

Самостоятельная работа: разобрать схему выделения и идентификации микроорганизмов с анаэробным типом дыхания

Схема бактериологического метода диагностики анаэробных инфекций

I1

II

I II

IV

а)

V

г)

б)

в)

1. Забор исследуемого материала

2. Накопление культуры (среды обогащения: сахарный бульон, тиогликолевая среда, железо-сульфидная среда)

3. Получения изолированных колоний на плотных питательных средах (культивирование в анаэробных условиях)

4. Накопление чистой культуры на тиогликолевой среде

V. Идентификация выделенной чистой культуры

а) изучение морфологических и тинкториальных свойств

б) изучение культуральных свойств

в) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса

г) Реакция нейтрализации токсина на лабораторных животных, реакция флоккуляции

Вывод: ____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

Работа №2. Методы создания анаэробных условий

Цель: изучить методы создания анаэробных условий (см.теоретическую справку)

Самостоятельная работа: рассмотреть предложенные питательные среды и оборудование для культивирования анаэробов, назвать метод создания анаэробных условий

метод	рисунок	результат
1) Вейнберга
2) Анаэростат, эксикатор
3) Тиогликолевая среда
4) метод Фортнера

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа №3. Биохимическая активность анаэробов

Цель: изучить биохимическую активность анаэробных бактерий.

Самостоятельная работа: указать какая биохимическая активность анаэробов проявляется на демонстрационных средах

среда	рисунок	результат
1) Вильсона - Блера
2) Молоко
3) Цейсслера (кровяно-сахарный агар)

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4.Методы культивирования риккетсий, хламидий, вирусов

Цель: разобрать основные принципы выделения и индикации облигатных внутриклеточных паразитов

Самостоятельная работа: описать основные живые модели для культивирования внутриклеточных паразитов

Внимание! Заражение эмбриона происходит в асептических условиях, а вируссодержащий материал должен быть освобожден от бактерий путем добавления антибиотиков.

1)Куриный эмбрион

1. Воздушное пространство

2. Отверстие в скорлупе

3. Скорлупная оболочка

4. Хорионаллантоисная оболочка

5. Желточный мешок

6. Белок

7. Амнион

8. Плод

9. Аллантоисная полость

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2) Культура тканей

первичные перевиваемые полуперевиваемые

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3) Лабораторные животные

Вывод:_______________________________________________________________________

Теоретическая справка

К работе №2

Методы создания анаэробных условий

1. Физические методы. Методы основаны на выращивании микроорганизмов в среде без воздуха

• Посев в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества:

В качестве редуцирующих веществ обычно используют кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печень, мозг, почки, селезенка, кровь, картофель, вата). Эти ткани связывают растворенный в среде кислород и адсорбируют бактерии. Чтобы уменьшить содержание кислорода в питательной среде, ее перед посевом кипятят 10-15 мин, а затем быстро охлаждают и заливают сверху небольшим количеством стерильного вазелинового масла. Высота слоя масла в пробирке около 1 см. В качестве легко окисляемых веществ используют глюкозу, лактозу и муравьино-кислый натрий.

Лучшей жидкой питательной средой с редуцирующим веществами является среда тиогликолевая, которая используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выращенной чистой культуры анаэробов.

•Посев микроорганизмов в глубину плотных питательных сред.

Посев уколом. Применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий и длительного хранения культур. При посеве уколом в пробирку с прямым агаром или столбиком желатины держат дном кверху, вынимают пробку и обжигают край пробирки. Материал, содержащий микробы, забирают простерилизованной на пламени длинной совершенно прямой платиновой иглой и прокалывают ею столбик питательной среды снизу вверх почти до самого дна пробирки. Вынимают иглу, обжигают край пробирки и пробки, закрывают пробирку, прожигают иглу, ставят ее в подставку, надписывают пробирку и помещают в штатив.

•Механическое удаление воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные микроорганизмы

Удаление воздуха производят путем его механического откачивания из специальных приборов - анаэростатов, в которые помещают чашку с посевом анаэробов. Переносной анаэростат представляет собой толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой (с резиновой прокладкой), снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения засеянных чашек или пробирок воздух из анаэростата удаляют с помощью вакуумного насоса.

• Замена воздуха в сосуде каким-либо индифферентным газом

Замену воздуха индифферентным газом (азотом, водородом, аргоном) можно производить в тех же анаэростатах путем вытеснения его газом из баллона.