Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Л.Д. №1 20.02.12..docx
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.04.2025
Размер:
419.36 Кб
Скачать

II. Выявления антигенов возбудителей с помощью диагностических сывороток содержащих известные антитела.

Выявления антигенов возбудителей – это нахождение в биологическом материале (сыворотка крови, секреты, выделения, пораженные ткани) токсинов возбудителей. Методы выявления антигенов возбудителей очень информативны и из-за легкости проведения и скорости получения конечного результата и относятся к быстрым методам (экспресс - методам) лабораторной диагностики.

Для диагностики чаще используются: РИФ; РНИФ; РА; РП; ПЦР; ИФА:

1. Реакция иммунофлюоресценции и реакция непрямой иммунофлюоресценции (риф, рниф).

Используются специфические диагностические антитела, меченные флюоресцирующими красками (флюорохромами). Соединение меченых антител с антигенами микроорганизмов даёт возможность судить о наличие и локализации антигена (токсина). Результат реакции учитывается при рассматривании препарата в люминесцентном микроскопе. Метод этот обладает высокой чувствительностью и характеризуется универсальностью применения для обнаружения различных антигенов, как в живых, так и в мертвых клетках. Наиболее часто этот метод лабораторной диагностики применяют при вирусных инфекциях, другие экспресс-методы исследования вирусов применяются сравнительно редко.

А. Прямая РИФ.

На обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки-отпечатки, подсушивают и фиксируют, затем наносят сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, ополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят в +.

а). ++++ очень яркое свечение вокруг токсинов (микроорганизмов).

б). +++ яркое свечение вокруг токсинов (микроорганизмов).

в). ++ обычная флюоресценция вокруг токсинов (микроорганизмов)

г). + слабое свечение вокруг токсинов (микроорганизмов)

д). – свечение равномерное по всему полю.

Б. РНИФ

При РНИФ с целью выявления антигенов мазок-отпечаток обрабатывают специфической не меченой сывороткой. Затем наносят люминесцирующую сыворотку и помещают во влажную камеру на 20-30 минут при температуре 37 градусов. Вынимают, уделяют избыток диагностической сыворотки, промывают 10-15 минут физиологическим раствором, ополаскивают дисцилированной водой и сушат, после чего исследуется в люминесцентном микроскопе.

Оценку производят также в + от а до г.

Методы просты, высокочувствительны и позволяют получить результат через 1-2 часа в даже условиях поликлиники (ОРВИ, ОКИ, микоплазмоз, коклюш, хламидиоз, брюшной тиф, туляремия, чума, сифилис, токсоплазмоз, бешенство, ВИЧ-инфекция и др.).

2. Реакции агглютинации для обнаружения возбудителей (ра)

Агглютинацией называю склеивание возбудителей при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Её применяют для определения вида отдельных возбудителей в сыворотке крови больного.

В качестве диагностикума применяют монорецепторную, типоспецифическую, абсорбированную сыворотку. Реакции ставят на покровном стекле.

Типы реакций агглютинации.

А. Ориентировочная реакция агглютинации.

Эту реакцию применяют для того, чтобы отобрать возбудитель из общей группы не агглютинирующиеся колонии. При агглютинации образуются хлопья, а если она отсутствуют, и реакции нет, то жидкость остается равномерно мутной.

Б. Развернутая реакция агглютинации.

Эту реакцию проводят для идентификации бактерий в нескольких пробирках, в которых находятся двукратно разведенные диагностические сыворотки (1:100,1:200.1:400 т.д.) в которые добавляют по 1-2 капли взвеси возбудителей. Реакцию читают через 18-20 часов выдерживания в термостате.

Интенсивность реакции выражается «+».