Совместная работа студента с преподавателем

Самостоятельная работа студентами выполняется под непосредственным контролем преподавателя. После выполнения задания студенты должны представить тетради на проверку преподавателю.

Контрольные вопросы

• Почему практическое применение генотипических методов для оценки антибиотикочувствительности в настоящее время ограничено?

• В чем выражается антибактериальная активность?

• Что является главным показателем антибиотикочувствительности независимо от метода определения?

• В чем заключается принцип метода серийных разведений?

• Почему в некоторых случаях содержания антибиотика необходимо контролировать одновременно как стандартными, так и специальными методами?

Рекомендуемая литература:

1. Егорова Т.А., Клунова С.М., Живухина Е.А. Основы биотехнологии. – М.: Изд. центр «Академия», - 2008. – 208 с.

2. Евтушенков А.Н., Фомичев Ю.К. Введение в биотехнологию: Курс лекций. – Минск.: БГУ, 2002. - 105 с.

3. Сазыкин Ю.О., Орехов С.Н., Чакалева И.И. Биотехнология: Учебное пособие. – М.: Изд. Центр «Академия». – 2006. – 256 с.

4. Орехов С.Н. Фармацевтическая биотехнология. Руководство к практическим занятиям. – Учебное пособие. – Под ред. акад. РАМН В.А. Быкова, проф. А.В Катлинского. – М. : ГЭОТАР-Медиа 2009. – 384 с.

5. Елинов Н.П. Химическая микробиология. - Учебник. - М.: Высшая школа. - 1989, 448 с

6. Воробьева Л.И. Промышленная микробиология. - Учебное пособие. - М.: Изд-во МГУ. - 1989, 294 с.

7. Биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. / Под ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Дж. Джонса. - М.: Мир. - 1988, 480 с.

8. Чуешов В.И., Зайцев А.И., Шебанова С.Г. Промышленная технология лекарств. Том 2. Харьков, 2002.

9. Биотехнология микробного синтеза (Под ред. Бекера М.Е.) – Рига – 1980.

10. Биотехнология. /Отв. редактор А.А. Баев. - М.: Наука. - 1984, 310 с.

11. Никитин Г.А. – Биохимические основы микробиологических производств – Киев, 1981.

12. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов. М., - 1979 г.

13. Попова Т.В. – Развитие биотехнологии в СССР – М., Наука - 1988 г.

14. Промышленная микробиология (Под ред. Егорова Н.С.) – М., 1989 г.

15. Процессы и аппараты химической технологии (Под ред. П.Г. Романкова). – Л. – 1981.

16. Специальные журналы: «Биотехнология», «Фармация Казахстана», «Фармация», «Фармацевтический бюллетень», и др.

Лабораторная работа № 5.

«Выделение антибиотиков из культуральной жидкости, определение подлинности антибиотиков и их количественный анализ»

Занятие № 9-10

Тема занятия: Первичное выделение антибиотиков из культуральной жидкости и их очистка.

Цель: Освоить технику отделения нерастворимых веществ различными способами и освоить методы выделения антибиотиков из культуральной жидкости

Задачи обучения:

• Знать принципиальную технологическую схему получения целевых продуктов биотехнологическим способом.

• Знать основные операции и манипуляции для отделения нерастворимых веществ из культуральной жидкости (фильтрование, центрифугирование, седиментация, отстаивание).

• Знать основные группы ценных веществ, накапливаемые в культуральной жидкости.

• Знать основные группы ценных веществ, накапливаемых внутриклеточно.

• Знать методы (экстракция, сорбция, осаждение) и способы выделения целевых продуктов из концентрата культуральной жидкости.

• Знать основные методы и способы первичной и окончательной очистки антибиотиков.

ЗАДАНИЕ 1 (занятие № 9). Отделить нерастворимую фазу от культуральной жидкости (из заранее подготовленных суспензий актиномицетов) и получить хлороформный экстракт антибиотиков.

Методика выполнения работы. Многие антибиотики хорошо растворяются в органических растворителях. Их извлекают из нативного водного раствора экстракцией органическим растворителем, не смешивающимся с водой (хлороформ, этилацетат, бутан), с использованием делительных воронок. В частности, пенициллин (при кислом значении рН) экстрагируют из подкисленного нативного раствора в хлороформ в соотношении сначала 1:2, затем 1:3 и 1:5. Отделенные на делительной воронке хлороформные слои объединяют, затем антибиотики реэкстрагируют из хлороформа в щелочную воду. Применение многостадийной экстракции обеспечивает как концентрирование, так и очистку выделяемых веществ, однако при этом требуются большие объемы органических растворителей.

ЗАДАНИЕ 2 (занятие № 10). Провести очистку антибиотиков методом сорбции

Методика выполнения работы. Антибиотики с выраженными основными свойствами (аминогликозиды, пенициллины)) легко сорбируются на ионообменные смолы (катиониты) и затем вытесняются водным раствором минеральной кислоты. Промыть несколько раз дистиллированной водой стеклянную колонку, заполненную катионитной ионообменной смолой, и пропустить через нее щелочной раствор антибиотиков. Десорбцию антибиотиков провести сначала концентрированной, затем разведенной соляной кислотой. Элюат собрать, охладить в холодильнике и отделить выпавшие кристаллы антибиотика фильтрованием через стеклянную воронку.