I. Выявления специфических антител с помощью известного антигена.

Методы очень широко распространены и применяются с большим успехом уже более 100 лет. Но, к сожалению, оценка серологического исследования в ряде случаев представляет определенную трудность. Во-первых, в большинстве случаев антитела начинают синтезироваться только на 5-7 день болезни, во-вторых – для большинства методов необходимо исследование парных сывороток и наконец, сам иммунный ответ может быть не достаточно напряженным, что очень часто наблюдается у маленьких детей и у пациентов с иммунной депрессией.

Необходимо также учитывать, что реакции не являются абсолютно специфическими ввиду наличия общих антигенов у возбудителей, относящихся к одному и даже разным видам. Специфичность серологических тестов зависит также от качества диагностикумов, правильности получения, хранения, транспортировки и обработки сыворотки. Нельзя использовать кровь, имеющую бактериальное загрязнение, гемолиз, посторонние примеси и длительно хранящуюся при комнатной температуре.

Для диагностики чаще используются РА, РНГА, РСК, РТГА и РЛ.

1. Реакция агглютинации. (ра).

При использовании (РА), для выявления в сыворотке больных антител к соответствующему патогенному микроорганизму, берут 5 мл. крови пациента, получают сыворотку, разводят в изотоническом растворе от 1:50 до 1:1600 так как в концентрированном растворе могут быть нормальные антигены у здоровых людей или больных со схожими болезнями и выдерживают в термостате в течение 20 минут для инактивации посторонних белковых примесей.

В качестве антигена используют взвесь известных убитых микроорганизмов (диагностикум) с которыми безопасно работать. Реакцию ставят в пробирках.

Диагностическое значение имеют разведения титра 1:200-1:400 и более. Чем больше разведение, тем реакция более достоверна. Обычно используют, метод парных сывороток, – проводя, идентичную реакцию спустя 5-7 дней и сравнивают, полученные результаты. Титр агглютинации должен повышаться и реакция должна происходить в больших разведениях, чем предыдущая, т.к. происходит накопление антител.

РА используется для диагностики брюшного тифа, стафилококковой инфекции, иерсиниоза и бруцеллеза (реакции Видаля, Райта и Хеддельсона).

Модифицированная РА - реакция латексной агглютинации (РЛА) применяется для диагностики дифтерии, коклюша, ВИЧ-инфекции, менингококковой, пневмококковой, кишечной и гемофильной инфекции.

2. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга).

Для РНГА готовят в научно исследовательских институтах (НИИ) эритроцитарные антигенные диагностикумы. Для этого на эритроциты барана, после предварительной их обработки, искусственно насаждают антигены. Для проведения реакций используют специальные луночковые пластмассовые пеналы. Сыворотку больного разводят от 1:10 до 1:1280 и далее, разливают по луночкам, туда же добавляют по 0,25 мл диагностикума. Результаты читают через 2 часа и оценивают в +.

а) ++++ эритроциты равномерно покрывают всю лунку в виде зонтика.

б) +++ эритроциты в виде зонтика, в центре небольшое кольцо из нескольких эритроцитов.

в) + + то же самое, но не связанных эритроцитов больше.

г) + преобладают в основном не склеенные эритроциты.

д) - сплошные не склеенные эритроциты в виде диска, или пуговицы.

РНГА применяют для диагностики бактериальных ОКИ, коклюша, ОРВИ, дифтерии, и других инфекций.