Культивирование.

Время инкубирования

При использовании флаконов для ручного культивирования как лабораторного, так и промышленного производства (manual blood culture bottles), их следует инкубировать при температуре 35–37°C и дважды в день (хотя бы в течение первых 3 дней) визуально проверять на наличие микробного роста. О стерильности свидетельствует красный слой крови на дне флакона, покрытый бледно-желтым бульоном.

О наличии микробного роста свидетельствует:

• хлопьевидный осадок на поверхности слоя крови;

• помутнение либо всей среды, либо ее поверхностной части;

• гемолиз;

• коагуляция бульона;

• пленка на поверхности;

• газообразование;

• белые крупинки на поверхности или внутри кровяного слоя.

Как только визуально будет обнаружен микробный рост, флаконы следует асептически вскрыть; стерильной бактериологической петлей или пастеровской пипеткой взять небольшое количество бульона, приготовить окрашенный по Граму мазок и исследовать его на наличие микроорганизмов.

Субкультивирование осуществляют путем посева полной бактериологической петли проросшего бульона на соответствующую плотную питательную среду:

• Грамотрицательные палочки – агар Мак-Конки, агар Клиглера с железом, полужидкий агар для определения подвижности, продукции индола и уреазной активности, агар Симонса (цитратный агар).

• Стафилококки – кровяной агар, желточно-солевой (манитно-солевой) агар.

• Стрептококки – кровяной агар с оптохином, бацитрацин и диски с теллуритом, желчно-эскулиновый агар.

При подозрении на анаэробную флору делают параллельные высевы для культивирования в аэробных и анаэробных условиях.

Хотя ныне действующие нормативы и предписывают выдавать отрицательный ответ не ранее 10 дней от момента инкубации образца крови, как показала практика, при проведении рутинных исследований нет необходимости проводить инкубацию крови более 7 дней. В некоторых случаях инкубация может быть продолжена еще в течение 7 дней; это целесообразно, если имеется подозрение на наличие бруцелл или других весьма требовательных к питательным средам микроорганизмов, в случаях эндокардитов или если пациент получает антибиотики. За это время может быть выявлен замедленный рост персистирующих бактерий, бактерий в L-форме и т. п. При этом если флаконы закрыты ватно-марлевыми пробками, их нужно запарафинировать смесью воска (1/3) и парафина (2/3) для предотвращения высыхания среды.

Слепое культивирование. Рост некоторых микроорганизмов не сопровождается помутнением или другими видимыми изменениями бульона. Другие микроорганизмы, такие как пневмококки, имеют тенденцию к аутолизу и быстро погибают. Для обнаружения этих микробов рекомендуется проводить через каждые 48 ч субкультивирование на шоколадном агаре путем инкубации посевов в течение 18–24 ч, следует особенно строго соблюдать правила, обеспечивающие стерильность, т. к. возможность попадания посторонней флоры во время повторных пересевов возрастает с каждым последующим пересевом.

Контаминанты. Загрязнения крови посторонней микрофлорой можно избежать, тщательно обрабатывая кожу пациента и скрупулезно соблюдая правила асептики при выполнении всех лабораторных процедур. Тем не менее, даже в идеальных условиях 3–5% проб крови оказываются загрязненными посторонней микрофлорой. С кожи в кровь попадают S. epidermidis, P. acnes, Clostridium spp., Diphteroides, из внешней среды – Acinetobacter spp., Bacillus spp. Однако эти же микроорганизмы иногда могут быть этиологическими факторами заболеваний, даже таких как эндокардиты.