Билет № 20

1. Методы индикации вирусов.

Эти методы включают: цитопатогенное действия вирусов; выявление бляшек по Дюльбекко и Фогт; индикацию вирусов в куриных эмбрионах; индикацию вирусов на лабораторных животных и другие.

Цитопатогенное действие вирусов. Индикация вирусов в зараженных культурах клеток является основным методом в вирусологии. Действие вируса на клетки определяется путем регистрации цитопатогенного действия (ЦПД). В результате этого происходят дегенеративные изменения и разрушения клеток.. Цитопатический эффект обнаруживается под малым увеличением микроскопа через стекло сосуда, в котором производится культивирование зараженных клеток. При наличии вируса в клеточной культуре обнаруживают дегенерацию клеток и нарушение структуры клеточного слоя.

При микроскопнровании окрашенных препаратов обнаруживаются многоядерные клетки и симпласты, характерные для цитопа-f тогенного действия вирусов кори, осповакцины, парагриппозных вирусов и других. Для выявления названных цитологических изменений обычно пользуются методом окраски Препаратов гематоксилином и эозином. Следует особо отметить, что степень и характер повреждения клеток обусловлены рядом факторов, важнейшими из которых являются свойства вируса, свойства используемых клеток, доза вируса и состав питательной среды.

Метод бляшек по Дюльбекко и Фогт. Для раннего выявления вирусов в клеточных культурах Дюльбекко и Фогт (1954) разработали новый тест, получивший название метода пятен (бляшек). В основе метода лежит образование в местах цитопатогенного действия вируса обесцвеченных пятен, так как пораженные клетки теряют способность сохранять или воспринимать витальные окрашивания. Пятна, или бляшки, по Дюльбекко, представляют собой .изолированные колонии вируса в однослойных культурах, видимые микроскопии чески в виде неокрашенных . округлых форм, четко выделяющиеся на фоне живых клеток, окрашенных в красный цвет.

2. Субпопуляции т-лимфоцитов. Cd – номенклатура.

Т-лимфоциты – это сложная по составу группа клеток, которая происходит от полипотентной стволовой клетки костного мозга, а созревают и дифференцируется в тимусе из предшественников. На долю этих клеток приходится около 75% всей лимфоидной популяции. Все Т-лимфоциты имеют гладкую поверхность, их общим маркером явл CD3, а также рецептор к эритроцитам барана. В зависимости от строения Т-клеточного антигенного рецептора и функциональной направленности сообщество Т-лимфоцитов может быть разделено на отдельные группы. Различаю два типа Т-клеточного антигенного рецептора:αβ и γδ. Первый тип гетеродимер, который состоит из двух полипептидных цепей – α и β; он характерен для традиционных Т-лимфоцитов, известных как Т-хелперы и Т-киллеры. Второй тип обнаруживаеся на поверхностной популяции γδТ- лимфоцитов. Т-лимфоциты также разделяются на две субпопуляции: иммунорегуляторы и эффекторы. Т- хелперы- субпопуляция Т-лимфоцитов, которые выполняют регуляторную функцию. На наружной поверхности их цитоплазматической мембраны определяются молекулы CD4. Т-киллер – субпопуляция Т-лимфоцитов-эффекторов. На поверхности их цитоплазматической мембраны определяются молекулы CD8.

3. Иммуноферментный анализ.

ИФА – выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения антигена с меченной ферментом иммнунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом, и изменяется цвет продукта реакции – интенсивность окраски прямопропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Твердофазный ИФА – наиболее распространенный вариант иммунологического теста, когда один из компонентов иммунной реакции сорбирован на твердом носителе, например в лунках планшеток из полистирола. При определении антител в лунки планшеток с сорбированным антигеном последоватьльно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат (хромоген) для фермента. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем тщательного промывания. При положит результате изменяется цвет раствора хромогена. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, мечнную ферментом, а затем субстрат для фермента. Конкурентный вариант ИФА: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки. Другой тест – искомые антитела и меченные антитела конкурируют друг с другом за антигены. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней.