Информационно-дидактический блок

Как правило, определение подлинности антибиотиков регламентируется соответствующими фармакопейными статьями. Качественный анализ осуществляется химическими, физическими и биологическими методами.

Химические методы. Существуют неспецифические реагенты, дающие цветные реакции с определенными антибиотиками, к примеру ванилин в соляной кислоте (реакция на эритромицин), биуретовая реакция (на грамицидин), окситетрациклин при добавлении концентрированной Н₂SO₄ дает пурпурное окрашивание. Левомицетин^♠ дает желтое, переходящее в красно-оранжевое окрашивание при нагревании с NaOH. Стрептомицин при нагревании с раствором NaOH и добавлением железоаммонийных квасцов в Н₂SO₄ приобретает фиолетовое окрашивание.

Есть также специфические групповые реагенты, образующие окрашенные соединения с определенными функциональными группами антибиотиков. Так, нингидрин дает желтое окрашивание с аминогруппой антибиотиков аминоглюкозидной группы, таких, как неомицин, канамицин, гентамицин. Карбоксильную группу в антибиотиках можно обнаружить с помощью индикаторов (например, фузидовая кислота и микофеноловая кислота дают желтое окрашивание с бромфенолом). С помощью таких специфических групповых реагентов можно обнаружить антибиотик также и после хроматографирования его на бумаге или тонком слое силикагеля. Полученные окрашенные зоны укажут на наличие определенной функциональной группы в антибиотике. Однако обнаружение антибиотиков на хроматограммах, как правило, проводят с помощью неспецифических реакций (пары йода, концентрированная Н₂SO₄), которые проявляют антибиотик по окрашенным зонам, независимо от структуры вещества. Можно просто выдержать хроматограмму над пламенем горелки и получить коричневые пятна на месте нахождения антибиотиков.

Для обнаружения антибиотиков на хроматограммах очень удобными являются физические методы. Их преимущество заключается в том, что для них требуется малое количество веществ, которые при этом не разрушаются. В качестве примера применения таких методов можно привести визуальный метод обнаружения окрашенных антибиотиков (в частности, антрациклины: рубомицин^♠ - красного цвета, адриамицин^♠ - желтого цвета); тетрациклины обнаруживают на ТСХ по флюоресценции. Антибиотики имеющие спектр поглощения в ультрафиолетовой (УФ) (200-350 нм) или видимой (350-700 нм) области спектра, можно обнаружить после хроматографии на пластинках силикагеля с добавлением флоуоресцентных индикаторов. После хроматографирования на пластинках «Силуфол» (УФ-254) антибиотики обнаруживают в лучах УФ-лампы в виде темных пятен на зеленом флуоресцирующем фоне.

Также антибиотики можно обнаружить на хроматограмме с помощью метода биоавтографии (биологический метод), который заключается в том, что после проведения хроматографического разделения веществ (ТСХ) и удаления паров растворителя пластинку накладывают на газон с тест-микроорганизмом, выдерживают 20-30 мин для диффузии веществ в агар и удаляют пластинку. После инкубации в термостате на месте антибиотиков образуются зоны отсутствия роста тест-микроорганизма. Преимущества метода биоавтографии в его высокой специфичности, а также малой затрате исследуемого вещества. Однако для проведения данного метода требуется длительное время.