2.2. Дополнительная литература

2.2.1. Ленинджер А. Основы биохимии. – М.: Мир, 1974, 1976. – С. 44 – 61. Он же. Там же. 1985. Т. 1. С. 79 – 106.

2.2.2. Калинин Ф. Л. Основы молекулярной биологии. – Киев.: Вища школа, 1978. – С. 42-59.

2.2.3. Хочачка П., Сомеро. С. Биохимическая адаптация. – М.: Мир, 1988. – С. 206-390.

2.2.4. Досон Р. и др. Справочник биохимика. – М.: Мир, 1991. – 544 с.

2.2.5. Эккерт Р. и др. Физиология животных. – М.: Мир, 1991. – Т. 1. – Физические и химические концепции. – С. 19 – 48.

2.2.6. Горн М. М. и др. Водно-электролитный и кислотно-основной баланс. – М-СПб.: 2000. – 320 с.

2.2.7. Белянова Л. П. Лауреаты Нобелевской премии 2003 года по химии. «Природа» 2004. № 1. – С. 3-12.

2.2.8. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике 2-е изд. перераб. и доп. МЕДПРЕСС-ИНФОРМ, 2004. – 920 с.

2.2.9. Будников Г. К., Медянцева Э. П. От электрода к электрорецептору // Химия и жизнь, 1991. – №7. – С 20 – 23.

2.3. Экспериментальная часть

2.3.1. Приготовление ацетатных буферных растворов

Договорившись между собой, каждая рабочая пара студентов готовит один из буферных растворов, приведенных в таблице 2.4.

Таблица 2.4

Соотношения объемов и величин рН ацетатных буферных смесей

С помощью мерных цилиндров и пипеток, по возможности точно отмеривают указанные объемы растворов 0,1 н. уксусной кислоты и ацетата натрия, смешивая их в конической колбе на 50 мл. Перемешав полученную смесь, получают буферный раствор с теоретически известной величиной рН. Затем, рН полученных смесей измеряют нижеуказанными способами, занося полученные результаты в каждый протокол опыта.

2.3.2. Измерения рН с помощью индикаторов

Известно, что величины рН водных растворов можно оценить быстро, но приблизительно, с точностью до 0,5 единицы, с помощью растворов таких органических молекул, как лакмус, фенолфталеин, метилоранж и др. Этот способ основан на контрасте окрасок иона и молекулы индикатора, что, к сожалению, делает его неприменимым при работах с мутными и окрашенными жидкостями. Более практичны, особенно для работ в узких диапазонах рН – полоски фильтровальной бумаги, заранее пропитанные тем или иным раствором индикатора.

Известно, что смеси растворов разных индикаторов, точки и зоны переходов которых перекрывают большую часть шкалы рН, называют универсальным индикатором. Для практических целей, особенно при работах в поле = вне лабораторий, такими смесями заранее пропитывают полоски бумаги, а на упаковке набора - обычно размещают шкалу рН. Исследуя рН раствора с помощью индикаторных полос, во избежание его загрязнения ЗАПРЕЩА-ЕТСЯ опускать их в раствор. Гораздо практичней, смочить в растворе чистую стеклянную или пластиковую палочку, носик или наконечник пипетки и, даже спичку или соломинку, после чего, влажным инструментом коснуться полоски. В таких случаях, раствор останется относительно чистым, а с помощью одной полоски - удастся провести несколько измерений.

2.3.3. Электрометрические измерения

Они основаны на законе Нернста, рассмотренном в курсе аналитической химии. Поэтому ограничимся напоминанием, что, все подобные приборы, фактически включают 2 устройства: измерительную систему электродов и электронный усилитель потенциалов, входящий в аналитическую часть прибора. Именно на этом принципе основаны выпускаемые промышленностью рН-метры, кондуктометры и многочисленные модели электронных счетчиков частиц и клеток. В практике физиологических и клинических лабораторий, последние называют счетчиками форменных элементов крови или гематологическими анализаторами. Как правило, в такую систему входит насос, создающий ток жидкости через калиброванный капилляр, с впаянными в его стенки электродами. Любая частица, прошедшая между ними, повышает электрическое сопротивление цепи, что и отмечает электронный счетчик, обычно оснащенный дискриминатором, той или иной степени сложности.

Надежность работы рН-метра, до начала занятия проверяет лаборант. Перед измерением рН раствора, один из студентов рабочей группы аккуратно приподнимает на штативе кронштейн с электродами, а другой рукой – убирает стакан с дистиллятом со столика магнитной мешалки. Осушив электроды фильтровальной бумагой, поставить на столик стакан с исследуемым раствором, а затем, избегая касаний электродной системой стенок стакана, аккуратно погрузить концы электродов в изучаемую жидкость.

Измерения величины рН. На передней панели рН-метра последовательно нажать клавиши «анионы/катионы», «1 – 19» и «рХ». Через 1 мин, снять показания по нижней шкале рН-метра. Нажать клавишу диапазона, в пределах которого лежит найденная величина рН и, по верхней шкале прибора, еще раз снять его точные показания. Занести полученный результат в протокол опыта.

По окончании измерений, последовательно отжать клавиши диапазона рН, «рХ» и «анионы/катионы». Приподнять кронштейн с электродами на штативе и другой рукой – убрать со столика магнитной мешалки стакан с раствором. Тщательно обмыть дистиллятом из промывалки поверхности электродов и, осушив их фильтровальной бумагой, аккуратно погрузить в стакан с дистиллятом. Слить из измерительного стакана в коническую колбу ацетатный буферный раствор с экспериментально установленным значением рН. Соблюдая оптимальный масштаб, построить график полученной зависимости значений рН (по оси абсцисс) от количества мл раствора ацетата натрия (по оси ординат). Сделать выводы.

2.3.4. Влияния разбавлений на рН буферного раствора

С помощью пипетки отмерить 10 мл исходного ацетатного буфера и поместить их в мерную колбу на 50 мл. Довести объем раствора в колбе дистиллятом до метки. В соответствии с п. 2.3.3, измерить рН полученного раствора, занести результаты в протокол и сделать выводы.

2.3.5. Влияние кислот и щелочей на рН буферного раствора

Пронумеровать 5 химических пробирок. В 3 первых из них, внести по 10 мл исходного буфера и еще в 2 – по 10 мл воды. Добавить в пробирки 1 и 4 по 1 мл 0,1 н раствора соляной кислоты = НCl. Соответственно, в пробирки 2 и 5 – внести по 1 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия = NaOH, а в пробирку 3 – 1 мл воды для контроля. Перемешать содержимое пробирок. С помощью универсального индикатора измерить рН полученных растворов и занести результаты в протокол. Сделать выводы.