Микроскопия исследуемого материала

Из материала, взятого стерильным ватным тампоном, одновременно с посевом приготавливают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом.

При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологические и тинкториальные свойства (кокки, палочки, отношение к окраске по Граму).

Микроскопическое исследование является важным ориентиром. При просмотре мазков оценивают общую картину микрофлоры: наличие скоплений грамположительных кокков (Staphylococcus, Micrococcus); цепочек грамположитсльных кокков (Streptococcus); мелких ланцетовидных, окруженных зоной неокрасившейся капсулы (S. pneumoniae); грамотрицательных кокков (Neisseria); грамотрицательных палочек с закругленными концами, окруженных капсулой в виде светлого ореола (KIеbsiella, и др.); грамотрицательных палочек (Е. coli, P. aeruginosa и др.); мелких грамотрицательных палочек в виде скоплении (Наеmорhylus); мицелия бластоспор гриба.

Посев материала, культивирование.

Материал из глотки, носа и ротовой полости засевают так же, как мокроту. Для выделения S.pyogenes материал из зева сеют на одну из нижеперечисленных сред, втирая тампоном в поверхность агара (не более 1/6 его площади), а затем рассевая штрихами петлей для получения отдельных колоний:

• •=> 5% кровяной агар (лучше с добавлением бараньей крови); инкубация в анаэробных условиях при 35-37°С;

• •=> селективный кровяной агар (содержащий только триметоприм/ сульфаметоксазол, либо дополнительно колистин и кристал-виолет); инкубация аэробная и в атмосфере 5-10% CO., при 35-37°С;

• •=> селективный кровяной агар с инкубацией в анаэробных условиях при 35-3 7°С 48 ч (по результативности этот вариант наиболее предпочтительный по сравнению с предыдущими).

Последующий анализ включает следующие этапы:

• Просматривают чашки с посевами через 18-24 ч (через 48 ч при аэнаэробном культивировании). Колонии S.pyogenes мелкие, прозрачные или полупрозрачные, куполообразные, края ровные, вокруг колоний относительно широкая зона полного (бета) гемолиза. Если отмечается недостаточный рост сходных с бета-гемолитическим стрептококком колоний, посевы реинкубируют дополнительно 18-24 ч.

• Отбирают 1 -2 колонии и проверяют их на наличие каталазы. Если реакция отрицательная, проводят дальнейшую идентификацию (бацитрациновый тест, серотипирование с агглютинирующими антисыворотками).

• Чувствительность к антибиотикам в рутинных исследованиях не определяют, так как S.pyogenes всегда чувствителен к пенициллину и только в 3-5% случаев могут быть резистентны к эритромицину и тетрациклинам.

Для экспресс-диагностики S.pyogenes непосредственно в мазках из глотки имеются многочисленные коммерческие наборы, позволяющие получить ответ в тот же день. Они основаны на экстракции из находящихся в образце стрептококков антигена группы А ферментативным или химическим способом, и выявлении его методом коагглютинации, латекс-агглютинации или иммуноферментного анализа (прямой антигенный тест). Общим недостатком этих наборов является неспособность выявлять малые количества S.pyogenes в образце, поэтому при отрицательном результате следует проводить бактериологическое исследование.

Оценка результатов.

При диагностике стрептококкового фарингита возможны 3 формы ответа, например:

1. "Бета-гемолитические стрептококки не обнаружены".

2. "Обнаружены бета-гемолитические стрептококки, не относящиеся к группе А".

3. "Обнаружены стрептококки группы А". В ответе необходимо указать количество выделенных стрептококков (в условных единицах или в альтернативной форме), например:

• "1+" или "скудный рост" - до 10 колоний;

• "2+" или "умеренный рост" - 11-50 колоний;

• "3+" или "обильный рост" - >50 колоний;

• "4+" или "в преобладающем количестве" (когда рост стрептококка группы А превалирует над сопутствующей микрофлорой), или "рост чистой культуры".

В ответе не указывают рост нормальных представителей микрофлоры верхних дыхательных путей (!).

Стандарт диагностики и лечения тонзиллофарингита.

Цель микробиологической диагностики:

• Подтвердить или исключить стрептококковую (группа А) этиологию.

• При подтверждении стрептококковой этиологии:

  • Назначение бета-лактамов или макролидов;

  • Определение чувствительности к бета-лактамам не целесообразно.

• При исключении стрептококковой этиологии АБ не назначают.

При диагностике гонококкового фарингита возможны следующие варианты ответа:

1. "Обнаружены гонококки".

2. "Гонококки не обнаружены".

3. "В посеве обильный рост нормальной микрофлоры. Исследование повторить". Этот ответ выдают, когда на агаре не удается выделить подлежащую флору.

4. "Образец контаминирован дрожжевыми клеткам". Эта форма ответа также важна, поскольку дрожжевые клетки снижают рН среды, тем самым ингибируя рост гонококков.

5. "Образец неудовлетворительный. Взятие материала следует повторить". Этот ответ выдают, когда нарушены правила взятия и транспортировки материала (сухой тампон, слишком длительные сроки доставки и др.).

Если определялась β-лактамаза или чувствительность к цефтриаксону, результаты также указывают в ответе.

При диагностике коклюша возможны два варианта ответа:

1. "Бактерии рода Bordetella не обнаружены";

2. "Выделена (обнаружена) культура В.pertussis (или B.parapertussis, B.bronchiseptica)."

При диагностике дифтерии в окончательном ответе при получении роста дифтерийной палочки обязательно указывают наличие или отсутствие токсигенности. Для правильной трактовки результатов следует помнить, что:

• • при типичной клинической картине дифтерии отсутствие бактериологического подтверждения не является основанием для отмены диагноза;

• • высев нетоксигенных C.diphtheriae при типичной клинической картине дифтерии не является основанием для отмены диагноза и расценивается как сопутствующее носительство;

• • высев токсигенных C.diphtheriae у больного ангиной с патологическими наложениями является основанием для установления у него диагноза "дифтерия";

• • при сомнительной клинической картине первоначальный диагноз "дифтерия" (или подозрение на это заболевание) может быть отменен при получении 3-х кратных отрицательных результатов бактериологического исследования и отсутствии характерных для дифтерии осложнений;

• • при сомнительной клинической картине высев нетоксигенных C.diphtheriae подтверждает возможность отмены диагноза "дифтерии";

• • получение 2-х кратных отрицательных результатов бактериологического исследования, проведенного с интервалом 1-2 дня и не ранее, чем через 3 дня после отмены антибиотиков, служит основанием для прекращения изоляции носителей токсигенных C.diphtheriae и переводу реконваллесцентов на лечение по месту жительства.

При определении носительства стафилококков и менингококков в ответе указывают обнаружены или не обнаружены S.aureus или N.meningitidis (в последнем случае указывают серовар).

О возбудителе необходимо судить на основании комплекса исследований: данных микроскопии первичных мазков, результатов посева нa плотные питательные среды (количественная оценка роста различных видов микроорганизмов, однородность популяции при посеве на плотные питательные среды), учета анамнеза, клинических проявлений заболевания и результатов комплексной терапии

Культуральное исследование при инфекциях дыхательных путей(Американская коллегия врачей) Дж. Барлетт, 2003г

Состояние	Рекомендации
Синусит	КИ не нужно
Фарингит	Тест на стрептококк гр А
Бронхит	КИ не нужно
Обострение ХОБЛ	КИ не нужно
Пневмония	КИ крови и мокроты до начала лечения

КИ – культуральное исследование

Материалы при инфекциях ВДП

• Образцы из зева:

• S.pyogenes при фарингитах.

• N.gonorrhoeae в специальных случаях

• Мазки из носа:

  • MRSA у носителей.

• Аспират из носоглотки:

  • S.pyogenes

  • N.meningitides

  • C.diphteriae

Бактериоскопическая, бактериологическая, иммунологическая диагностика туберкулеза. Правила забора, доставки и транспортировки исследуемого материала.

Введение.

Туберкулез известен с глубокой древности и причинил человечеству больше страданий, чем любая другая инфекция. Несмотря на блестящие достижения этиотропной терапии, туберкулез и сегодня остается серьезной проблемой, особенно в экономически отсталых странах. В современных публикациях туберкулез все чаще упоминается среди так называемых «возрождающихся инфекций. Ежегодно на земном шаре от туберкулеза умирают более 3 млн. человек, и есть опасения, что эта тенденция нескоро сдвинется в лучшую сторону. Микобактерии входящие в Mycobacterium tuberculosis complex (Mvcobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis) являются возбудителями туберкулеза, причем на долю M.tuberculosis приходится не менее 95% случаев у нас в стране и России, а на доля M. bovis – остальные 5%.Преаналитический этап

Сбор материала для исследования

Соблюдение правил сбора, хранения и транспортировки материала для исследования имеет очень важное значение, так как от этого зависит не только достоверность получаемых результатов, но и эпидемиологическая безопасность окружающих больного лиц.

Для исследования может быть использован самый разнообразный материал. У больных с легочными формами процесса объектом исследования чаще всего служит мокрота, от правильного сбора которой во многом зависит результат исследования. Если во время проведения исследования больной получает противотуберкулезное лечение, прием препаратов отменяют за 2 суток до сбора материала.

При отсутствии мокроты наиболее ценным материалом для исследования являются аспираты из трахеи и бронхов, бронхоальвеолярная лаважная жидкость, а также материалы прицельной катетер- и щеточной биопсии, получаемые при бронхологических исследованиях.