Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Л.Д. №1 20.02.12..docx
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.04.2025
Размер:
419.36 Кб
Скачать

3. Реакции преципитации.(2)

Реакцией преципитации (РП), называют осаждение из раствора антигена при воздействии на него иммунной сывороткой, и эритроцитами. С помощью РП можно выявить антиген в разведении 1:100000 и более.

Преципитиногены представляют собой очень мелкие частицы белково-полисахаридной природы, очень термоустойчивые и поэтому их получают кипячением.

Для реакции преципитации используют жидкие прозрачные антигены.

Типы реакции преципитации.

А. Реакция Асколя

В узкую пробирку осторожно наливает 0,5 мл сыворотки, а затем пипеткой осторожно, по стенке наливают 0,5 мл антигена. При положительной реакции через 5-10 минут на границе между двумя средами появляется диагностическое кольцо.

Эту реакцию применяют для диагностики сибирской язвы, туляремии и чумы.

Б. Реакция Оухтерлони.

Реакцию ставят на чашки Петри в луночках агарового геля (хорошо отмытым I % агар). Луночки делают на некотором расстоянии друг от друга. Антигена и сыворотки наливает в луночки отдельно. Реакцию читают через 24 -48 часов. При положительной реакции наблюдается движение антигена и антитела навстречу друг другу, при соединении они образуют комплекс в виде белой полосы. Широко применяют для диагностики болезней, возбудители которых образуют экзотоксин (дифтерия и т.д.).

4. Полимеразная цепная реакция (пцр)

Модулярный метод диагностики.

Сущность метода заключается в многократном копировании фрагментов ДНК (РНК) возбудителя ферменном ДНК-полимеразой. Реакция проходит несколько циклов, в результате которых количество точных копий фрагментов ДНК (РНК) увеличивается, и многократно превышают количество всех остальных продуктов реакции. Реакция очень сложная, идет в 4 этапа, требует специального оборудования и специально подготовленных лаборантов.

Достоинствами метода является высокая чувствительность и специфичность позволяющая определить не только тип возбудителя, но и его подтип (квазивид).

С помощью ПЦР можно диагностировать многие заболевания, и он является наиболее перспективным методом лабораторной диагностики инфекционных болезней.

5. Метод иммуноферментативного анализа (ифа).

Высокочувствительный метод, легко воспроизводим даже в условиях поликлиники, и не требует больших экономических затрат. Принцип метода заключается в использовании конъюгатов (антитело + фермент), который присоединяясь к иммунным комплексам способствует их выявлению. Результаты анализа учитываются визуально и инструментально по оптической плотности окрашенных продуктов реакции.

Метод широко используется для нахождения токсинов вирусного гепатита В, иерсиниозных токсинов и т.д.

Обнаружение возбудителей вирусных инфекций.

Наличие вируса в эмбрионе определяют с помощью 2 реакций:

1. Реакция связывания компонента.

2. Реакция гемагглютинации

Чаще применяется реакция гемагглютинации. В основе реакции лежит адсорбция вируса на поверхности эритроцитов, с дальнейшим их склеиванием. Активную гемагглютинацию вызывают вирусы гриппа, парагриппа и оспы. Иногда применяют реакцию торможения гемагглютинации – противоположную реакцию, тормозящую склеивание эритроцитов.

Наличие вирусов в культуре тканей чаще определяют с помощью трех реакции:

1. Реакция нейтрализации вирусов на культуре клеток.

2. Реакция гемагглютинации (РА).

3. Реакции торможения гемагглюнации (РТГА)

1. Реакция нейтрализации вирусов на культуре клеток.

Обычно используются нейтрализующие сыворотки.

Для этого полученный вирус накапливают в культуре клеток, и различные его разведения смешивают с не разведенной противовирусной сывороткой или делают наоборот – разводят сыворотку. Смесь инкубируют в термостате при 37 градусах 1-2 часа.

После этого смесью заражают культуру клеток, куриные эмбрионы или чувствительных животных и следят за реакцией. Отсутствие лизиса в культуре клеток тканей и патологических изменений в эмбрионе говорит о гибели вирусов, что и подтверждает достоверность поставленного диагноза.

Можно так же в серологической диагностике РНВ вводить вирусонейтролизующие антитела в организме больного человека с помощью известных диагностических штампов вирусов.

Обычно применяют метод «парных сывороток». О заболевании говорит 4-х и более кратное нарастание титра сывороток.