Рекомендації по виконанню практичної роботи
Досліджуваний матеріал від хворого на шигельоз, правила його взяття та посіву
Завдання 2.1. Засвойте перелік матеріалу від хворого на шигельоз, правила взяття досліджуваного матеріалу для бактеріологічного дослідження та особливості посіву досліджуваного матеріалу.
Основним матеріалом для бактеріологічного дослідження при маніфестній та субклінічній формах шигельозу є фекалії. Досліджують також харчові продукти: молоко, сир, сметану, питну воду (при спалахах шигельозу) та патологоанатомічний матеріал (шматочки товстої кишки, паренхіматозних органів, мезентеральні лімфатичні вузли). При підозрі на бактеріємію необхідно дослідити кров та сечу.
Для отримання позитивного результату бактеріологічного дослідження при взятті та посіві досліджуваного матеріалу необхідно дотримуватись певних правил:
1/ бактеріологічне дослідження матеріалу почати до застосування етіотропного лікування;
2/ посуд для взяття матеріалу ошпарити окропом, не застосовуючи дезінфікуючі розчини, до яких шигели дуже чутливі;
3/ досліджуваний матеріал необхідно терміново (навіть біля ліжка хворого) посіяти одночасно у збагачувальне та на диференціально-діагностичні середовища і негайно доставити до бактеріологічної лабораторії;
4/ при неможливості посіву випорожнень у лікарні та їх швидкої доставки до бактеріологічної лабораторії випорожнення необхідно зберігати у консерванті (30% гліцерину + 70% фосфатного буферу) при t=4-6°С не більше доби;
5/ патологоанатомічний матеріал дослідити якомога швидше після смерті хворого.
Фекалії (1-2г) медична сестра повинна взяти скляною паличкою з судна або пелюшок, відбираючи грудочки слизу та гною (але не кров). Випорожнення можна взяти й з прямої кишки за допомогою стерильної петлі, не чекаючи акту дефекації. Якщо у випорожненнях хворого присутні слизово-гнійні грудочки – їх необхідно першочергово відібрати для бактеріологічного дослідження, промити у фізіологічному розчині та посіяти на живильне середовище, втираючи скляним шпателем. При відсутності слизово-гнійних грудочок фекалії необхідно проемульгувати у фізрозчині (1:10). У збагачувальне середовище сіють неемульговані випорожнення у співвідношенні 1:5.
Бактеріологічний метод діагностики шигельозу
Ситуаційна задача. У інфекційну лікарню госпіталізували 7-річного хлопчика з клінічними ознаками гострого шигельозу. Пацієнт скаржився на біль внизу живота, напади блювоти, сильний пронос, тенезми. Випорожнення у хворого були знебарвлені, з грудочками слизу та домішками крові. Пацієнт отримував лікування вже упродовж 6 діб. Який матеріал від пацієнта лікар направив на мікробіологічне дослідження і як з‘ясувати вид збудника? Проведіть бактеріологічне та серологічне дослідження матеріалу. Дайте відповідь лікарю щодо збудника захворювання.
Завдання 2.2. Засвойте бактеріологічний метод діагностики шигельозу, використавши для цього демонстрації до практичного заняття (вирішіть ситуаційну задачу, зробіть аналіз демонстрацій, дайте відповіді на питання, результати вивчення демонстрацій занесіть до Протоколу дослідження №1).
Вимоги
|
Ілюстрація демонстрацій |
Вказівки |
2.2..1. Охарактеризуйте культуральні властивості збудника шигельозу на середовищі Плоскирєва
Дайте відповіді на питання.
|
|
Вивчаючи демонстрацію, зробить облік первинного посіву досліджуваного матеріалу (фекалій) на середовищі Плоскирєва. Відповідаючи на питання, з наведених ознак: невеликі, середніх розмірів, круглі, опуклі з рівними краями, плискуваті, напівпрозорі, безбарвні колонії з блискучою поверхнею, колонії червоного кольору виберіть ознаки, які характеризують колонії різних видів шигел).
1/. На які живильні середовища бактеріолог посіє випорожнення хворого на шигельоз? 2/. Охарактеризуйте культуральні властивості S. dysenteriae на середовищі Плоскирєва. 3/. Чи відрізняються за культуральними властивостями різні види шигел? Відповідь аргументуйте.
|
2.2.2. Опрацюйте мікропрепарати "Shigella flexneri 2a", "Shigella sonnei" та "Escherichia coli О55:К59:Н1"
|
|
Працюючи з демонстрацією, охарактеризуйте морфологічні, тинкторіальні властивості S. flexneri 2a та S. sonnei. Порівняйте морфологічні та тинкторіальні властивості шигел та E. coli серовару О55:К59:Н. З‘ясуйте мету мікроскопії мікроорганізмів при бактеріологічному дослідженні матеріалу від хворого на шигельоз та доцільність початкової бактеріоскопії випорожнень хворого.
|
2.2.3. Вивчіть антигенну структура збудника шигельозу.
Порівняйте отриманий результат РА з демонстрацією. Обґрунтуйте важливість вивчення антигенної структури бактерії. Доведіть необхідність наступних етапів серотипування культури. Намітьте план наступних досліджень та з‘ясуйте мету цих досліджень.
|
|
Поставте орієнтовну слайд-аглютинацію культури з лактозонегативної колонії на середовищі Éндо з шительозною полівалентною аглютинуючою сироваткою. З колонії бактеріологічною петлею візьміть невелику кількість матеріалу. Частину колонії залиште для пересіву.
При позитивній РА спостерігайте утворення зернистого аглютинату.
|
Запам‘ятайте!
збудники сальмонельозу та черевного тифу.
|
||
2.2.4. Вивчіть особливості культивування Shigella sonnei на середовищі Олькеницького у порівнянні з контролем.
Дайте відповіді на питання.
|
|
Працюючи з демонстрацією, охарактеризуйте біохімічні властивості S. sonnei на середовищі Олькеницького. При характеристиці біохімічних особливостей збудника керуйтесь знаннями про те, що S. sonnei (через 24 години) ферментує тільки глюкозу до кислоти без утворення газу (стовпчик середовища Олькеницького змінив колір, а забарвлення скошеної частини середовища залишилось без змін у порівнянні з контролем). Сірководень не виділяється (почорніння середовища не спостерігається).
1/. Який сенс вивчення біохімічних властивостей досліджуваної культури на середовищі Олькеницького? 2/. Порівняйте особливості росту S. sonnei та E. coli на середовищі Олькеницького.
|
2.2.5. Вивчіть біохімічні властивість Shigella sonnei на середовищах Хісса та у пептонній воді. Доведіть, що збудником шигельозу є S. sonnei.
Порівняйте біохімічні особливості різних видів шигел при культивуванні їх на середовищах Хісса.
|
|
Ознайомтесь з поясненнями до демонстрації, запам‘ятайте біохімічні особливості S. sonnei. S. sonnei ферментує маніт (пробірка №4 – відбулась зміна кольору середовища), мальтозу (пробірка №3), глюкозу (пробірка №1) до кислоти, повільно ферментує лактозу (пробірка №2) та сахарозу (пробірка №6) до кислоти, не ферментує дульцит (пробірка №5).
Перевірте свої знання з даними, наведеними у таблиці на с.
|
Серологічний метод діагностики шигельозу
Завдання 3. Засвойте серологічний метод діагностики шигельозу, використавши для цього РНГА з шигельозним еритроцитарним діагностикумом Флекснера для серодіагностики шигельозу (метод парних сироваток), проаналізуйте зростання титру антитіл у 4 рази, зробіть висновок, отриманий результат занесіть до Протоколу досліджень № 1.
Для підвищення ефективності серологічної діагностики шигельозу кров у хворого беруть двічі (метод парних сироваток) з інтервалом часу і РНГА ставлять з кожною з них (реакцію бактеріолог ставить за загальною методикою). Діагностичне значення має результат зростання титру антитіл у другій порції сироватки, порівняно з першою, у 4 і більше разів.
ПРОТОКОЛ ДОСЛІДЖЕННЯ №1
Мета …….