Принципы предпосевной обработки диагностического материала

Обычные микробиологические методики, заключающиеся в посеве исследуемого клинического материала на питательные среды с последующими пересевами с целью выделения чистых культур возбудителей, не могут быть использованы при проведении исследований на туберкулез. Это объясняется тем, что рост микобактерий туберкулеза происходит очень медленно (в течение 3-8 недель), а большинство проб клинического материала загрязнены более быстро растущими бактериями. Их бурный рост на богатых питательных средах мешает развитию микобактерий и затрудняет их выделение. Поэтому диагностический материал обязательно подвергается специальной обработке, обеспечивающей деконтаминацию, т.е. гибель загрязняющей микрофлоры. Исключение составляет материал, взятый стерильно из закрытых полостей (спинномозговая, плевральная, прикардиальная, синовиальная, асцитическая жидкость, кровь, пунктат костного мозга).

Микобактерии, выделяющиеся из дыхательных путей больного, как правило, окружены большим количеством слизеподобных веществ, затрудняющих их выделение. В связи с этим перед посевом мокроту и другие сходные материалы необходимо подвергнуть разжижению и гомогенизации.

Все препараты, используемые в настоящее время для разжижения и деконтаминации клинического материала, обладают более или менее выраженной токсичностью в отношении микобактерий. Чтобы обеспечить выживание достаточной части микобактериальной популяции, необходимо использовать щадящие методы обработки, позволяющие с одной стороны, подавить быстрорастущие гноеродные и гнилостные микроорганизмы, а с другой - максимально сохранить жизнеспособность присутствующих в материале микобактерий.

Методы разжижения и деконтаминаиии.

Для проведения гомогенизации и деконтаминации мокроту, экссудаты и другой негомогенный материал помещают в стерильные флаконы с бусами или битым стеклом, обрабатывают щелочью или кислотой и подвергают встряхиванию.

Жидкие материалы предварительно центрифугируют и обработке подвергают только осадок.

Для предпосевной обработки диагностического материала рекомендуется использовать следующие детергенты:

1. 10% раствор трехзамещенного фосфата натрия (Na₃PO₄). Препарат хорошо угнетает сопутствующую флору и даже при 2-3 дневном воздействии не повреждает микобактерий и мало влияет на их способность к росту на питательных средах.

2. Обработка материала 3% серной кислотой (H₂SO₄). Раствором серной кислоты производят обработку сильно загрязненного материала. Время обработки кислотой не должно превышать 20 минут.

3. Обработка материала 4% раствором едкого натра (модифицированный метод Петрова).

Обработка с помощью NaOH является достаточно жесткой и может приводить к гибели до 60% микобактерий, содержащихся в исследуемом образце материала.

Этот метод широко применяется в развивающихся странах, так как отличается простотой и основан на использовании доступных реагентов.

Гидроокись натрия токсична как для контаминирующих микроорганизмов, так и для микобактерий. Поэтому при использовании данного метода необходимо строго соблюдать допустимое время обработки.

Время обработки, щелочью не должно превышать 40 минут.

Следующие биологические жидкости и ткани не нуждаются в деконтаминации, если они были взяты в стерильные флаконы с соблюдением правил асептики:

• спинальная, синовиальная и другие жидкости (обычно стерильные);

• пунктаты костного мозга;

• гной из «холодных» абсцессов;

• резецированные ткани (за исключением материала аутопсии):

• пунктаты печени и лимфатических узлов, а также биопаты (при отсутствии фистулы).