Прямое переливание

Прямым называется такой способ непосредствен­ного переливания от донора реципиенту, при кото­ром переливается только цельная кровь без стаби­лизаторов и консервации. Возможны следующие технологии переливания крови:

а) прямое соединение сосудов донора и реципи­ента пластиковой трубкой (непрерывный способ);

б) взятие у донора с помощью шприца (20 мл) крови и максимально быстрое ее переливание ре­ципиенту (прерывистый способ);

в) прерывистый способ с использованием специ­альных аппаратов.

Преимуществами прямого метода являются: от­сутствие консерванта и переливание свежей, теп­лой крови, сохраняющей свои функции; недостатка­ми - риск попадания в кровеносное русло реципи­ента мелких тромбов, переливание недостаточно проверенной донорской крови, риск инфицирования донора. По причине указанных недостатков, прямое переливание крови в классическом виде в совре­менной практике не применяется. При необходи­мости делают переливание теплой донорской кро­ви: вызывают донора резерва, забирают у него кровь в бутылочку или пакет со стабилизатором и непос-

редственно после забора эту кровь переливают ре­ципиенту в другом помещении.

Таким образом, получается, что момент забора крови у донора и трансфузия реципиенту разделе­ны во времени и пространстве, что исключает вся­кий риск заражения.

Непрямое переливание

Непрямое переливание представляет собой ос­новной метод гемотрансфузии. Он исключает опас­ность инфицирования, отличается простотой вы­полнения, несложным техническим оснащением и помогает избежать отрицательного психологичес­кого эффекта, который оказывает на больного при­сутствие донора.

Данный метод дает возможность заготовки боль­ших количеств донорской крови, которую можно использовать как в плановом, так и в экстренном порядке. Заготовка крови в специальные пакеты (флаконы) с консервантом осуществляется в пла­новом порядке на станциях и в отделениях пере­ливания крови, составляют так называемый банк крови, который хранится в определенных условиях и используется по мере необходимости.

К отрицательным моментам этого метода относится то, что в процессе хранения кровь и ее компоненты теряют некоторое целебные свойства, а консерванты могут вызвать побочные реакции у реципиента.

ОБМЕННОЕ ПЕРЕЛИВАНИЕ

Обменное переливание используется при гемо­литической желтухе новорожденных (Кп-конфликт), массивном внутрисосудистом гемолизе, тяжелых отравлениях. При этом, наряду с переливаниемдонорской крови, осуществляется эксфузия собствен­ной крови реципиента.

ПОНЯТИЕ О ГРУППАХ КРОВИ

Группы крови системы АВ0

Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.

Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).

Первая группа крови - 0 (I)

I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.

Вторая группа крови А β (II)

II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.

Третья группа крови Вα (III)

III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.

Четвертая группа крови АВ0 (IV)

IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.

Группы крови по системе АВО

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа опреде­ления групп крови по системе АВО:

- по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;

- с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится к обнаружению в испыту­емой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей использу­ется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25° С.

Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных се­рий. Сыворотки для определения групп крови изготав­ливают из донорской крови в специальных лаборато­риях. Хранятся сыворотки в холодильнике при темпе­ратуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то мак­симальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без при­знаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на пре­паратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

- Белые фарфоровые или эмалированные тарел­ки или другие пластинки со смачиваемой поверх­ностью, маркированные, согласно группам крови.

— Изотонический раствор хлорида натрия.

— Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предмет­ные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующими обозначениями груп­пы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворот­ку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать оши­бок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в сле­дующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).

2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель иссле­дуемой крови величиной примерно с булавочную го­ловку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно переме­шивают между собой стеклянными палочками с за­кругленными краями.

Возможна и более простая методика: на тарел­ку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каж­дый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.

3. Смешав капли, тарелку периодически покачи­вают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не ме­нее 5 минут, так как возможна более поздняя агглю­тинация, например с эритроцитами группы А₂ (II).

4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может быть положитель­ной или отрицательной

При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невоору­женным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мел­кие зернышки постепенно сливаются в более круп­ные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равно­мерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций двух серий в каплях с сыво­роткой одной и той же группы должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответству­ющей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сы­воротками.

Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

Определение групп крови моноклональными антителами

Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые по­лучают с помощью гибридомной, биотехнологии.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует спе­цифические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, ха­рактерна для опухолевой клетки и присущей лим­фоциту способностью синтезировать антитела.

Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, при­меняемые для определения агглютиногенов эритроци­тов. Цоликлоны представляют собой лиофилизирован-ный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.

Техника проведения.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соот­ветствующими надписями: анти-А или анти-В. Ря­дом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После переме­шивания компонентов наблюдают за реакцией агг­лютинации в течение 2-3 минут. Оценка результа­тов очень проста.

Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выде­лить три основные группы ошибок: ошибки, свя­занные с низким качеством реагентов; техничес­кие ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови с помощью моноклональных антител (цоликлоны анти-А и анти-В) исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыво­ротке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной темпера­туре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эрит­роциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подоб­ное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.

Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности про­водить при температуре 37° С, они исчезают.

Нужно строго помнить, что во всех случаях не­четкого или сомнительногскрезультата следует про­вести повторное определение групп крови при по­мощи стандартных сывороток других серий, а так­же перекрестным способом.

ПОНЯТИЕ О РЕЗУС-ФАКТОРЕ

В 1940 г. в эритроцитах человека был обнаружен еще один антиген (агглютиноген), который назвали резус-фактором. Установлено, что резус-фактор при­сутствует у 85% людей, т. е. они являются резус-поло­жительными (КЬ+), остальные 15% являются резус-отрицательными (Кп-). В отличие от групповых свойств агглютиногенов А и В, по отношению к резус-фактору (резус-антигену) в норме в крови не имеется антирезус-агглютинов (готовых антител). Такие антитела появляются в сыворотке крови лишь в результате иммунизации человека с резус-отрицательной кровью резус-положительными эритроцитами. Такая иммуни­зация наступает в результате повторных переливаний резус-положительной крови резус-отрицательному ре­ципиенту или при беременности женщины с резус-от­рицательной кровью резус-положительным плодом. Люди, иммунизированные подобным образом, стано­вятся сенсибилизированными к повторным перелива­ниям резус-положительной крови. При этом проис­ходят тяжелые посттрансфузионные реакции вплоть до летального исхода. Поэтому нужно твердо помнить, что реципиенту с резус-отрицательной кровью можно переливать только резус-отрицательную кровь.

СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА

Методы определения резус-фактора делятся на при­меняемые в клинике, не требующие специального ла­бораторного оснащения, и лабораторные способы.

Существует два способа определения резус-фак­тора в клинике (так называемые экспресс-методы):

- экспресс-метод со стандартным универсаль­ным реагентом в пробирке без подогрева;

экспресс-метод на плоскости без подогрева.

Для первого способа может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца или из вены непосредственно перед исследованием, кон­сервированная кровь без предварительной обработ­ки, а также эритроциты из пробирки после форми­рования сгустка и отстаивания сыворотки. •