3.1 Биуретовая реакция

Специфической реакцией на содержание белка является биуретовая реакция, так как ее дают полипептидные связи. Биуретовую реакцию дают все белки, пептоны и полипептиды, начиная с тетрапептидов. Реакция основана на способности пептидной группы белков (-СО-NН-) образовывать в щелочной среде с ионами меди комплексное соединение фиолетового цвета с красным или синим оттенком в зависимости от числа пептидных связей в белке (биуретовый комплекс):

Также биуретовую реакцию могут давать некоторые свободные аминокислоты (гистидин, треонин, аспарагин) при их значительной концентрации в растворе.

Реактивы: 10% раствор едкого натрия, 0,5% раствор сернокислой меди.

Проведение испытания: В пробирку помещают 2 см³ раствора белка и столько же 10% раствора едкого натрия, хорошо смешивают и затем добавляют несколько капель раствора 0,5% сернокислой меди. При смешивании появляется фиолетовое окрашивание. Следует избегать избытка меди, так как в этом случае фиолетовая окраска маскируется синей.

3.2 Ксантопротеиновая реакция

Большинство белков с крепкой азотной кислотой образуют соединение желтого цвета. Эта реакция характерна для циклических аминокислот, содержащих бензольное кольцо: фенилаланин, тирозин и триптофан.

Так, при действии крепкой азотной кислоты на тирозин происходит нитрирование бензольного кольца с образованием динитротирозина желтого цвета:

Н₂С - СН - СООН Н₂С - СН - СООН

NН₂ NН₂

+ 2НNО₃ → + 2 Н₂О

О₂N NО₂

ОН ОН

Тирозин Динитротиразин

(жёлтое окрашивание)

При добавлении щелочи образуется натриевая соль динитротирозина, имеющая оранжевое окрашивание:

Н₂С - СН - СООН Н₂С - СН - СООН

NН₂ NН₂

+ NаОН →

О₂N NО₂ О₂N N - ОNа

ОН О О

Натриевая соль динитротирозина (оранжевое окрашивание)

Реактивы: концентрированная азотная кислота, 10% раствор едкого натрия.

Проведение испытания: в пробирку вносят 2 см³ водного раствора белка, прибавляют каплями 1 см³ концентрированной азотной кислоты и осторожно нагревают. Появляется осадок свернувшегося белка. Осадок и раствор окрашиваются в желтый цвет. Пробирку охлаждают и осторожно прибавляют избыток 10% раствора едкого натрия, при этом желтая окраска переходит в красно-оранжевую.