77. Реакция агглютинации: сущность, условия и способы постановки и учета, диагностическое значение.

Реакция агглютинации. В лабораторной диагностике ин­фекционных заболеваний реакцию агглютинации очень часто применяют для идентификации видов и сероваров (серотипи- рование) бактерий с помощью диагностических агглютиниру­ющих сывороток.

Реакция агглютинации (РА) на стекле (плас­тинчатая реакция агглютинации) ставится с одним разведением диагностической агглютинирующей сыворотки, которое в за­висимости от ее титра составляет 1:10, 1:25, 1:50 или 1:100.

Предметное стекло делят на квадраты восковым каранда­шом. В один квадрат наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия, в другой — каплю сыворотки. Затем петлей в каждую каплю вносят небольшое количество бактериальной культуры и перемешивают круговыми движениями в каждой капле до получения равномерной взвеси. Стекло можно слегка подогреть, высоко держа над пламенем горелки в течение 2—4 мин. Реакция протекает быстро. Наблюдают за появлени­ем зерен и хлопьев агглютината в каплях. Учет производят через 3—5 мин.

Кроме специфической агглютинации бактерий, вызван­ной антителами, возможна спонтанная агглютинация (в отсутствие иммунной сыворотки). Спонтанную агглютинацию дают R-формы бактерий, не образующие гомогенной взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия и осаждающиеся в виде клеточных агрегатов. При кислой реакции среды в резуль­тате снятия одноименного заряда с поверхности бактериальных клеток в изоэлектрической зоне также происходит склеива­ние — наступает "кислотная" агглютинация. Чтобы ис­ключить возможность учета ложноположительных результатов спонтанной агглютинации, всегда ставят контрольную пробу с изотоническим раствором хлорида натрия.

Простые реакции

Простые реакции обычно включают два компонента — Аг и AT. К простым реакциям относят РА. реакции преципитации (РП) в жидкостях и гелях, реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) и опсоно-фагоцитарные реакции. Простыми реакциями считают и косвенные (трёхкомпонентные) реакции, в состав которых входят реагирующие системы (животные, эритроциты и т.д.), например, реакции нейтрализации (РН) возбудителя, РН Аг и реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Реакции агглютинации

Реакция агглютинации (РА) [от лат. agglutinatio, склеивание] позволяет выявить корпуску­лярные Аг, точнее Аг, локализованные на поверхности сравнительно крупных частиц (микроорганизмы, клетки различного происхождения). Механизм РА описывает «теория решётки», согласно которой двухвалентное AT взаимодействует одним активным центром с детерминантой 1 одной молекулы Аг, а другим — с детерминантой второй молекулы Аг. В результате подобного взаимодействия образуется агглютинат. Его формирование невозможно при дефиците или избытке AT. Реакция проявляется склеиванием корпускулярных Аг под воздей­ствием AT (агглютининов) и реализуется в изотоническом растворе электролита, например 0,9% раствора NaCl. В РА также можно определять и содержание AT в сыворотке крови больных, например, брюшным тифом (реакция Видаля) или бруцеллёзом (реакция Райта).

Развёрнутая РА. Для определения AT в сыворотке крови больного ставят развёрнутую РА. Для этого к серии разведений сыворотки крови добавляют диагностикум — взвесь убитых мик­роорганизмов или частицы с сорбированными Аг. Максимальное разведение, дающее агглюти­нацию Аг, называют титром сыворотки крови. Разновидности РА для выявления AT — кровяно-капельная проба на туляремию (с нанесением диагностикума на каплю крови и появле­нием видимых белёсых агглютинатов) и реакция Хаддльсона на бруцеллёз (с нанесением на каплю сыворотки крови диагностикума, окрашенного генциановым фиолетовым).

Ориентировочная РА. Для идентификации выделенных микроорганизмов ставят ориенти­ровочную РА на предметных стёклах. Для этого к капле стандартной диагностической антисыворотки (в разведении 1:10, 1:20) добавляют культуру возбудителя. При положительном ре­зультате ставят развёрнутую реакцию с увеличивающимися разведениями антисыворотки. Ре­акцию считают положительной, если агглютинацию наблюдают в разведениях, близких к титру диагностической сыворотки.

О-Аг. Соматические О-Аг термостабильны и выдерживают кипячение в течение 2 ч. При взаи­модействии с AT образуют мелкозернистые агрегаты. Н-Аг. Н-Аг (жгутиковые) термолабильны и быстро разрушаются при 100 °С, а также под дей­ствием этанола. В реакциях с Н-антисывороткой через 2 ч инкубации образуют рыхлые круп­ные хлопья (образованы бактериями, склеившимися жгутиками). Vi-Ar брюшнотифозных бактерий относительно термостабилен (выдерживает температуру 60-62 'С в течение 2 ч); при инкубации с Vi-антисывороткой образуется мелкозернистый агглютинат.

Реакции прямой гемагглютинации. Простейшая из подобных реакций — агглютинация эрит­роцитов, или гемагглютинация, применяемая для определения групп крови в системе AB0. Для определения агглютинации (или её отсутствия) используют стандартные антисыворотки с анти-А и анти-В-агглютининами. Реакция называется прямой, так как исследуемые Аг — естественные ком­поненты эритроцитов. Общие с прямой гемагглютинацией механизмы имеет вирусная гемагглю­тинация. Многие вирусы способны спонтанно агглютинировать эритроциты птиц и млекопитаю­щих, их добавление к суспензии эритроцитов вызывает образование агрегатов из них.

Реакция адсорбции агглютининов

Если различные бактерии имеют одинаковые или похожие по структуре Аг, то их агглютини­руют одни и те же антисыворотки. Для облегчения идентификации таких Аг используют реак­цию адсорбции агглютининов, основанную на способности Аг родственных бактерий адсорбиро­вать из сыворотки крови только групповые AT, сохраняя в ней типоспецифические AT. Полу­ченные антисыворотки называют монорецепторными, так как они содержат AT только к одному Аг. Для сорбции агглютининов применяют взвесь убитых бактерий; если они убиты нагревани­ем, то адсорбируются остающиеся интактыми О-агглютинины, если формалином, то Н-агглютинины [Н-Аг (жгутиковые) не чувствительны к формалину].

Реакция коагглютинации

Она основана на способности белка А золотистого стафилококка неспецифически связыв; Fc-фрагменты Ig, В подобных ситуациях стафилококки играют роль частиц с сорбированными на их поверхности AT. При внесении в систему соответствующих Аг с ними взаимодействуют Fab-фрэгменты AT и образуются агрегаты из стафилококков, диагностических AT и исследуе­мых микробных Аг.