1.3. «Металлические яды»

1.3.1. Обнаружение «металлических ядов» при химико-токсикологи­ческом исследовании

Получить у преподавателя модельный минерализат, содержащий «металлические» яды. Описать характер и свойства полученного объекта. Составить схему дробного анализа минерализата и провести обнаружение «металлических» ядов.

Методики проведения качественных реакций на «металлические» яды описаны в практикуме: Белова А.В. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии. - М.: Медицина, 1976. - С. 137 -181.

 2-4; 9.

1.3.2. Фотометрическое определение висмута, свинца и сурьмы в минерализате

ВИСМУТ

1,0 мл анализируемого раствора (3 опыта) переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл насыщенного раствора тиомочевины, доводят до водой до метки и перемешивают. 1,0 мл (3 опыта) стандартного раствора висмута (200 мкг/мл) переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл насыщенного раствора тиомочевины, доводят водой до метки и перемешивают. Измеряют светопоглощение полученных растворов при 470 нм. Раствор сравнения - H₂O. Кювета 5 см.

СВИНЕЦ

1,0 мл (3 опыта) фильтрата, полученного при промывании осадка горячим подкисленным раствором ацетата аммония, переносят в делительную воронку, прибавляют 5 мл аммиачного буферного раствора, 1 мл 0,01% раствора дитизона, 5 мл хлороформа и взбалтывают 1 минуту. Экстракт сливают в сухую мерную пробирку и доводят хлороформом до объёма 5 мл. К 1,0 мл (3 опыта) стандартного раствора свинца (10 мкг/мл) прибавляют вышеуказанное количество буферного раствора, дитизона, хлороформа и проводят экстракцию. Измеряют светопоглощение экстрактов при 520 нм. Раствор сравнения - H₂O. Кювета 0,5 см.

СУРЬМА

1,0 мл (3 опыта) исследуемого раствора переносят в делительную воронку. Прибавляют 2 мл 6 М HCl, 5 капель пергидроля, 0,5 мл 0,5% спиртового раствора малахитового зелёного, 5 мл толуола и взбалтывают в течение двух минут. Экстракт сливают в сухую мерную пробирку и доводят до объёма 5 мл толуолом. Аналогично поступают с 1,0 мл (3 опыта) стандартного раствора сурьмы (100 мкг/мл). Измеряют светопоглощение толуольных экстрактов при 610 нм. Раствор сравнения - H₂O. Кювета 1 см.

 2; 4; 9.

1.3.3. Статистическая обработка результатов фотометрического определения «металлических» ядов

Статистическая обработка результатов фотометрического определения «металлических ядов» проводится в следующем порядке:

1. Рассчитывают среднее значение и дисперсию светопоглощения исследуемого раствора

, -

2. Аналогично рассчитывают среднее значение и дисперсию светопоглощения стандартного раствора.

3. Рассчитывают:

• среднее значение определяемой концентрации и её доверительный интервал.

, где ,

• границы доверительного интервала среднего значения результатов анализа

• воспроизводимость результатов анализа (относительное стандартное отклонение)

 1; 4.

1.4. ТСХ-скрининг и количественное определение лекарственных веществ

1.4.1. Обнаружение токсических веществ в биологических жидкостях методом ТСХ-скрининга

Выделение веществ кислотного, нейтрального и слабоосновного характера из биологических жидкостей

10 мл мочи (крови) подкисляют 10% раствором серной кислоты до рН 2 по универсальной индикаторной бумаге. Задачу помещают в делительную воронку, добавляют 5 мл хлороформа и экстрагируют в течение 3-х минут. Органическую фазу после расслоения эмульсии фильтруют через безводный сульфат натрия в мерную пробирку. Объём полученного экстракта доводят хлороформом до 5 мл. Из них 2 мл (аликвота А_К) используют для качественного анализа, а 3 мл (аликвота Б_К) для количественного определения.

Схема ТСХ-скрининга веществ кислотного, нейтрального и слабоосновного характера

Условия исследования:

Пластинки «Silufol» - силикагель, закреплённый крахмалом на алюминиевой подложке. Система растворителей - хлороформ-ацетон 9:1. Время насыщения камеры - 20 минут. Высота подъёма фронта растворителей - 10 см.

Реагенты для обнаружения:

1. 10% водный раствор FeCl₃ - производные пиразолона;

2. 5% раствор HgSO₄ в концентрированной серной кислоте - производные барбитуровой кислоты (белые пятна на сером фоне);

3. 0,1% раствор дифенилкарбазона (ДФК) в хлороформе - производные барбитуровой кислоты.

Методика исследования:

Полученные при изолировании аликвоты А_К и Б_К упаривают в токе воздуха до объёма 50-100 мкл. По 1/4 части аликвоты А_К наносят в зоны A и C. Остаток этой аликвоты используют для подтверждающего исследования. В зону В наносят метчик из группы производных пиразолона, в зону D метчики из группы производных барбитуровой кислоты (барбитал обязательно). В зону Е количественно наносят полосой аликвоту Б_К. Хроматограмму в зоне Е используют в дальнейшем для количественного определения.

После хроматографирования пластинку подсушивают и обрабатывают зоны А и В раствором FeCl₃. Зоны С, D и Е при этом закрывают стеклом. Пластинку подсушивают и обрабатывают зоны С и D последовательно раствором HgSO₄ в серной кислоте и раствором ДФК в хлороформе. Зоны А и Е при этом должны быть закрыты стеклом. После подсушивания снимают копии с пластинки и рассчитывают значения R_f и R_S.

В зоне Е снимают слой сорбента в участках, расположенных на одном уровне с пятнами, проявившимися в зонах А и С и помещают в пенициллиновые флаконы. Флаконы маркируют.

При необходимости с оставшейся частью аликвоты А_К проводят подтверждающее химическое исследование.