5. Аллергологические методы

Аг многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диаг­ностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследова­ний. Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутрикожное введение Аг (аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, мелиоидоз, бруцеллёз. Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулёза, так и для оценки невосприимчивости организ­ма к возбудителю.

Основу метода ПЦР составляет катализируемое ДНК-полимеразой многократное образование копий определённого участка ДНК. Первоначально проводят отжиг — термическое разделение двухнитевой молекулы ДНК на отдельные цепочки. Затем среду охлаждают и вносят праймеры (затравки), комплементарные нуклеотидным последовательностям обеих цепочек. Для запуска реакции применяют синтетические праймеры — олигонуклеотиды, состоящие из 10-20 нуклеотидов (например, дезоксинуклеотидтрифосфат), взаимодействующие с окончаниями последо­вательностей и образующие последовательности в 50-1000 оснований. Затем в среду вносят тер­мостабильную taq-полимеразу (по названию бактерии Thermus aquaticus), что запускает образование вторичных копий цепей ДНК, после чего образующиеся двухнитевые молекулы ДНК снова подогревают. Образующиеся отдельные цепочки остужают, вносят праймеры и снова повторяют процедуру подогрева и охлаждения; поскольку taq-полимераза термостабильна, то необходимость в её повторном внесении отсутствует. ПЦР позволяет получить большие количества изучаемого фрагмента ДНК даже в том случае, если в распоряжении исследователя имеется всего лишь одна исходная молекула геномной ДНК. Идентификацию копий ДНК проводят методом электрофореза. Метод ПЦР лежит также в основе ДНК-идентификации личности, установления родства людей, выявления генов наследственных болезней и пр.

69. Антигенпрезентирующие клетки: виды, роль в формировании клеточного и гуморального иммунного ответа.

Клетки антигенпрезентирующие (АПК) — клетки системы мононуклеарных фагоцитов (моноциты, макрофаги, купферовские клетки, клетки Лангерганса, дендритные клетки) и В-лимфоциты, способные осуществлять протеолиз экзо- и эндогенных белковых антигенов, в результате чего образуются пептиды. Последние связываются в цитоплазме клетки с комплементарными участками молекул I или II класса, транспортируются к мембране клетки и экспонируются на ее поверхности, где распознаются Т-хелперами или Т-киллерами с помощью антигенспецифических рецепторов.

Антигенпредставляющие клетки (А-субсистема) присутствуют пре­имущественно в коже, лимфатических узлах, селезёнке и тимусе. К ним отно­сятся макрофаги, дендритные клетки, фолликулярные отростчатые клетки лим­фоузлов и селезёнки, клетки Лангерханса, М-клетки в лимфатических фолликулах пищеварительного тракта, эпителиальные клетки вилочковой железе. Эти клетки захватывают, перерабатывают и представляют Аг (эпитоп) на своей поверхности другим иммунокомпетентным клеткам, вырабатывают ИЛ-11 другие цитокины, секретируют простагландин Е₂ (PGE₂), угнетающий имп ный ответ. Фагоцитарную и цитолитическую активность макрофагов усилива­ет γ-ИФН.

Дендритные клетки происходят из костного мозга и образуют популяцию дом гоживущих клеток, которые запускают и модулируют иммунный ответ. Вкостном мозге их предшественники образуют субпопуляцию СD34⁺-клеток, которые способны дифференцироваться в клетки Лангерханса для эпителия и дендритные клетки для внутренней среды. Незрелые и неделяшиеся предшественники дендритных клеток заселяют многие ткани и органы. Лн ференцировку дендритных клеток поддерживают колониестимулируюший фактор гранулоцитов и макрофагов GM-CSF и ИЛ-3. Дендритные клетки имеют звёздчатую форму и в состоянии покоя несут на поверхности относители небольшое количество молекул МНС. В отличие от клеток Лангерханса, интерстициальные дендритные клетки способны стимулировать синтез Ig В-лимфоцитами. Все дендритные клетки могут вначале поступать в тимус-зависимую зону периферических лимфоидных органов, где созревают в так называемые интердигитирующие клетки.