Совместная работа студента с преподавателем

Самостоятельная работа студентами выполняется под непосредственным контролем преподавателя. После выполнения задания студенты должны представить тетради на проверку преподавателю.

Контрольные вопросы

1. Какие методы отделения антибиотика от культуральной жидкости в соответствии с его свойствами вы знаете?;

2. Как проводится экстракция антибиотиков из концентрата?

3. Какие растворители и смеси используются в качестве экстрагента? Какие значения рН являются оптимальными при экстракции?

4. Как проводится сорбция антибиотика на активированном угле?

5. Как осуществляется осаждение антибиотика из культуральной жидкости?

6. Как проводится хроматографическое разделение и обнаружение антибиотиков?

7. Укажите, что может содержать культуральная среда (жидкость) помимо целевого продукта?

Рекомендуемая литература:

1. Егорова Т.А., Клунова С.М., Живухина Е.А. Основы биотехнологии. – М.: Изд. центр «Академия», - 2008. – 208 с.

2. Евтушенков А.Н., Фомичев Ю.К. Введение в биотехнологию: Курс лекций. – Минск.: БГУ, 2002. - 105 с.

3. Сазыкин Ю.О., Орехов С.Н., Чакалева И.И. Биотехнология: Учебное пособие. – М.: Изд. Центр «Академия». – 2006. – 256 с.

4. Орехов С.Н. Фармацевтическая биотехнология. Руководство к практическим занятиям. – Учебное пособие. – Под ред. акад. РАМН В.А. Быкова, проф. А.В Катлинского. – М. : ГЭОТАР-Медиа 2009. – 384 с.

5. Елинов Н.П. Химическая микробиология. - Учебник. - М.: Высшая школа. - 1989, 448 с

6. Воробьева Л.И. Промышленная микробиология. - Учебное пособие. - М.: Изд-во МГУ. - 1989, 294 с.

7. Биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. / Под ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Дж. Джонса. - М.: Мир. - 1988, 480 с.

8. Чуешов В.И., Зайцев А.И., Шебанова С.Г. Промышленная технология лекарств. Том 2. Харьков, 2002.

9. Биотехнология микробного синтеза (Под ред. Бекера М.Е.) – Рига – 1980.

10. Биотехнология. /Отв. редактор А.А. Баев. - М.: Наука. - 1984, 310 с.

11. Никитин Г.А. – Биохимические основы микробиологических производств – Киев, 1981.

12. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов. М., - 1979 г.

13. Попова Т.В. – Развитие биотехнологии в СССР – М., Наука - 1988 г.

14. Промышленная микробиология (Под ред. Егорова Н.С.) – М., 1989 г.

15. Популяционные аспекты биотехнологии – Печуркин Н.С., Брильков А.В., Маркенкова Т.В. – Новосибирск: - Наука – 1990 г.

16. Процессы и аппараты химической технологии (Под ред. П.Г. Романкова). – Л. – 1981.

17. Специальные журналы: «Биотехнология», «Фармация Казахстана», «Фармация», «Фармацевтический бюллетень», и др.

Лабораторная работа № 6.

«Определение подлинности антибиотиков и их количественный анализ»

Занятие № 11

Тема занятия: Качественное определение антибиотиков омомицина и галтамицина в экстрактах культуральной жидкости с помощью ТСХ на пластинках «Силуфол»

Цель: выработать практическое умение обоснованно выбирать и практически применять определенный метод анализа антибиотиков на примере омомицина и галтамицина.

Задачи обучения:

• Знать методы определения подлинности антибиотиков;

• Выбирать метод определения антибиотика в культуральной жидкости в соответствии с его свойствами;

• Проводить хроматографическое разделение и обнаружение антибиотиков;

• Делать точную навеску на аналитических весах:

• Проводить кислотно-основное титрование:

• Рассчитывать количественное содержание антибиотика в культуральной жидкости.

Задание № 1. Провести хроматографическое разделение экстракта культуральной жидкости на пластинке силуфола (УФ-254) в системе растворителей «петролейный эфир-ацетон» (2:1);

Материальное обеспечение работы

• Петролейный эфир;

• Ацетон

• Пластинки «Силуфол», УФ-254.

• Камеры хроматографические;

• Микропипетки:

• Пинцеты;

• Фен:

• Газовая горелка;

• УФ-лампа;

• Цилиндры 5 и 10 мл.

Методика выполнения работы. Определение основано на сорбции ЛС на силикагеле в соответствии с коэффициентами распределения в двухфазной системе растворителей.

Хроматографическое разделение экстракта культуральной жидкости проводят на пластинке силикагеля «Силуфол» (УФ-254) в системе растворителей: петролейный эфир-ацетон (2:1). На стартовую черту пластинки нужно нанести микропипеткой каплю этилацетатного экстракта. Высушить струей воздуха и прогнать каплю пластинку в указанной выше системе растворителей. Пластинку высушить и отдуть растворители до исчезновения запаха.

Визуально обнаруживается менее подвижное пятно красного цвета (антибиотик антрациклиновой группы галтамицин).

Омомицин (бесцветный) визуально не обнаруживается. Его можно визуализировать в свете УФ-лампы по поглощению в виде фиолетового пятна на зеленом фоне или при прогревании над пламенем горелки (сгорают все органическое соединения, и омомицин обнаруживается в виде коричневых зон).