3. Лабораторно-практические работы:

3.1. Извлечение гликогена из мышечной ткани и изучение его свойств.

- Извлечение гликогена:

5-10 г. мышцы разрезать на кусочки, поместить в колбу и залить 20мл слабого раствора ТХУ, кипятить 5 мин.Белки при этом свёртываются. Ферменты разрушаются. Кусочки мышцы с жидкостью выливают из колбы, тщательно растирают в ступке и после охлаждении фильтруют. Полученный раствор гликогена используют для реакций.

- Гидролиз гликогена: К 10 каплям раствора гликогена прилить 5 капель 10% НСl и поставить в кипящую водяную баню на 10 мин. После гидролиза нейтрализовать по лакмусу 10% NaOH и проделать реакцию Фелинга .

- Осаждение уксуснокислым свинцом: В пробирку налить 10 капель раствора гликогена, прибавить 10 капель уксуснокислого свинца.

- Цветная реакция на гликоген с йодом:

К10 каплям раствора гликогена, добавить 10 капель основного уксуснокислого свинца.

Практическое занятие №3. Задание к занятию №3.

Тема: Обмен и функции углеводов.

Учебные и воспитательные цели:

Общая цель занятия:

- научить использовать знания о метаболизме глюкозы в практической деятельности врача.

Частные цели занятия:

- иметь представление о методах определения глюкозы в крови;

- уметь определять уровень глюкозы в крови с помощью глюкометра One Touch ultra.

1. Входной контроль знаний:

1.1. Тесты.

1.2. Устный опрос.

2. Основные вопросы темы:

2.1. Аэробный распад – основной путь катаболизма глюкозы у человека. Физиологическое значение. Авитаминоз В_1.

2.2. Анаэробный распад глюкозы. Биологическая роль. Эффект Пастера.

2.3. Глюконеогенез и его значение.

2.4. Взаимосвязь гликолиза в мышцах и глюконеогенеза в печени (цикл Кори).

2.5. Методы определения глюкозы в крови, диагностическое значение.

3. Лабораторно-практические работы:

3.1. Ознакомление студентов с работой глюкометра « One Touch» ultra.

3.2. Определение глюкозы в крови с помощью глюкометра One Touch ultra.

4. Выходной контроль

4.1. Ситуационные задачи.

5. Литература:

5.1. Материал лекций.

5.2. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: «Высшая школа», 1989г., с. 237-246.

5.3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 1990г., с. 244-250, 255-259,

259-267

5.4. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 2004г., с. 327-334, 338-353,

359-362.

0. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к занятиям по биологической химии М., 1983, раб. 47, 48.

2. Основные вопросы темы

2.1. Аэробный распад – основной путь катаболизма глюкозы у человека. Физиологическое значение.

АЭРОБНЫЙ ГЛИКОЛИЗ – процесс окисления глюкозы до СО₂ и Н₂О, протекающий в присутствии кислорода. Все ферменты, катализирующие реакции находятся в цитозоле клетки.

Выделяют 2 этапа:

1. Подготовительный – глюкоза фосфорилируется и расщепляется на 2 молекулы фосфотриоз. Используются 2 молекулы АТФ.

2. Этап, сопряженный с синтезом АТФ. Фосфотриозы превращяются в ПВК, которая далее окисляется до СО₂ и Н₂О ( ЦТК). Таким образом, выход АТФ – 38 молекул.

Основное физиологическое значение – использование энергии, которая освобождается в этом процессе для синтеза АТФ. Метаболиты гликолиза используются для синтеза новых соединений (фр-6-фосфат и глицеральдегид-3-фосфат участвуют в образовании рибозо-5-фосфата – структурного компонента нуклеозидов; 3-фосфоглицерат включается в синтез аминокислот: серин, глицин, цистеин). Являются субстратами для НАД-зависимых дегидрогеназ дых. цепи (глицеральдегид -3-фосфат, пируват, изоцитрат, α-кетоглутарат, малат). В печени и жировой ткани ацетил-КоА, образующийся из ПВК, используется как субстрат при биосинтезе жирных кислот, холестерина.

В₁ недостаточность – известно что это водорастворимый витамин – тиамин – антиневритный, входит в состав как минимум 3 ферментов. Например, в виде ТДФ участвует в пируватдегидрогеназном комплексе (окисление ПВК до ацетил КоА). При его отсутствии из ацетил-КоА, в частности не образуется ацетилхолин, вследствии чего, возникают полиневриты, в основе которых лежат дегенеративные изменения нервов, затем паралич (Бери-бери), нарушения со стороны сердечно-сосудистой деятельности – нарушения ритма сердца, увеличения его размеров, боли, со стороны ЖКТ – снижение кислотности, потеря аппетита, атония кишечника.

2.2. Анаэробный распад глюкозы, авитаминоз В₁. Биологическая роль. Эффект Пастера.

АНАЭРОБНЫЙ ГЛИКОЛИЗ – процесс расщепления глюкозы с образованием конечного продукта лактата. Он протекает без использования кислорода и поэтому не зависит от работы митохондриальной дыхательной цепи. АТФ образуется за счет субстратного фосфорилирования (2 АТФ). Протекает в мышцах, в первые минуты мышечной работы, в эритроцитах (в которых отсутствуют митохондрии), а также в разных органах в условиях ограниченного снабжения их кислородом, в том числе в опухолевых клетках. Этот процесс служит показателем повышенной скорости деления клеток при недостаточной обеспеченности их системой кровеносных сосудов.

Сходство анаэробного и аэробного гликолиза заключается в том, что до стадии образования ПВК эти процессы протекают одинаково при участии тех же ферментов.

СН₃ ЛДГ СН₃

Г люкоза С=О 2 Н-С-ОН

СООН СООН

ПВК 2 НАДН₂ 2НАД лактат

Энергетический баланс анаэробного окисления глюкозы: образование 2 АТФ.

Основное физиологическое значение – использование энергии, которая освобождается в этом процессе для синтеза АТФ. Метаболиты гликолиза используются для синтеза новых соединений (фр-6-фосфат и глицеральдегид-3-фосфат участвуют в образовании рибозо-5-фосфата – структурного компонента нуклеозидов; 3-фосфоглицерат включается в синтез аминокислот: серин, глицин, цистеин).

ЭФФЕКТ ПАСТЕРА. Заключается в угнетении дыханием (О₂) анаэробного гликолиза, т.е. происходит переключение с аэробного гликолиза на анаэробное окисление. Если ткани снабжены О₂, то 2НАДН₂, образовавшийся в процессе центральной реакции оксидоредукции, окислится в дыхательной цепи, поэтому ПВК не превращается в лактат, а в ацетил-КоА, который вовлекается в ЦТК.

2.3. Глюконеогенез и его значение.

Это процесс синтеза глюкозы из веществ неуглеводной природы. Процесс протекает в печени и менее интенсивно в корковом веществе почек, а также в слизистой кишечника. Эти ткани могут обеспечивать синтез 80-100 г глюкозы в сутки.

Первичные субстраты – лактат, аминокислоты, глицерол. Их включение в глюконеогенез зависит от физиологического состояния организма:

лактат – постоянно;

глицерол – высвобождается при гидролизе жиров в период голодания или при длительной физической нагрузке;

аминокислоты – образуются в результате распада мышечных белков и включаются в глюконеогенез при длительном голодании или продолжительной мышечной работе.

Если гликолиз протекает в цитозоле, а часть реакций глюконеогенеза происходит в митохондриях. Процесс идет обратно анаэробному гликолизу за исключением 3-х необратимых реакций:

1. Пируваткиназная – образование фосфоенолпирувата из ПВК происходит в ходе 2-х реакций, первая из кот. протекает в митохондриях. ПВК транспортируется в матрикс митохондрий и там карбоксилируется с образованием оксалацетата (ЩУК). Фермент-пируваткарбоксилаза, коферментом которым является биотин. Реакция протекает с использование АТФ. Затем оксалацетат (в цитозоле) превращается в фосфоенолпируват входе реакции, катализируемой фосфоенолпируваткарбоксилазой – ГТФ-зависимым ферментом ( -СО₂, ГТФ → ГДФ).

2. Фосфофруктокиназная: ФР-1,6-дифосфат →Фр-6-фосфат под действием фермента фруктозо-1,6-бифосфатаза.

3. Гексокиназная: Гл-6-фосфат→ Глюкоза под действием фермента Гл-6-фосфатазы.

ЗНАЧЕНИЕ – поддержание уровня глюкозы в крови в период длительного голодания и интенсивных физических нагрузок.

РЕГУЛЯЦИЯ: инсулин – тормозит синтез ферментов; глюкокортикоиды – индуцируют синтез ферментов; СТГ – повышает активность ферментов глюконеогенеза.

2.4. Взаимосвязь гликолиза в мышцах и глюконеогенеза в печени (цикл Кори).

ЦИКЛ КОРИ.

(взаимосвязь гликолиза в мышцах и глюконеогенеза в печени).

Схема:

ЗНАЧЕНИЕ:

1. Регуляция постоянного уровня глюкозы в крови.

2. Обеспечивает утилизацию лактата.

3. Предотвращает накопление лактата (снижение рН - лактоацидоз).

4. Экономичное использование углеводов организмом.

5. Регуляция обмена углеводов осуществляется на уровне тканей – кровь, печень, мышцы.

2.5. Методы определения глюкозы в крови, диагностическое значение.

Существует огромное число методов исследования.

- Редуктометрические – основаны на свойствах сахаров восстанавливать соли тяжелых металлов в щелочной

среде (титрометрический).

- Колориметрические – основаны на определение интенсивности окраски соединений, образующихся при

взаимодействии глюкозы с определенными веществами (ортотолуидиновый).

- Самым современным является энзимотический – основанный на действии фермента глюкооксидазы,

окисляющий глюкозу до глюконовой кислоты. Данный метод лежит в основе определения уровня

глюкозы прибором «One Touch».

НАДФН + Н⁺

3. Лабораторно-практические работы:

3.1. Ознакомление студентов с работой глюкометра « One Touch» ultra.

3.2. Определение уровня глюкозы в крови у студентов с помощью глюкометра « One Touch» ultra.